【摘要】 目的观察瑶药“猛老虎”对大鼠免疫性肝纤维化的影响。方法采用猪血清腹腔注射建立大鼠免疫性肝纤维化模型，观察“猛老虎”对实验大鼠血清ⅲ型前胶原（pcⅲ）、层粘蛋白（ln）、透明质酸（ha）、干扰素-γ（ifn-γ）及肿瘤坏死因子-α（tnf-α）的影响。结果“猛老虎”醋酸乙酯部位（尤其是高剂量组）能明显减少大鼠血清中pcⅲ，ln，ha和tnf-α的含量，促进ifn-γ的增加，效果与秋水仙碱相当。结论“猛老虎”具有抗肝纤维化作用，其抗肝纤维化活性的有效部位主要存在于醋酸乙酯部位。
【关键词】
猛老虎 白花丹 肝纤维化 药效学 effects of yao nationality herb named “menglaohu” on pcⅲ, ln, ha, ifn-γ and tnf-α in immunity hepatic fibrosis in rats
chen shaofeng, huang linyun, zhong ming, yu shengmin, yang zenyan
(guangxi institute of nationality medicine, nanning, guangxi 530001, china)
abstract：objectiveto study the effect of “menglaohu” on the hepatic fibrosis rats. methodsthe model rats of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of porcine serum, and the effect of “menglaohu” on pcⅲ, ln, ha, ifn-γ and tnf-α in rat was observed.resultsethyl acetate part of “menglaohu” ( especially in the high dose group ) could decrease the contents of pcⅲ, ln, ha, ifn-γ and tnf-α in serum, and increase the content of ifn-γ. its effect was equivalent to that of the colchicine.conclusioneffective part in “menglaohu” of anti-hepatic fibrosis mainly exists in ethyl acetate part.
key words：menglaohu; plumbago zeylanica; hepatic fibrosis; pharmacodynamics
猛老虎为白花丹科植物白花丹plumbago zeylanica l.的全草，为瑶族民间常用特色药材，主要用于治疗风湿关节疼痛、骨质增生、跌打损伤、肝硬化和肝脾肿大等。www.11665.coM具有散淤消肿、祛风除湿、消炎止痛和杀虫解毒作用［1］。肝纤维化是慢性肝病重要的病理特征，也是进一步向肝硬变发展的主要中间环节。肝纤维化的主要发生机制是肝细胞外基质(ecm)在肝内异常增生和过度沉积的结果。ha，ln，pcⅲ是血清ecm的重要成分。本项研究采用猪血清腹腔注射建立大鼠免疫性肝纤维化模型，观察猛老虎对免疫性肝纤维化大鼠的影响。
1 材料
1.1 药材的制备
猛老虎采自广西金秀瑶族自治县，经广西民族医药研究所戴斌主任药师鉴定为白花丹科植物白花丹plumbago zeylanica l.的全草。取本品粗粉用70%乙醇回流提取得醇提物，拌硅藻土后依次用石油醚、醋酸乙酯、乙醇回流分离，回收溶剂后分别得到石油醚、醋酸乙酯、乙醇和水溶4个部位。实验前配至所需浓度。
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1.2 药品与试剂
血清pcⅲ，ln，ha试剂盒：购自上海海研医学生物技术中心，批号：20070201；ifn-γ和tnf-α试剂盒：购自上海生工生物工程技术服务有限公司，批号：20070126。秋水仙碱：sigma进口分装。 猪血清：从肉联厂取新鲜猪血，离心制血清，滤过除菌，分装放冰箱备用。
1.3 动物
购自广西医科大学实验动物中心，spf级wistar大鼠（生产许可证号：scxk桂2003-0003），体重（180±12）g，雌雄各半。动物分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料。动物室温度（24±2）℃，相对湿度50%～60%。
