作者：马娜，王建红 闵建新，王敏璋
【摘要】 目的研究肾阳虚大鼠垂体-靶腺轴功能的动态变化，探讨肾阳虚证的动态变化规律。方法60只sd大鼠，随机分为正常组和模型组。模型组用氢化可的松注射液后肢肌肉注射，连续29 d。分别于第15，23，30天取大鼠血清放射免疫法测定垂体-靶腺轴激素(tsh，t3，t4，fsh，lh，t，acth，cort)的含量，同时取垂体和靶腺(甲状腺、肾上腺、睾丸)称取重量。结果肾阳虚模型组第15，23，30天垂体-靶腺轴激素水平不断下降，且垂体和靶腺激素下降程度一致;肾阳虚模型组在第15～30天出现垂体-靶腺轴激素水平的降低，垂体、靶腺重量减轻;与模型组15天比较，模型组中期(23天)垂体-肾上腺轴与垂体-性腺轴的波动幅度较垂体-甲状腺轴明显。结论肾阳虚时，存在垂体-靶腺三轴功能的同时低下，相对于垂体-甲状腺轴，垂体-性腺轴和垂体-肾上腺轴激素水平变化更敏感。
【关键词】 肾阳虚大鼠; 垂体-靶腺轴; 功能; 动态变化
abstract：objectiveto observe the dynamic changes of function on the pituitary-target gland axises of the kidney-"yang" dificient rats,and to explore the change law of kidney "yang" dificient syndrome.methodsthe rats were given hydrocortisone by intramuscular injection for 30 days to make dificient of kidney-"yang" models. hormone contents(tsh,t3,t4,fsh,lh,t,acth,and cort)in serum of the pituitary-target gland axises were detected by radioimmunoassay on day 15,day 23 and day 30. then pituitary, thyroid gland, adrenal gland and testis were measured.resultsin model group, from day 15 to day 30, the hormones of pituitary-target gland axises were decreased unceasingly, and the drop degree of pituitary and target glands was consistent. descendent hormone of the pituitary-target gland axis,decreased target gland and deteriorated pathologic morphology in model group occurred from day 15 to day 30;compared with day 15,on day 23,the homones of pituitary-sex gland axis and pituitary-adrenal gland axis fluctuated at higher level than pituitary-thyroid gland axis.conclusionthe study indicates that the dynamic hypofunction of pituitary-target gland axises arose in the kidney "yang" dificient rats, the hormone changes of pituitary-sex axis and pituitary-adrenal gland axis are more sensitive than those in pituitary-thyroid axis.
key words：kidney-"yang" deficient rats; pituitary-target gland axises; function; dynamic changes
自明清以来，中医一直认为肾为脏腑之本，十二经之根，先天之本在于肾。wWW.11665.CoM肾阳主导一身之阳气，火衰其本则阳虚之证迭出。因此肾阳虚证一直是中医的研究重点。研究证实，肾阳虚与现代医学的神经内分泌系统有关，肾阳虚证在下丘脑-垂体-靶腺(肾上腺皮质、甲状腺、性腺)轴有不同环节、不同程度的功能紊乱[1]。对于肾阳虚大鼠垂体-靶腺轴的研究，我们具备良好的实验基础[2～5]。随着研究的深入，发现中医的“证”是一种综合的功能态，既是相对稳定的，又是动态、可发展、可转化的。为了更全面研究肾阳虚时的病理变化，本文应用氢化可的松肌肉注射这一常用方法复制大鼠肾阳虚模型，动态观察模型早期(15天)，中期(23天)，晚期(30天)的垂体-靶腺轴激素以及靶腺形态学变化。
1 材料
1.1 动物体重200～250 g的健康sd雄性大鼠，合格证号：0022036，许可证号：scxp(沪)2003-0002，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，室温(20±2)℃，自然光照，自由进水进食。
1.2 试剂与药品 0.9%氯化钠注射液，上海长征富民药业华中有限公司产品，产品批号：05062115;氢化可的松注射液，天津金耀氨基酸有限公司产品，批准文号：国药准字h12020886;促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone，tsh)、三碘甲腺原氨酸(3,5,3′-triiodothyronine，t3)、四碘甲腺原氨酸(thyroxine，t4)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone ，acth)、皮质醇( cortisol ，cort)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone，fsh)、黄体生成素(luteinizing hormone，lh)、睾酮(testosterone，t)，放射免疫试剂药盒由北京北免东雅生物技术研究所提供。
