摘要】 目的 对大鼠血管性痴呆双侧颈总动脉永久性结扎模型（permanent bilateral common carotid artery occlusion，2vo）进行改良，提高模型动物存活率。方法 采取改良造模方法（间隔3天分2次结扎双侧颈总动脉）和传统的2vo方法（同时结扎双侧颈总动脉）建立血管性痴呆模型，观察并比较2种方法大鼠的成活率和学习记忆能力差异。 结果 术后60d， 改良模型组动物存活率（80.0%）明显高于传统模型组（45.0%）（p<0.01）。2个模型组大鼠学习记忆能力无显著性差异（p>0.05），而均显著低于假手术对照组（p<0.01）。 结论 改良2vo法是建造大鼠血管性痴呆模型的理想方法。
【关键词】 动物模型；血管性痴呆；morris水迷宫；大鼠
improvement of vascular dementia model in rats
zheng min, zhao ji, chen hongguang,et al
（centralab and department of pharmacology,xianning college,xianning hubei 437100,china）
abstract：objective to establish a better permanent bilateral common carotid artery occlusion method which is used to establish the vascular dementia model and increase survival rate of the model animals.methods the bilateral common carotid arteries were occluded in two times operation at 3 days interval for improved method or,blocked simultaneously at one surgery for traditional one.the differences between the two methods about the survival rates of the rats,and the learning and memory ability were compared.results 60 days after the last operation,the survival rate of the improved model group animals(80%) was much higher than that of the traditional group animals(45%) (p<0.01).the learning and memory ability of both model groups showed no statistical difference (p>0.05),and was decreased as compared to the control group(p<0.01).conclusion the improved permanent bilateral common carotid artery occlusion is a better method to establish the vascular dementia model than the traditional one.
key words： animal model；vascular dementia；morris water maze；rat
双侧颈总动脉永久性结扎模型是血管性痴呆研究中常用的模型之一[1]。WWw.11665.COM传统方法因双侧颈总动脉同时永久性结扎，对动物打击过大，动物死亡率高，导致实验成本升高，标本获取困难，实验周期延长。我们拟对传统方法进行改良，降低动物死亡率，同时观察其行为学指标的变化。
1 材料与方法
1.1 动物及仪器
健康雄性wistar大鼠45只，体质量220±20g，购于湖北省实验动物研究中心（合格证号为0001450）。mt200 morris水迷宫视频分析系统，成都泰盟科技有限公司。
1.2 实验方法
大鼠随机分为3组：假手术对照组（10只）、改良模型组（15只）及传统模型组（20只）。具体实验方法如下。
改良模型组：大鼠术前12h禁食，自由饮水。以10%水合氯醛（350mg/kg，ip）麻醉后，将大鼠仰卧位固定于鼠台，颈部皮肤剪毛备皮，碘伏酒精常规消毒。切口位于颈正中线左侧旁开0.5cm处，长约1cm。钝性分离皮下组织后，于切口正下方的斜方肌与气管夹角处可见颈总动脉搏动。分离出颈总动脉后，以4号丝线双重结扎。术中动作轻柔，避免钳夹和过分牵拉迷走神经，注意无菌原则。行间断缝合。术后3d，每天以碘伏消毒伤口及周围皮肤。3d后于颈正中线右侧旁开0.5cm处切开，进行相同手术。
传统模型组：大鼠麻醉、固定，取颈正中切口，切口长约1.5cm。钝性分离皮下组织，于一侧肌肉间隙中分别分离出颈总动脉，以4号丝线双重结扎。完成一侧后，进行另外一侧。其余同改良方法。