2 方法
2.1 动物分组与给药方法 将大鼠称重后随机分为15组，每组10只。分别为：猛老虎石油醚部分高剂量组（30 g生药/kg），中剂量组（15 g生药/kg），低剂量组（7.5 g生药/kg）；醋酸乙酯部位高剂量组（30 g生药/kg）、中剂量组（15 g生药/kg）、低剂量组（7.5 g生药/kg）；乙醇部位高剂量组（30 g生药/kg）、中剂量组（15 g生药/kg）、低剂量组（7.5 g生药/kg）；水溶部位高剂量组（30 g生药/kg）、中剂量组（15 g生药/kg）、低剂量组（7.5 g生药/kg）；秋水仙碱阳性对照组（0.1 mg/kg）；模型对照组和空白对照组。除空白对照组外，其余各组以猪血清为造模剂，腹腔内注射，1 ml/只，2次/周，连续8周，在造模的同时各组按上述方案灌胃（ig.）给药，1次/d，连续8周，模型对照组和空白对照组ig.以等量的蒸馏水［2］。
2.2 观察项目及方法
于实验第8周未，各组动物40 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，4 000 r/min离心10 min，取上清液备相关检测。
3 结果
各组对大鼠血清pcⅲ，ln，ha，ifn-γ和tnf-α含量的影响具体结果见表1。表1 猛老虎各提取部位对免疫性肝纤维化大鼠血清pcⅲ，ln，ha，ifn-γ和tnf-α含量的影响(略)
3.1 对pcⅲ含量的影响石油醚部位高、低剂量组，醋酸乙酯部位高剂量组，秋水仙碱阳性对照组和空白对照组与模型对照组比较，均有显著性差异（p<0.05），其余各组与模型对照组比较，均无显著性差异（p>0.05）。
3.2 对ln含量的影响醋酸乙酯部位高、中剂量组，秋水仙碱阳性对照组和空白对照组与模型对照组比较，均有显著性差异（p<0.05或p<0.01），其余各组与模型对照组比较，均无显著性差异（p>0.05）。
3.3 对ha含量的影响醋酸乙酯部位高、中、低剂量组，乙醇部位高
、中、低剂量组，秋水仙碱阳性对照组和空白对照组与模型对照组比较，均有显著性差异（p<0.05，p<0.01或p<0.001），其余各组与模型对照组比较，均无显著性差异（p>0.05）。
3.4 对ifn-γ含量的影响醋酸乙酯部位高、中剂量组，秋水仙碱阳性对照组和空白对照组与模型对照组比较，均有显著性差异（p<0.05或p<0.01），其余各组与模型对照组比较，均无显著性差异（p>0.05）。
3.5 对tnf-α含量的影响醋酸乙酯部位高剂量组、秋水仙碱阳性对照组和空白对照组与模型对照组比较，均有显著性差异（p<0.05或p<0.001），其余各组与模型对照组比较，均无显著性差异（p>0.05）。
经对上述实验结果进行统计分析，我们发现猛老虎醋酸乙酯部位（尤其是高剂量组）能明显减少大鼠血清中pcⅲ，ln，ha和tnf-α的含量，促进ifn-γ的增加，效果与秋水仙碱相当。由此判断猛老虎具有抗肝纤维化活性的有效部位主要存在于醋酸乙酯部位。
4 讨论
瑶药猛老虎为广西瑶族民间常用特色药材，用于治疗肝硬化和肝脾肿大等。关于其对肝纤维化的实验研究还未见文献报道。我们采用猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型，观察猛老虎4个提取部位对肝纤维化大鼠血清中pcⅲ，ln，ha，ifn-γ及tnf-α的含量影响。
反复给大鼠腹腔内注射猪血清，可通过免疫反应诱导肝纤维化。本实验结果显示，猪血清造模8周后，模型对照组大鼠全部形成肝纤维化。
经对上述实验结果进行统计分析，我们发现猛老虎对猪血清诱导的免疫性肝纤维化的大鼠各个指标都有不同程度的影响。猛老虎的石油醚部位能减少大鼠血清中pcⅲ的含量，对大鼠血清中ln，ha，ifn-γ及tnf-α的含量影响不显著；醋酸乙酯部位（尤其是高剂量组）能明显减少大鼠血清中pcⅲ，ln，ha和tnf-α的含量，促进ifn-γ的含量增加，效果与秋水仙碱相当；而乙醇部位和水溶部位对大鼠血清中pcⅲ，ln，ha，ifn-γ及tnf-α的含量影响不显著。提示“猛老虎”具有抗肝纤维化作用，其抗肝纤维化活性的有效部位主要存在于醋酸乙酯部位。下一步我们将对猛老虎的醋酸乙酯部位开展进一步的提取分离、纯化、鉴定及相关的药效学研究工作。
【参考文献】
［1］江苏新医学院．中药大辞典［m］.上海：上海科学技术出版社，1986：711.
［2］于世赢，贲长恩，杨美娟，等．免疫性和化学性损伤肝纤维化动物模型的比较［j］.实验动物科学与管理，1995，12(4)：5.
