作者：孟江，周毅生，咸银库，段芳，刘林
【摘要】 目的优选丹参多酚酸最佳提取工艺。方法以丹参多酚酸b和总丹参多酚酸含量为指标成分，对丹参多酚酸提取工艺进行优选。结果优化工艺为：12倍量30%乙醇回流提取3次，1 h/次。丹参多酚酸b和总丹参多酚酸含量分别为57.7%，66.9%。结论该工艺合理，丹参多酚酸成分提取完全，具有较好的经济效益。
【关键词】 丹参； 多酚酸； 提取工艺
abstract：objectiveto optimize the extraction procedure for the salvianolic acids of salvia miltiorrhiza. methodsthe optimum conditions of extraction process for salvianolic acids of salvia miltiorrhiza was selected with the contents salvianolic acid b and salvianolic acid as indexes by experimental design. resultsthe optimal extraction procedure was refluxing extraction of salvianolic acids, and the salvia miltiorrhiza was extracted with 30% ethanol times, 1 hours per time. the contents of salvianolic acid b and salvianolic t were 57.7%，66.9%. conclusionthe optimum preparative procedure is reliable. salvianolic acids were extracted completely, and it has the high economic benefit.
key words：salvia miltiorrhiza； salvianolic acids； extracting procedure
丹参多酚酸是中药材丹参中的水溶性成分，主要成分为丹酚酸、原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、咖啡酸、迷迭香酸等。wWW.11665.COm丹参多酚酸具有显著的抗心肌缺血作用，可降低心脏耗氧量，并能对抗诱导的血小板聚集和抑制血栓的形成。临床试验研究表明，丹参多酚酸对于冠心病、心绞痛，疗效显著、确切，病人使用安全［1］。目前丹参多酚酸是多种丹参制剂的重要原料，其质量好坏与稳定直接关系到制剂的临床疗效。因此本文对丹参多酚酸提取工艺进行优化，以期为对丹参多酚酸制剂的生产开发提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
waters自动进样液相色谱仪，alliance_2966型光电二极管阵列检测器(美国waters)；旋转蒸发仪(上海亚荣仪器厂)；电子分析天平(赛多利斯-startorius/bp211d)；紫外分光光度仪岛津uv-2450。
1.2 材料
丹参药材(四川中江新世界丹参基地)；丹酚酸b对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111562-200605)；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 丹酚酸b的hplc含量测定方法建立
2.1.1 色谱条件
色谱柱 luna 5 μm c18(2) 100a 250 mm×4.60 mm；流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；检测波长：286 nm；柱温：30℃；流速：1 ml/min；进样体积：20 μl，理论塔板数按丹酚酸b计算应不低于2 000。
2.1.2 标准曲线的建立
精密称定丹酚酸b对照品5 mg，加75%甲醇定容至25 ml容量瓶中，得到浓度为0.2052 mg/ml的丹酚酸b对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 ml，稀释定容至10 ml，分别进样10 μl，记录色谱图。以色谱峰面积(y)对丹酚酸b的量(x）作回归，回归方程为：y=954. 41x-60 730, r2 = 0.999 4。丹酚酸b在410.4～2052.0 μg范围内线性关系良好。
