作者：刘智勤，陈鹊汀，朱惠学， 蒋玉凤，李岩，黄启福 

【摘要】  　　目的探讨六君子汤对化疗药物顺铂抗小鼠h22肝癌的增效减毒作用。方法无菌条件下抽取9 d生长良好的腹水为瘤源，按1∶3比例用生理盐水稀释，每鼠以0.2 ml于右侧腋窝皮下接种，24 h后随机分成荷瘤对照组、顺铂组、贞芪扶正胶囊+顺铂组、六君子汤高、中剂量+顺铂组。给药10 d，进行抑瘤率计算，脾脏、肾脏和胸腺重量、肾脏丙二醛（mda）、脾脏一氧化氮（no）、血清尿素氮（bun）和免疫球蛋白等的检测。结果六君子汤可提高顺铂对小鼠肝癌h22的抑瘤率（p﹤0.05），对抗化疗药物所致脾脏、胸腺萎缩，血清igg、igm水平的下降，降低化疗小鼠肾脏mda、脾脏no和血清尿素氮的含量（p﹤0.05或p﹤0.01）。结论六君子汤对化疗药物顺铂抗小鼠h22肝癌具有增效减毒的作用。

【关键词】  六君子汤 肝癌h22小鼠 顺铂 肿瘤化疗

　　abstract：objectiveto observe the chemotherapy-increasing effect and toxicity-decreasing of liujunzi decoction in h22 carcinomatous mice. methodstaking out ascites under asepsis which grew well for 9 days as the source of carcinoma and diluting it with salt water, then injecting 0.2 m1 diluent into the subcutaneous tissue of the right axilla of mice 24 hours after injection, mice were grouped as control group, cisplatin group, zhenqifuzheng capsule combined with cisplatin groups, and liujunzi decoction (high,middle dose) combined with cisplatin groups. after 10 days treatment, the tumor inhibition rate was calculated, the content of malondialdehyde (mda) in kidney , nitric oxide (no) in spleen and the level of serum urea nitrogen(bun) and immunoglobulin(ig) were detected.resultsliujunzi decoction could elevate the tumor-supression rate of cisplatin on h22 carcinomatous mice（p﹤0.05）,antagonize the toxic and side effects of cisplatin the atrophy of spleen and thoracic gland，the decrease of igg and igm. also it could decrease mda in kidney, no in spleen of carcinomatous and serum bun of mice (p﹤0.05 or p﹤0.01）. conclusionliujunzi decoction has the effect of increasing the effect of chemotherapy and decreasing its side-effect of cisplatin in h22 carcinomatous mice.

　　key words：liujunzi decoction；   h22 carcinomatous mice；  cisplatin；   tumor chemotherapy
   
　　化疗是目前肿瘤治疗的主要手段之一，然而化疗常引起如骨髓抑制、免疫力低下等毒副反应，使患者难以坚持治疗。wwW.11665.cOm故如何提高肿瘤组织对化疗的敏感性，减轻化疗毒副反应，是目前在肿瘤治疗领域中愈来愈引起人们重视，并且值得探讨的问题。六君子汤是常用的补益剂，研究表明，此方有增强免疫、抗肿瘤、保护脏器免受有害毒物损伤的作用［1］。当前中医药在肿瘤化疗中的减毒增效作用已被确立，但对六君子汤在肿瘤化疗中的增效减毒作用报道较少，且缺乏系统性和规范性，本研究通过建立h22荷瘤小鼠模型，探讨六君子汤联合化疗药物顺铂（cisplatin）治疗肿瘤是否具有减毒增效作用，以期为该方的临床应用提供一定实验依据。

　　1  材料与仪器

　　1.1  实验动物与瘤株 

　　清洁级昆明小鼠，7～9周龄，雌雄各半，体质量18～22 g，由河北医科大学实验动物中心提供，许可证：scxk(冀)2003-1-003。动物在实验前适应性驯养1周。饲料由河北医科大学实验动物中心提供。实验期间自由采食饮水。腹水型h22肝癌瘤株由河北医科大学实验动物中心提供。

　　1.2  药物 

　　六君子汤主要由人参、白术、茯苓、甘草、陈皮、半夏等药物组成，由河北大学附属医院中药房提供,所有药品均经中药专家鉴定。取上述中药自来水浸泡1 h后，分别加8倍量、6倍量、4倍量的水煎煮3次，时间分别为药液熬开后40，30，20 min，将3次煎煮的药液混合，离心，取上清，80℃水浴浓缩至每毫升含生药0.8 g，高温消毒后置4℃冰箱保存备用。化疗药物：注射用顺铂，山东齐鲁制药有限公司出品(批号：h37021358)。阳性对照药：贞芪扶正胶囊，甘肃扶正药业科技股份有限公司出品(批号：z62020414)。

