作者：欧阳瑾，曹志友，王爽 ，雷钧涛
【摘要】 目的观察核桃青皮提取物对c57bl/6小鼠体内lewis肺癌生长的影响。方法复制c57bl/6小鼠lewis肺癌模型，随机分组，分别给予生理盐水、核桃青皮不同浓度的水提物和醇提物治疗，观察肿瘤生长，最后进行统计和分析。结果核桃青皮两种方法所得提取物均对肿瘤有明显的抑制作用，与生理盐水组比较有统计学意义(p<0.05)，且抑制率与浓度呈正相关，浓度为400 mg·ml-1时抑瘤率达85.1%。结论核桃青皮提取物对鼠lewis肺癌的生长有明显的抑制作用。
【关键词】 核桃青皮提取物； lewis肺癌； 肿瘤
肿瘤是威胁人类生命健康的最大杀手，尤其是近年来伴随着经济发展带来的环境恶化，使得全球恶性肿瘤患者的人数大大增加。全世界每年因各种肿瘤导致数百万人死亡。由于化学药物的毒副作用较大，限制了在临床上的广泛应用。近年来，从植物中寻求更为环保和安全的药物替代品越来越受到人们的重视。提取植物的有效成分开发药品已成为当前的研究热点之一。中药对提高肿瘤患者的治疗成功率及改善肿瘤病人的生存质量、延长生命方面都有显著疗效，它的抗肿瘤作用越来越得到国际社会的认可。Www.11665.coM许多药学工作者逐渐把目光转向了植物药的研究，而核桃属植物也因其含有的成分和药理作用而受到越来越多的关注。白桃汤剂为民间祖传秘方，曾为不少病人解除过病痛，临床治愈率达76%，曾在民间广为流传。核桃青皮是白桃汤剂中的主要成分之一，对其提取和分离纯化是吉林省重点课题之一，本研究旨在为该药在临床上的进一步应用提供科学依据。
1 材料
lewis肿瘤细胞株(购于中科院上海细胞库)。健康c57bl/6纯系小鼠雌雄各半，体质量(19±2)g，吉林省长春市生物制品研究所提供。
核桃青皮2008-09采自吉林省磐石县核桃产区，吉林医药学院药学院药学教研室雷钧涛副教授鉴定为胡桃科核桃属植物核桃楸（juglans mandshurica）的外青果皮。自然晾干后，在45℃左右的烘箱中烘干，粉碎过20目筛（孔径0.84mm），然后密封于塑料袋内，置冰箱中备用。
2 方法
2.1 造模将小鼠lewis肺癌细胞置于含10%胎牛血清及dmem的完全培养液中，在37℃、5%co2培养箱中培养，2～3 d更换1次培养液，0.25%胰蛋白酶消化传代。细胞总数达到要求后，台盼蓝拒染法测定活细胞数＞95%，调节细胞浓度为5×106个细胞/ml-1的细胞悬液备用。
取40只小鼠，雌雄各半，体质量（18±1）g，于腋后线第6肋间胸腔接种，每只接种0.2 ml，细胞计数为5×106 个细胞/ml。建立小鼠肿瘤动物模型。
2.2 核桃青皮提取液制备水提法制备核桃青皮提取液：称取1kg核桃青皮粗粉，按料液比1∶4加入蒸馏水，浸泡3d后倾出上清液，再加入新的蒸馏水冷浸，如此处理4次，将4次所得浸提液抽滤、减压浓缩得水提物浸膏110.45 g。
醇提法制备核桃青皮提取液：用95%乙醇代替蒸馏水，按照以上的步骤，得到醇提物浸膏169.83 g。
准确称取醇提浸膏5 g用适当氯仿溶解，定容于50 ml容量瓶，配成100mg·ml-1的溶液。
准确称取水提浸膏5g用适当氯仿溶解，定容于50 ml容量瓶，配成100 mg·ml-1的溶液，用相同的方法配成200 mg·ml-1，300 mg·ml-1，400 mg·ml-1的溶液备用。
2.3 动物分组造模2 d后随机分组，每组8只。生理盐水组(a组)：给生理盐水0.2 ml腹腔注射，1次/d；其它各组分别用不同浓度（b组：100 mg·ml-1；c组：200 mg·ml-1；d组：300 mg·ml-1、e组：400 mg·ml-1）的水提物和醇提物0.2ml腹腔注射，1次/d。各组均连续给药15 d。第17天处死全部小鼠进行指标检测。
2.4 观察项目瘤体积、瘤重 ：用游标卡尺测量瘤体长径和短径，计算瘤体积，瘤体积=0.5ab2 (a长径,b短径)绘制增殖曲线。肿瘤抑制率（%）=(生理盐水组平均瘤重-给药组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重×100%。
2.5 统计学处理 采用spss13．0统计软件进行统计处理。
3 结果
核桃青皮两种方法所得提取物均对肿瘤有明显的抑制作用(p<0.05) 结果见表1～2，且抑制率与浓度呈正相关，浓度为400 mg·ml-1时抑制作用最强烈，虽抑瘤率因提取方法的差异而有区别，但不显著。原因可能是由于提取方法的不同，各提取物有一点差异导致。表1 不同浓度的水提物对小鼠体内lewis肺癌的影响（略）表2 不同浓度的醇提物对小鼠体内lewis肺癌的影响（略）
4 讨论
lewis肺癌是常用的筛选抗肿瘤药物的动物模型。本研究将核桃青皮两种方法所得提取物均用实验治疗lewis肺癌小鼠，并探讨核桃青皮提取物的免疫抑制作用。核桃青皮主要功效是益气养阴、活血消淤，能够杀伤癌细胞，抑制癌细胞的生长。核桃青皮是白桃汤剂方中的主要成分之一，白桃汤剂在民间已取得了很好的疗效。方中甘草、黄芪等补气健脾药物可调节肿瘤患者的免疫机能；白附子等清热解毒药有直接或间接抑制肿瘤细胞的作用，具有较强的抗癌活性，并有直接杀灭肿瘤细胞的作用；现有的免疫抑制剂，如顺铂的选择性极差，通常在抑制免疫反应的同时也抑制细胞吞噬功能，在有效剂量下同时也多有严重的毒副作用。白桃汤剂可选择性地抑制细胞免疫而对体液免疫无影响，并具有一定的免疫调节作用［1］，同时还可增强腹腔巨噬细胞吞噬功能［2］，其机理在于诱导动物机体产生细胞免疫反应，对肿瘤细胞核酸代谢水平有抑制作用，这也是中药对化疗药的优势所在。
水提法、醇提法两种提取方法中，水提法与醇提法对肿瘤的抑制效果相似，但水提法提取得的浸膏相对比醇提法少，选用醇提法在取得的浸膏量上有优势，可能是一些成分不溶于水而溶解于醇的原因。
中药单体及复方所含成分众多，决定了中药具有多靶点作用效应。另外，由于使用剂量、机体的机能状态、药物不同成分、药物配伍等因素的影响，在不同的条件下，针对不同的对象，许多中医药具有促进或抑制机体免疫功能的“双向作用”。这是中药独特而复杂的药性决定的，也是中医辨证论治观点的具体体现［3］。本文对核桃青皮各提取物的具体抑瘤成分只是做了初步的探讨，对其作用方式和作用机制还有待进一步研究。
【参考文献】
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［2］李 红，范晓磊.中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展［j］.医学综述，2003，9（3）：135.
［3］吴小红，刘瓦利．中医药免疫调节的研究概况［j］.北京中医，2005，24(5)：311.
