【摘要】 目的优选茯苓多糖的提取方法。方法以茯苓多糖为评价指标，采用正交实验法对茯苓多糖加热回流及超声波提取工艺进行优选，并将两种方法进行比较。结果两种方法的提取得率有显著性差异(p<0.05)。结论超声波提取茯苓多糖较优。
【关键词】 茯苓; 正交实验法; 超声波提取; 加热回流提取
abstract：objectiveto optimize extraction method of pachyman in poria cocos (schw.) wolf. methodsthe orthogonal test was used to optimize extraction technique of pachyman in poria cocos(schw.) wolf by ultrasonic and heating reflux with the content of pachyman in poria cocos(schw.) wolf as the index, and the two extraction methods were compared.resultsthere were significant differences between the two methods (p<0.05) with the extraction rate.conclusionultrasonic extraction is better than heating reflux extraction.
key words：poria cocos(schw.)wolf; orthogonal test; ultrasonic extraction; heating reflux extraction
茯苓poria cocos (schw.) wolf又称茯菟、茯灵、松薯等, 为多孔菌科(polyporaceae) 真菌茯苓的干燥菌核，在我国资源丰富，全国各地均有栽培，主产于云南、安徽、湖南等省。wWw.11665.com茯苓是一味使用历史悠久的中药，在《神农本草经》中被列为上品，谓其“主胸胁逆气，利小便，久服安魂宁神，不饥延年。”《本草纲目》也记载：茯苓“治头风虚眩，暖腰膝，主五劳七伤。”历代医家均肯定茯苓既有滋补强身作用，又有渗湿利水、益脾和胃、宁心安神之功。茯苓药性缓和，补而不峻，利而不猛，既能扶正，又可祛邪，能治疗脾胃虚弱、遗精早泄、心悸失眠、健忘多梦、小便不利、呕吐腹泻等症。其主要有效成分茯苓多糖[1]是一种非特异性免疫促进剂，其不仅能够提高机体的抗病能力，还有较强的抗癌作用[2]。为了提高茯苓多糖的提取得率，我们以茯苓多糖为考察指标，进行加热回流和超声波提取茯苓多糖的对比实验。现报道如下。
1 仪器与药品
uv-2550型紫外可见分光光度仪(日本岛津)，超声波清洗器(kq-100db型，江苏昆山)，fa1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)。茯苓(湖南靖州)，葡萄糖标准品(供含量测定用，批号110833-200503，中国药品生物制品检验所)，苯酚，氢氧化纳，冰乙酸，无水乙醇，丙酮，碳酸氢纳，浓硫酸和铝片等。
2 方法及结果
2.1 正交实验设计及结果[3]根据茯苓多糖的理化性质，以及大生产中的可行性原则(减少工序，降低成本)，选取提取次数、药品粒度、固液比(提取溶液为0.5%的naoh溶液)、提取时间为考察因素，进行l9(34)正交实验，以茯苓多糖的含量(用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定)为评价指标，优选两种方法的最佳工艺。因素水平见表1～2，实验设计与结果见表3～4，方差分析见表5～6。
2.2 实验结果分析
2.2.1 加热回流提取茯苓多糖由表3可知，极差中c项最大，d项最小，即该4个因素对用加热回流提取多糖产量的影响程度由大到小为：c>a>b>d，表明在加热回流的实验条件下，就茯苓多糖的产率而言，各因素对其影响的主次顺序是：固液比>药品粒度 >提取时间>提取次数，而由表5知因素c对用该方法提取茯苓多糖有显著影响，就多糖产率而言所选最适宜的提取工艺条件为：a2b3c2d3。综合考虑，用加热回流的方法提取茯苓多糖的最佳工艺条件为：药品粒度为40目，提取时间为100 min，固液比为1∶12，提取次数为2次。
2.2.2 超声提取茯苓多糖根据表4可以知，极差中b项最大，c项最小，即该4个因素对用超声提取茯苓多糖的产量的影响程度由大到小为：b>d>a>c，表明在超声提取该实验条件下，各因素对其影响的主次顺序是：提取时间>提取次数>药品粒度>固液比，由表6知因素b和d对用该方法提取茯苓多糖有极显著的影响，因素a对用该方法提取茯苓多糖有显著影响，就多糖产率而言所选最适宜的提取工艺条件为：a1b2c2d3。综合考虑：用超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件为：药品粒度为20目，提取时间45 min，固液比为1∶10，提取次数为3次。
2.3 最佳提取工艺验证在加热回流提取最佳条件下(药品粒度40目，提取时间为100 min，固液比为1∶12，提取次数为2次)进行3次重复实验。结果见表7。表1 因素水平设计(加热回流法)表2 因素水平设计(超声提取法) 表3 加热回流提取实验结果表4 超声提取实验结果表5 加热回流法方差分析结果表6 超声提取法的方差分析结果表7 加热回流提取茯苓多糖最佳条件验证实验从表7可看出，加热回流提取茯苓多糖中最佳提取工艺条件具有较好重复性，茯苓多糖的产率较高，说明该最佳提取工艺是合理可靠的。在超声提取最佳条件下(药品粒度为20目，提取时间45 min，固液比为1：10，提取时间为3次)进行3次重复实验。结果见表8。表8 超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件验证实验从表8可看出，超声提取茯苓多糖中最佳提取工艺条件具有较好重复性，茯苓多糖的产率较高，说明该最佳工艺条件是合理、可靠的。
2.4 加热回流提取工艺和超声提取工艺比较对加热回流提取工艺和超声提取工艺的最佳提取工艺进行t检验，得t=5.4121，α=0.05，f=3+3-2=4， t0.05/2 (4)=2.776。故︱t︱> t0.05/2,即p<0.05，所以两种方法提取茯苓多糖有显著性差异。由实验结果可知，就茯苓多糖的提取得率而言，超声波提取法优于加热回流提取法。
3 讨论
影响茯苓多糖的提取工艺的因素有：药品粒度、提取时间、固液比、提取次数、提取温度等。在本次的实验中，采用的是加热回流和超声波提取的方式，在回流提取中温度是一定值，故不列入考察范围之中。
本实验用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定茯苓多糖。精密度实验、重复性实验、稳定性实验、回收率实验等结果表明，用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定茯苓中的茯苓多糖含量合理可行，且该方法快速、准确、重复性较好。
本实验考察了影响药材有效成分提取的4个主要因素：药材粒度、固液比、提取时间，提取次数来研究茯苓多糖的提取，并对用传统加热回流和超声提取茯苓多糖的实验均进行了最佳工艺的验证，并对其因素的显著性影响进行了分析，得到了加热回流和超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件，并对它们进行了统计学处理，从而得到了从茯苓中提取茯苓多糖的较为理想的方法——超声提取法。
【参考文献】
[1] 胡 斌，杨益平，叶 阳.茯苓化学成分研究[j].中草药，2006，37(5)：655.
[2] 张 璐,刘 强.茯苓多糖制备工艺及药理作用研究进展[j].中国实验方剂学杂志，2006，12(4)：61.
[3] 赵子剑，连 琰，王国全，等. 正交实验法优化二氧化碳超临界流体萃取茯苓多糖工艺参数[j].时珍国医国药，2008，19(7)：1628.