　　1.3  仪器 

　　雅培c8000型全自动生化分析仪，美国出品。nikon ys2双目生物显微镜。ae240电子天平为梅特勒-托利多仪器有限公司产品。sw-cj-1f超净工作台为苏净集团安泰公司产品。恒温水浴箱为天津市中环实验电炉有限公司出品。cd4-2a离心机为北京医用离心机厂产品。752型紫外可见分光光度计。

　　2  方法

　　2.1  动物模型的建立及分组给药 

　　参照文献［2］建立 h22荷瘤小鼠模型。小鼠接种24 h后随机分成荷瘤对照组、顺铂组、贞芪扶正胶囊+顺铂组、六君子汤高剂量+顺铂组、六君子汤中剂量+顺铂组。荷瘤对照组用生理盐水灌胃，0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。单纯化疗组腹腔注射顺铂 （3.5 mg/kg）0.2 ml/只，1次/d，连续用5 d［3］，同时用生理盐水灌胃，0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。六君子汤高、中剂量组和阳性对照组的化疗药物剂量、给药途径及时间与单纯化疗组相同，中药剂量为0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。各组于瘤细胞接种第2日开始用药，于实验第12天眼球采血后处死小鼠，取脾脏、胸腺和肾脏检测各项指标。

　　2.2  样品的处理和测定

　　2.2.1  抑瘤率计算

　　于实验第12天，将各组小鼠眼球采血后处死，称重，依次用碘酊酒精消毒操作部位皮肤，于超净工作台上，以无菌操作从腋部皮下完整剥取肿瘤组织，剥离干净后于电子天平称瘤体重量并按公式计算抑瘤率［4］。
   
　　公式：抑瘤率（%）=（1-t/c）×100%    （t/c指治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重）

　　2.2.2  脾脏、胸腺和肾脏称重动物处理同“2.1”项，以无菌操作取下脾脏、胸腺和肾脏，电子天平称重。

　　2.2.3  脾脏no检测动物处理同实验“2.1”项，以无菌操作取下脾脏，电子天平称重，用生理盐水将脾脏制成10%组织匀浆，以双缩尿法定蛋白，然后采用硝酸还原酶法检测no（按南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书操作）。

　　2.2.4  血清免疫球蛋白和bun的检测 

　　动物处理同“2.1”项，雅培c8000型全自动生化分析仪检测免疫球蛋白和bun。

　　2.2.5  肾组织中丙二醛( mda )的检测

　　冰生理盐水洗净肾脏，滤纸吸干，称取0.1 g肾组织，用冰生理盐水1∶9稀释后研磨成10%的组织匀浆，按南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书操作检测肾组织中mda的含量。

　　2.3  统计学处理各组数据以±s表示，采用spss11.5 for windows统计软件进行单因素方差分析（one-way anova）。

　　3  结果

　　3.1  一般情况 

　　瘤细胞接种后3 d，于小鼠右腋下接种部位可触及米粒大小的瘤结节，之后逐渐长大。单纯化疗组及六君子汤各治疗组小鼠肿瘤生长的势头均不及荷瘤对照组。单纯化疗组及各治疗组小鼠。在腹腔注射顺铂后，状况明显不及荷瘤对照组，小鼠出现毛无光泽而稀疏脱落，少动，稀便，懒于觅食，且这种状况日益加重，尤其是单纯化疗组明显。

