【摘要】 目的 比较不同产地、长度、色泽的夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量，为更全面地控制夏枯草的质量提供依据。方法 采用高效液相色谱法，以shimpack c18为色谱柱，乙腈甲醇水乙酸铵(体积比68∶16∶16∶0.5)为流动相，检测波长为215 nm，流速为0.8 ml/min。结果与结论 不同产地夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量差异较大，果穗短者两者含量高于果穗长者，紫红色果穗者两者含量高于棕色果穗。
【关键词】 夏枯草 产地 果穗 齐墩果酸 熊果酸
abstract:objective to compare the contents of oleanolic acid and ursolic acid in prunella vulgaris with different appearances and from different provenances,in order to control the quality of prunella vulgaris.methods samples were analyzed on a shimpack c18 column. the mobile phase consisted of acetonitrilemetholwaterammonium acetate (68∶16∶16∶0.5) under a flow rate of 0.8 ml·min-1. the detection wavelength was set at 215 nm.results and conclusions there were large differences in contents of oleanolic acid and ursolic acid among prunella vulgaris with different provenances and appearances, higher in prunella vulgaris with short and mauve ears. this method was suitable for the quality control of prunella vulgaris.
key words:prunella vulgaris;oleanolic acid;ursolic acid
夏枯草prunella vulgaris为常用中药，以干燥果穗或全草入药，主要用于治疗目赤肿痛、头痛眩晕、瘰疬瘿瘤、乳痈肿痛、高血压等[1]。WwW.11665.CoM夏枯草中含有三萜及苷类、苯丙素类、黄酮类等多种化学成分，其中齐墩果酸和熊果酸是主要活性成分[2,3]。目前文献报道有采用衍生化气相色谱法、毛细管胶束电动色谱法、高效液相色谱法等方法评价夏枯草的质量[4-6]，但对于不同产地、长度、色泽的夏枯草中这两种三萜酸的含量比较还未见报道。本文以高效液相色谱法测定并比较不同产地、长度、色泽夏枯草样品中齐墩果酸及熊果酸的含量，旨在为更全面控制夏枯草的内在质量提供依据。
1 仪器与试药
agilent 1100高效液相色谱仪：包括g1313a自动进样器，agilent chemstations数据处理软件，美国安捷伦科技有限公司;齐墩果酸对照品、熊果酸对照品：中国药品生物制品检定所，批号分别为110709200304、110742200516;乙腈：色谱纯，美国tedia公司;甲醇：分析纯及色谱纯，江苏汉邦科技有限公司;石油醚、乙酸铵：均为国产分析纯;夏枯草样品：自采或购自各地药店，经中国药科大学中药学院张勉教授鉴定均为夏枯草prunella vulgaris。
2 实验方法
2.1 色谱条件
参照文献[5]调整了流动相比例及流速。
色谱柱：shimpack c18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：乙腈甲醇水乙酸铵(体积比68∶16∶16∶0.5);流速：0.8 ml/min;柱温：25 ℃;检测波长：215 nm;进样体积：20 μl。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取齐墩果酸10.12 mg、熊果酸10.01 mg，以甲醇溶解，定容于5 ml量瓶中，即得齐墩果酸2.024 mg/ml和熊果酸2.002 mg/ml的混合对照品储备液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定药材1.5 g，置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4 h，提取液回收乙醚至干。残渣以石油醚(30～60 ℃)浸提2次，每次15 ml(约2 min)，倾去石油醚，残渣加适量甲醇微热溶解，定量转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀， 0.45 μm滤膜滤过，即得。
2.4 线性关系考察
分别吸取一定体积的对照品储备液，以甲醇稀释成不同浓度的齐墩果酸及熊果酸的对照品溶液。分别进样20 μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，回归方程分别为：齐墩果酸，y=4536.1x+200.96，r=0.999 9，线性范围2.024～41.20 μg;熊果酸，y=4035x+149.2，
r=0.999 6，线性范围2.002～40.04 μg。
2.5 精密度、稳定性及重现性试验
精密度试验(齐墩果酸rsd值为0.36%，熊果酸rsd值为0.97%)和重现性试验(齐墩果酸rsd值为2.6%，熊果酸rsd值为1.9%)结果均符合要求，稳定性试验表明供试液在24 h内稳定(齐墩果酸rsd值为2.43%，熊果酸rsd值为1.56%)。
2.6 加样回收率试验
称取已知含量的同一份夏枯草药材粉末约0.75 g，精密称定，分别按80%、100%及120% 3个水平精密加入混合对照品溶液，按“2.3”项下的方法平行制备9份，分别测定加样回收率。结果齐墩果酸的平均加样回收率为97.9%，rsd=2.72%;熊果酸的平均加样回收率为96.6%，rsd=2.46%(n=9)，表明加样回收率良好。
3 结果与讨论
取不同收集地药材粉末各1.5 g，精密称定，按“2.3”项下的方法平行制备，每份进样3次，进样体积20 μl，求算峰面积的平均值，计算含量。不同产地、长度、色泽的含量测定结果分别见表1～3。对照品及样品的hplc谱图见图1。由表1可见，夏枯草中熊果酸含量明显高于齐墩果酸的含量，且各批药材之间齐墩果酸与熊果酸的含量变化具有一致性，即熊果酸含量高的药材中齐墩果酸含量也高。各产地之间夏枯草中的齐墩果酸与熊果酸的含量具有差异性，最高者为镇江，其次为哈尔滨，最低为广州，但所测结果均符合药典对夏枯草中熊果酸不得少于0.12%的规定[1]。
中国药典规定夏枯草的长度在1.5～8 cm之间，本文的实验结果显示长度在2 cm左右含量相对较高。由表2可知，在同一产地的夏枯草中果穗短者齐墩果酸和熊果酸含量均高于果穗长者，这与“夏枯草以穗大为佳”的传统说法不一致[7]。经文献检索，探讨夏枯草果穗的长度与齐墩果酸、熊果酸含量之间相关性的研究尚属空白，本实验提出的结果还有待实验样品数量的增加后进一步验证。
由表3可知，外观紫红色的夏枯草果穗中齐墩果酸及熊果酸含量高于棕色者，该结果进一步印证夏枯草中熊果酸含量的高低随生长的成熟度不同存在着消长现象，以带棕红色采收为佳的报道[8]。表1 不同产地果穗的含量比较表2 不同长度果穗的含量比较表3 不同色泽果穗的含量比较
本方法专属性较强，分离度较好，精密度良好，测定结果准确可靠，为夏枯草质量标准的完善和提高提供了可借鉴的方法和依据。
【参考文献】
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