2.2 丹参总酚酸含量测定
标准曲线的建立精密称定原儿茶醛对照品5.02 mg，置50 ml棕色容量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得100.4 μg/ml的对照品溶液。分别精密吸取0.2，0.6，1.0，1.4，1.8，2.2，2.6 ml，用nano2-al(no3)3比色法进行比色，测定吸收度，经excel回归软件计算，以原儿茶醛的含量为(x)，以吸收度a为(y)回归方程为：y=0.002 9x-0.007，r2=0.999 4，线性范围为20.08～261.04 μg。
2.3 样品含量测定方法
2.3.1 丹酚酸b的含量
取各供试品溶液过0.45μm微孔滤膜，按照丹酚酸b的测定方法进行测定，计算其含量。
2.3.2 紫外分光光度法测定
丹参总酚酸的含量精密分取供试品溶液上清液10 ml，水浴蒸至干，加水溶解，加0.1 mol/l的hcl溶液稀释定溶于100 ml容量瓶中，过滤，取滤液25 ml,加入5 gnacl至溶解，等体积的乙醚萃取3次，萃取液在水浴上蒸干，残渣用乙醇溶解定溶于50 ml容量瓶中，用nano2-al(no3) 3比色法进行比色，即得吸收度，然后代入标准曲线，即得以原儿茶醛表示的丹参总酚酸的含量。
2.4 提取溶剂的选择
丹参多酚酸可溶于水及不同浓度的甲醇、乙醇溶液［2］，为了选择最佳提取溶剂，我们对水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇作为提取溶剂进行了考察。取100g药材8份，分别加上述4种溶剂加热回流提取3次，30 min/次，合并提取液，过滤取上清液。分别按照“2.3”项下计算丹参酚酸b和丹参总酚酸的含量。结果见表1。结果表明，30%乙醇溶液提取丹酚酸b和总丹酚酸含量均较高，因此选择30%乙醇溶液作为提取溶剂。表1 不同溶剂提取效果的比较（略）
2.5 正交实验实施考察
最佳提取工艺根据文献报道［3］并结合实际，醇提丹酚酸的影响因素有溶剂用量、提取时间、提取次数，为此选择3因素作为考察因素，并结合生产实际，每因素又选取3个水平，按l9（34）正交表安排实验，以丹参多酚酸b和总丹参酚酸含量作为衡量提取效率的双重客观指标，优选最佳工艺，因素水平安排见表2。表2 因素水平（略）
最佳提取条件要满足丹参多酚酸b含量高并且总丹参酚酸含量也高，因此采用加权评分法综合评估丹参酚酸的提取条件。评分标准为：将各项指标除以该列最大值再乘以100，为该项得分。设定丹参多酚酸b含量(x)总丹参多酚酸含量(y)两者的权重系数分别为0.6和0.4，对两项指标进行加权求和。通过公式z=0.6x+0.4y，得到综合评分(z)。实验结果及方差分析见表3～4。表3 正交实验表结果及分析，表4 方差分析（略）。
2.6 结果分析
正交实验方差分析表明，因素a（溶剂量）、因素d（提取次数）对丹参多酚酸的提取有显著影响，而因素c（提取时间）对丹参多酚酸的提取无显著影响。由r j得出影响因素大小顺序为d>a>c，由此得出最佳工艺为a3c2d3，即12倍量30%乙醇回流提取3次，1 h/次。
2.7 验证实验
按照理论最佳工艺a3c2d3，进行重复试验，丹参酚酸b和总丹参多酚酸含量分别为57.7%，66.9%，实验结果一致。
3 讨论
丹参多酚酸一般提取溶剂为水，但水作为溶剂，不仅使水溶性杂质过多的提取出来，而且提取液易发生霉变，故考虑用醇水溶液提取，但醇的浓度也不能过高，否则，脂溶性杂质成分也会过多的提取出来。因此本实验对丹参多酚酸的提取溶剂进行优选，结果显示30%乙醇提取效率较高，丹参多酚酸提取的得率和含量都比较高，同时还易于回收溶剂。
本实验以丹参酚酸b和总丹参多酚酸含量为指标对影响丹参多酚酸提取的提取时间、提取次数和溶剂用量进行优选，并采用加权平均法对结果进行分析，实验结果为丹参多酚酸的工业化生产提供理论和科学依据。
【参考文献】
［1］邓惠英．丹参及其有效成分的药理研究概况［j］．现代医药卫生，2007，23(12)：1812．
［2］李向军，刘敏彦，赵兴茹，等．丹参水溶性成分提取工艺研究［j］．中国中医药信息杂志，2005，12(12)：49．
［3］李子鸿，蒋春飞，李怀国，等．正交试验法优选丹参水溶性成分提取工艺［j］．首都医药，2007，7：59．
