【摘要】 目的：从免疫学角度，进一步探讨慢性非细菌性前列腺炎可能的病机，以及萆薢化浊栓在其中的可能作用机制。方法：应用大鼠前列腺蛋白提纯液辅以双重免疫佐剂造成实验性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型，以空白栓为空白对照组，前列安栓为阳性对照组，分别检测tnfα、il1β在前列腺组织中的含量以及 inos的表达水平。结果：萆薢化浊栓高剂量组、前列安栓对照组il1β、tnfα含量以及inos的表达与模型对照组有显著性差异(p<0.01)。结论：萆薢化浊栓对免疫性大鼠慢性非细菌性前列腺炎有治疗效果，其效果与剂量相关，其作用可能主要是通过抑制炎症及免疫调节而实现。免疫因素可能是慢性非细菌性前列腺炎重要致病因素之一。
【关键词】 前列腺炎;肿瘤坏死因子α;白细胞介素1β;诱导型一氧化氮合成酶;大鼠
[abstract] objective: to discuss the possible pathogenesis of abacterial prostatitis and the possible treatment mechanism of bixiehuazhuoshuan. methods: set up abacterial prostatitis rat model with pure prostatein liquid extrated from rats and double immune adjuvant. treated control blank group by blank suppository, and positive control group with qianlieanshuan. tested tnfα, il1β and inos in prostatic tissue. results: compared with model control group, high dosage group of bixiehuazhuoshuan, control group of qianlieanshuan had significant difference in level of tnfα, il1β and inos (p<0.01). conclusion: bixiehuazhuoshuan has dosedependence effect on chronic abacterial prostatitis. it possibly woks by depressing inflammation and regulating immune system. immune factors may play an important role in pathopoiesis of chronic abacterial prostatitis.
[key words] prostatitis; tumor necrosis factorα; interleukin1β; inducible nitric oxide synthase; rat
慢性非细菌性前列腺炎是中青年男性常见病，其患病率比细菌性前列腺炎高8倍,但其病因尚不明确，临床表现复杂多样[1]。www.11665.cOm目前认为最有可能的致病因素是人体全身或局部原因所导致的免疫机能紊乱，对前列腺组织产生程度不等的损伤，其核心问题是炎症形成并持续存在。本试验就是通过检测前列腺组织中tnfα、il1β的含量以及inos表达，初步探讨其治疗机制，并对免疫性大鼠前列腺模型进行实验性评价。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 wistar种大鼠，雄性，体重250～300 g，由广东医学院实验动物中提供。
1.1.2 实验试剂、药品 福氏完全佐剂(fca)、卡介苗、白破疫苗、前列安栓(珠海丽珠中药厂，批号：050101)、0.1 m pbs、水合氯醛。
1.2 实验方法
1.2.1 大鼠前列腺蛋白提纯液的制作 参考周晓辉、韩蕾等[2]制备大鼠模型方法。步骤：取雄性wistar大鼠10只，处死后再剥取前列腺组织，加入含0.5%tritonx100(内皮细胞损伤剂)的生理盐水溶液，匀浆离心后，取上清液，用721分光光度计，以牛血清白蛋白溶液为标准蛋白，采用双缩脲法进行蛋白含量测定，最后用0.1 mol/l pbs缓冲液稀释为15 mg/ml浓度。
1.2.2 福氏完全佐剂(fca)的制备 将液体石蜡与羊毛脂按2∶1比例共热至70 ℃混匀，高温灭菌后按5 mg/ml加入佐剂用卡介苗，无菌乳化后使用。
1.2.3 动物分组及造模 90只大鼠随机分成空白对照组(n=15)、动物模型组(n=75)。动物模型组按以下方法造模：将实验大鼠采用乙醚麻醉，腹腔注射百白破疫苗0.5 ml，多点皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液和fca乳剂(比例为1∶1的混悬液)1 ml。正常对照组分别行腹腔及皮内多点注射0.9%生理盐水注射液1 ml。以上各组均分别于0,20 d、分2次注射。待恢复3 d后将动物模型组再随机分为：模型对照组(n=15);萆薢化浊栓高剂量组(n=15);萆薢化浊栓中剂量组(n=15);萆薢化浊栓低剂量组(n=15);前列安栓组(n=15)。