　　3.2  六君子汤对化疗小鼠体质量增长的影响 

　　结果见表1。表1  六君子汤对化疗小鼠体质量增长的影响（略）
　　
　　3.3  六君子汤对化疗小鼠瘤重及抑瘤率的影响　

　　结果见表2。表2  六君子汤对顺铂治疗荷瘤小鼠的增效作用（略）

　　2.4  六君子汤对化疗小鼠免疫器官重量的影响 

　　结果见表3。表3  六君子汤对化疗小鼠免疫器官重量的影响（略）

　　3.5  六君子汤对化疗小鼠脾脏no的影响 

　　结果见表4。表4  六君子汤对化疗小鼠脾脏no的影响（略）

　　3.6  六君子汤对化疗小鼠血清免疫球蛋白的影响 

　　结果见表5。表5  六君子汤对化疗小鼠血清免疫球蛋白的影响（略）

　　3.7  六君子汤对化疗小鼠肾脏系数、bun水平和肾组织中丙二醛的影响

　　结果见表6。表6  六君子汤对化疗小鼠肾脏系数、血清bun水平和肾组织中丙二醛的影响（略）
　　
　　4  讨论
   
　　中医药在肿瘤化疗中的增效减毒作用，是目前肿瘤综合治疗研究中的热点之一，也是中医中药研究热点之一。探讨提高肿瘤化疗疗效，减轻其副作用的组方药物，在临床上，具有重要的意义。六君子汤源自《妇人良方》，系在四君子汤方的基础上加陈皮、半夏，功擅健脾止呕，主治脾胃气虚兼有痰湿，症见恶心呕吐、食欲不振、胸脘痞闷、四肢无力、面色萎黄等症状，其所治疗诸症恰恰为化疗中常见。现代药理实验证明［1］六君子汤中除半夏外，均具有增强机体免疫功能，提高巨噬细胞吞噬功能的作用；人参、白术、茯苓、半夏均能抑制肿瘤体积和重量增长，降低癌组织的转移和侵袭；甘草除具有提高免疫功能外，且能促进小鼠脾细胞干扰素的产生，对小鼠肝脏中nk细胞活性有显著增强作用。本实验结果显示，六君子汤高剂量组能增强顺铂对h22小鼠的抑瘤活性，与单用顺铂相比，统计学差异显著，提示六君子汤对顺铂抗移植肿瘤生长具有一定增效作用。
   
　　肿瘤的存在不仅抑制机体的细胞免疫功能，也抑制了体液免疫功能［5］,而化疗药物应用可加重机体的免疫抑制,因此提高肿瘤患者的免疫功能，尤其是化疗后出现的严重免疫功能抑制，成为抗肿瘤治疗的一个主要方面。no是较小的生物活性分子，对机体免疫功能的影响是多方面的，一般认为，no的产生常伴有免疫功能的抑制，表现为有丝分裂减低、巨噬细胞功能低下、淋巴细胞增殖减慢、抗体产生及多种细胞因子分泌受抑等［6］。本实验结果表明，单纯化疗组小鼠no较荷瘤对照组高，说明化疗药的毒性作用可刺激脾脏巨噬细胞产生no，从而引起机体免疫功能受抑，六君子汤合用顺铂的小鼠no低于单纯化疗组，实验还发现六君子汤可对抗化疗药物顺铂所致的脾脏和胸腺的萎缩，免疫球蛋白水平下降，说明六君子汤能促进机体免疫功能的恢复。
   
　　顺铂是能与肿瘤细胞dna共价结合的金属化合物,在临床化疗中应用广泛,目前已被公认为治疗睾丸癌、卵巢癌和宫颈癌的一线药物，但顺铂作为一种细胞毒物,临床用药产生的副作用较多且严重。研究表明,顺铂具有重金属类物质的毒副作用,可引起严重的肾、胃肠道和神经毒性,其中最主要的是对肾脏的毒性作用,往往因严重的肾功能损伤而限制了药物的使用［7］。丙二醛（mda）是脂质过氧化反应链中的终产物，它的产生一方面与脂质过氧化侵害有关，另一方面与机体抗氧化系统酶活性有关。因而测试mda的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反应出细胞损伤的程度。本实验结果表明:六君子汤联用顺铂后肾组织中mda值明显低于顺铂组，提示六君子汤可减少过氧化产物mda的生成，抑制脂质过氧化，从而防止或减轻肾脏的过氧化损伤，本实验还发现荷瘤小鼠用顺铂治疗后，血清bun明显增高，而高剂量六君子汤与顺铂合用的小鼠，血清bun有所降低，提示六君子汤对顺铂引起的肾毒性有一定防治作用。
   
　　综上所述，六君子汤与顺铂合用可增强其抑制肿瘤生长的作用，同时减轻了顺铂所致的免疫功能低下和肾脏损害，从而起到了增效减毒作用，这为六君子汤在肿瘤化疗中的应用提供了实验依据。

【参考文献】
  　　［1］沈映君.中药药理学［m］.北京：人民卫生出版社，2000:958.

　　［2］陈鹊汀，刘智勤，蒋玉凤，等.当归补血汤对化疗药物5-fu增效减毒的实验研究［j］.北京中医药大学学报，2007，30（11）：757.

　　［3］李革新,姚书杰,陆春伟，等.顺铂肾毒性的实验研究［j］.中国工业医学杂志，2004, 17(3):186.

　　［4］陈奇.中药药理研究方法学，第2版［m］.北京:人民卫生出版社,2006:1017.

　　［5］hadden j w. immunodeficiency and cancer prospects for correction［j］. lnt immunopharmacol, 2003, 3(8): 1061.

　　［6］钟慈生，孙安阳.一氧化氮的生物医学［m］.上海：上海医科大学出版社，1997：90.

　　［7］刘鲁明, 杨宇飞.肿瘤科中西药物手册［m］.北京：人民卫生出版社，2003: 32.