假手术对照组：双侧颈总动脉不结扎，余同传统模型组。
1.3 指标测定
术后60d观察大鼠成活率以及学习记忆成绩。使用morris水迷宫对大鼠进行学习记忆能力的测定[2]。morris水迷宫实验分为两部分：① 定位航行实验：用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时6d，第1d让大鼠自由游泳2min；从第2d起，每天分上、下午两段，每段训练4次。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中， 系统自动记录大鼠寻找并爬上平台时所需时间(逃避潜伏期)及运动轨迹，每次训练间隔为60s。如果大鼠在120s内未找到平台，须将其引至平台，这时潜伏期记为120s。②空间搜索实验：在第6d最后一次训练后撤除水下平台，在同一入水点将大鼠面向池壁放入水中，系统自动记录其在120s内跨过原平台相应位置的次数及运动轨迹。
1.4 统计学分析
计量资料以均数±标准差（±s）表示。使用spss12.0 for windows软件。对计量资料进行t检验，取α=0.05作为检验水平；对大鼠成活率进行χ2检验，也取α=0.05作为检验水平。
2 结 果
术后60d，改良模型组死亡3只，存活12只，存活率80.0%；传统模型组死亡11只，存活9只，存活率45.0%（表1）。与对照组比较，两个模型组大鼠逃避潜伏期明显延长，在120s内穿越平台的次数明显减少（p<0.01）。而两个模型组之间没有显著性差异（p>0.05）（表2）。表1 两种血管性痴呆模型大鼠成活率的比较表2 两种血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力的改变 与对照组比较，* p<0.01
3 讨 论
2vo模型是血管性痴呆研究中常用的模型之一。有文献报道报道，传统2vo法动物存活率仅为12.5%[3]，我们实验中传统方法的动物存活率也只有45.0%。在实验中，传统模型组大鼠在结扎了双侧颈总动脉后，出现哮鸣音样呼吸，抽搐，动物恢复缓慢，甚至持续昏迷直至死亡。而行改良模型组的大鼠则没有出现这些症状。传统方法存活率较低的原因分析有以下两个：①由于采取正中切口，分离两侧颈总动脉时难免会对迷走神经有所牵拉甚至损伤；②一次性结扎两侧颈总动脉，椎动脉不能迅速代偿以提供脑部所需营养，导致脑部缺血改变严重。改良模型组动物存活率高达80.0%，优越性显而易见，其优点：①采取颈正中线旁切口，利于分离颈总动脉，减少了对迷走神经的牵拉和损伤；②分次结扎，有利于脑部血流重新分配，脑部血供重新建立，机体逐渐代偿适应。③更接近临床上常见的脑部慢性缺血的病理过程。实际观察也发现，改良模型组大鼠术后苏醒较快，苏醒后对其进食和活动的影响也较小。
经典的morris 水迷宫所检测的是大鼠在多次的训练中, 学会寻找固定位置的隐蔽平台, 形成稳定的空间位置认知, 这种空间认知是加工空间信息(外部线索) 形成的。平台的位置与大鼠自身所处的位置和状态无关, 是一种以异我为参照点的参考认知(allocentric cognition) , 所形成的记忆是一种空间参考记忆( reference memory) 。从信息的加工和提取方式来看, 这种空间参考记忆进入意识系统, 其储存的机制主要涉及边缘系统(如海马) 以及大脑皮层有关脑区[4],属于陈述性记忆(declarative memory) 。而临床健忘和痴呆的病人, 正是陈述性记忆首先受损而且比较突出[5]。实验结果提示，两组模型大鼠逃避潜伏期明显延长，在规定时间内穿越平台的次数明显减少，空间记忆损害明显，成功建造了大鼠痴呆模型。
故而我们认为，采取颈前区正中线旁切口、间隔3天分2次永久性结扎同侧颈总动脉的方法，可以成功建立血管性痴呆模型，且较传统2vo法动物成活率显著提高，实验成本降低，实验周期缩短；在慢性脑缺血和慢性脑低灌流性疾病尤其是血管性痴呆的相关研究中，不失为一种理想的建模方法。
【参考文献】
[1]蔡晶，杜建. 血管性痴呆动物模型的制作方法及其评价[j].中医药学刊，2002，20(5):617
[2]vorhees cv，williams mt. morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory[j].nature protocols，2006，1(2)：848
[3]张留宝，陈进贵，刘平，等.不同动物的不同脑供血动脉结扎后存活率比较[j]．南京军医学院学报，2002，24(2)：73
[4]moris rm.developments of a watermaze procedure for studing spatial learning in the rats[j]．j neurosci methods，1984，11(1)：47
[5]squire lr, zolamorgan s. memory, brain system and behavior[j].trends in neuroscience,1988，11:170