1.2.4 萆薢化浊栓制作方法 (1)萆薢化浊栓组方以及药量选择。 萆薢化浊栓是根据《医学心悟》[3]中萆薢分清饮加减变化而来。每剂口服萆薢化浊栓组成：萆薢10 g、黄柏10 g、丹参10 g、茯苓10 g、赤芍10 g、白术10 g。参照《中药制剂学》[4]栓剂的载药量一般与口服剂量相当。大鼠和成人用药剂量依据体重折算系数约为7∶1，正常成年男性体重约为60 kg，大鼠平均体重按250 g计算。分别计算出每颗大鼠用萆薢化浊栓的高、中、低剂量组的载生药量分别为3.5,1.75,0.9 g，比例为4∶2∶1;每颗成人用前列安栓重2 g，同理可知大鼠用量0.06 g。(2)栓剂的制备以及药物含量。实验药物经鉴定后，根据其有效成分分别进行提取浓缩;将前列安栓融化后备用;甘油、明胶水浴加热致熔化后,将提纯的药物、前列安栓分别均匀分散于基质中;将已配好的药液,倒入预先已涂过润滑剂的栓剂模具中,分别制作成高、中、低剂量萆薢化浊栓、空白栓和大鼠用前列安栓。萆薢化浊栓高、中、低剂量分别含生药量：3.5 g/颗、1.75 g/颗、0.9 g/颗;大鼠用前列安栓：0.06 g/颗。
1.2.5 给药方法 于造模成功后第3天开始给药，刺激大鼠充分排便后以0.1%水合氯醛腹腔麻醉;给药剂量除空白组外其余每天1颗，给药后用软木夹夹闭大鼠肛门，待大鼠苏醒后取下，持续时间约60 min，连续给药28 d。给药期间，模型对照组、前列安栓组有1只大鼠死亡，草蔛化浊栓高剂量组有2只大鼠死亡，经检查，未见异常。
1.2.6 前列腺组织取材和指标检测 给药28 d后，取出前列腺组织，右侧叶固定后石蜡切片，检测inos的表达;左侧叶elisa法检测tnfα、il1β。inos表达的结果判定(采用双盲法阅片):inos以胞浆出现棕黄色颗粒作为阳性标准;结合染色强度和阳性细胞数分级，每一切片随机用显微镜选取3个视野(×100)，在高倍镜(×400)选取100个细胞，计算阳性细胞所占百分数。<10%为0分，10%～25%为1分，26%～50%为2分，>51%为3分。按着色程度计分：基本未着色、染色与背景相似者为0分;着色浅、略高于背景者为1分;中度着色、明显高于背景者为2分;强染、着色深棕者为3分。两项合并0～1分为阴性(-)，2分为阳性(+)，>3分为强阳性(++)。
1.3 统计学处理
实验数据采用spss11.0统计软件行统计学分析，计量资料用(±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析。分类资料用“率”表示，采用χ2检验。差异无统计学意义(p>0.05);差异有统计学意义(p<0.05);差异有高度统计学意义(p<0.01)。
2 结果
2.1 il1β和tnfα在各组大鼠前列腺组织中的含量变化(±s)
结果表明：(1)慢性非细菌性前列腺炎的发生发展过程中，前列腺组织中il1β和tnfα含量明显高于正常;(2)萆薢化浊栓高、中剂量组和前列安栓组均可明显降低il1β和tnfα含量，但以萆薢化浊栓高剂量组降低程度最明显，其次为前列安栓组;(3)萆薢化浊栓低剂量组对降低il1β含量的作用不明显;(4)萆薢化浊栓低剂量组能够降低tnfα含量，作用较前列安栓差。见表1。
2.2 inos在大鼠前列腺组织中的表达情况
结果表明：(1)慢性非细菌性前列腺炎发生、发展过程中，在前列腺组织中存在inos过度表达;(2)萆薢化浊栓高剂量组、前列安栓组均能明显抑制inos表达;(3)萆薢化浊栓中、低剂量组能够抑制inos表达，但作用效果不及萆薢化浊栓高剂量组和前列安栓组。见表2。表1 il1β、tnfα在各组中的含量注：与空白对照组比较，**p<0.01; 与模型对照组比较，﹟p<0.05, ﹟﹟p<0.01;与前列安栓组表2 inos的表达情况注：与空白对照组比较：*p<0.05 **p<0.01;与模型对照组比较：﹟p<0.05 ﹟﹟p<0.01;与前列安栓组比较： ▲p<0.05。
3 讨论
造成慢性非细菌性前列腺炎的病因至今仍未明确，目前认为最有可能导致疾病的病因是人体全身或局部原因所导致的免疫机能紊乱，使前列腺组织免疫应答、炎症反应及细胞的生长调控等方面都发生改变，这种变化超出了机体可以调控的范围，就会对前列腺组织产生程度不等的损伤，其核心问题是炎症形成并持续存在。在慢性非细菌性前列腺炎中，自始至终都伴有细胞因子的异常表达。顽固的细胞活化和伴随而至的组织损伤形成恶性循环，是慢性炎症中最难解决的问题。而细胞因子与炎症细胞的渗出激活，炎症病理性损伤，成纤维细胞的增殖等密切相关，直接或间接影响炎症的发生、发展及预后。
我们可以将慢性非细菌性前列腺炎的免疫学发病机制初步归纳如下：当机体罹患某些疾病或机体内外环境发生了某些特定的变化，可以导致前列腺局部抗原(psa)的暴露，进而刺激血液、组织中的cd4t淋巴细胞,直接或间接造成免疫活性细胞浸润前列腺组织。细胞因子(如il1β和tnfα)又使inos和细胞粘附分子强烈表达。inos通过产生大量的一氧化氮导致组织损伤。no又与过氧化物反应生成过二硫酸盐，促进细胞毒素反应和dna损伤。因此说tnfα、il1β、inos这些炎性基因的表达产物，在机体的免疫调节以及慢性非细菌性前列腺炎的发病过程中起着非常重要的作用。
通过实验我们发现，萆薢化浊栓能够调节免疫，其作用是通过抑制il1、tnf等细胞因子的产生和分泌，从而抑制免疫反应，减轻炎症损伤。萆薢化浊栓还能够降低inos在前列腺局部的表达，避免局部产生过量的no，减轻局部炎性损伤，从而达到治疗目的。
【参考文献】
1 裘法祖.外科学[m].第4版.北京：人民卫生出版社，1996.640-641.
2 周晓辉，韩蕾，周智恒,等.免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的形态学与分子生物学特性[j].中华男科学杂志,2005，11(4)：290-295.
3 清.程国彭.医学心悟[m].北京：人民卫生出版社,1963.130.
4 郑品清.中药制剂学[m].北京：中国医药科技出版社,1998.377.