2 方法
2.1 分组与造模
2.1.1 动物分组 取雄性sd大鼠60只，适应环境5 d，随机分为正常对照组，肾阳虚模型组，每组30只。
2.1.2 造模方法[6]正常对照组：用生理盐水(0.9%的氯化钠溶液)0.3 ml后肢肌肉注射，每天1次，自由饮水、饮食，连续29 d;肾阳虚模型组：氢化可的松注射液充分混匀，按2.5 mg/100 g后肢肌肉注射，1次/d。自由饮水、饮食,连续29 d。
2.2 生物学指标的测试 为了获得可靠实验数据，对动物采取平行处理，两组动物分别在第15天(10只)，23天(10只)，30天(10只)处死，取动物血清用放射免疫分析法检测样品中tsh，t3，t4，fsh，lh，t，acth，cort的含量。
2.3 统计学方法 各组数据均以±s表示,组间比较用t检验,在spss10.0软件上完成。
3 结果
不同时期动物出现不同程度的体重下降，活动减少，反应迟钝，喜扎堆，畏寒喜暖，体毛枯萎，肛周污染，采食量饮水量减少等症状。模型组15 d表现为轻度，23 d加重，30 d最严重。生物学指标测定结果见表1～4。表1 大鼠血清tsh，t3，t4的动态变化表2 大鼠血清fsh，lh，t的动态变化表3 大鼠血清acth，cort的动态变化表4 垂体、睾丸、甲状腺与肾上腺重量的变化与正常组比较， **p<0.01;与模型组15 d比较，△△p<0.01;与模型组23 d比较，▲▲p<0.01;n=10
4 讨论
很多文献报道，肾阳虚存在下丘脑-垂体-靶腺轴的功能紊乱。虽然目前的研究已经达到分子基因水平，但是对垂体-靶腺轴的研究主要集中在对一个轴或两个轴的研究，如有研究发现肾阳虚大鼠垂体促甲状腺激素(tsh)细胞、甲状腺滤泡上皮细胞出现内质网、高尔基体扩张，线粒体空化，细胞变形，核的形态改变等超微结构的损伤[7];肾阳虚时下丘脑、血淋巴细胞[ca2+ ]i和血清钙的显著升高，导致ca2+信号的异常，使下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱[8]。本实验通过对垂体-靶腺三轴各激素水平的测定、靶腺重量称重，并用相关统计学方法进行分析，较全面观察肾阳虚时的病理变化。
肾阳虚证候形成的病因病机多为先天禀赋不足，或久病及肾，有一个慢性的疾病发展过程,因而在动物实验中完全模拟人的肾阳虚证候是一项艰巨而复杂的工作，必须考虑到中医证的发展和变化。本课题前期研究已经提示较理想的肾阳虚动物模型时间应为15～30 d[9]。本实验采取造模30 d，动态观察第15，23，30天时动物的病理变化，研究发现，垂体分泌的促激素和靶腺激素在15，23，30 d同时下降，且下降幅度一致。肾阳虚大鼠垂体重量的变化到30 d也和靶腺重量的变化一致。这说明肾阳虚时，垂体和靶腺在功能和形态上同时受损害，且受损程度相同。这和文献报道肾阳虚大鼠血浆糖皮质激素水平降低是由于垂体前叶功能受损所致的结论一致[10]。
研究还发现肾阳虚时，存在垂体-靶腺三轴功能的同时低下，垂体-性腺轴和垂体-肾上腺轴激素水平变化敏感，中期(23 d)与早期(15 d)比较，指标明显下降，有极其显著差异，p<0.01(见表2～3)。垂体-甲状腺轴激素水平变化不敏感，中期(23 d)和早期(15 d)无显著差异，到了晚期(30 d)，tsh，t3，t4才与15d、23d有差异，见表1。这说明垂体-性腺轴和垂体-肾上腺轴功能低下是反映肾阳虚证比较敏感的指标。本课题所做的靶腺重量测定也支持这一结论(见表4)，其机制有待进一步研究。
【参考文献】
[1] 沈自尹.肾的研究(续集)[m].上海:上海科学技术出版社,1990:313.
[2] 李炳如,佘运初.补肾中药对下丘脑-垂体-性腺轴功能的影响[j].中医杂志,1984,25(7):63.
[3] li bingru,she yunchu.the effect of kindeyinvigorating chinese traditional drugs on the functions of the hypothalamus-pituitary-gonads axis[j].j,tcm, 1985,5(2):119.
[4] 秦达念,佘白蓉,佘运初.菟丝子黄酮对实验动物及人绒毛组织生殖功能的影响[j].中药新药与临床药理,2000,11(6):349.
[5] da-nian qin.effects of flavonoids of semen cuscutae on the reproductive system in male rats[j].asian journal of andrology,2000,2(2):99.
[6] 宋春风,尹桂山,侯 洁，等.补肾中药对肾阳虚大鼠垂体-肾上腺超微结构的影响[j].中医药研究,2001,17(2):41.
[7] 宋春风，尹桂山，李 恩，等.补肾益气中药对肾阳虚大鼠垂体-甲状腺超微结构的影响[j].中国中医基础医学杂志，1999，5(9)：22.
[8] 宋春风,郑师陵,吕佩源，等.补肾中药对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴、血淋巴细胞ca2+和血清钙的影响[j].中国中医基础医学杂志,2002,8(5):34.
[9] 王建红,伍庆华,刘海云，等.肾阳虚大鼠垂体-甲状腺轴功能动态分析[j].辽宁中医杂志,2006,33(6):751.
[10] 睢 岩,史恒军,候 颖.养阴抗毒胶囊对糖皮质激素致阴虚大鼠垂体acth细胞超微结构的影响[j].山东中医药大学学报,2006,30(6):486.
