【摘要】 目的 就建立黄芪药材中黄酮类成分hplc指纹图谱的方法进行探讨。方法 采用hplc法建立黄芪中黄酮类成分指纹图谱。结果 对照品在0.0834-1.5012μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。回收率、平均回收率、rsd都较高。除了样品2（山西大同）和样品10（陕西旬邑）外，其它各批的相似度均大于o.94。结论 本文所选用的方法回收率好、操作简便，同时专属性较强，可以对黄芪药材中黄酮类成分的质量更好地控制。
【关键词】 黄芪药材；黄酮类成分；hplc指纹图谱
黄芪为补气中药，有补气升阳、益卫固表，托毒排脓和益气利水作用。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地。春秋采挖，除去须根、根头，晒干。切片，生用或蜜炙用。黄芪性微温、味甘，含多种微量元素（铜、锌、硒等）、多种叶酸、氨基酸、多糖、蔗糖、皂甙，可以利尿消肿、补肺固表、补脾益气，可以有效地调节血糖含量、增强心肌收缩力、抗应激、抗衰老、抗菌、降压、利尿，主治肢体麻木、贫血萎黄、气血不足、脏器下垂、中气下陷、咳喘短气、肺气虚弱、气虚自汗、脾胃气虚等[1]。为了控制其质量，通过研究，并参照有关文献[2]，用hplc指纹图谱法测定黄芪药材中黄酮类成分，方法简便可行，准确可靠[3]。
1 仪器与试药
1.1 仪器 agilengt1260高效液相色谱仪（lc2000）、auw-220d电子分析天平（日本岛津）、a4dl型自动纯水蒸馏器（广州恒广科学仪器有限公司）、dsq10260超声仪（上海亚荣生化仪器厂）、自动进样器、uv2401-pc紫外分光光度计（日本岛津）、re-52aa旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。WWw.11665.Com
1.2 试药 黄芪药材均采集于全国各地，按照产地不同分为十批次；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯[4]。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液及阴性对照溶液的制备 取6.0g黄芪将其研细，然后进行精密称定，称定之后将其置于瓶中，加入40ml含量为70%的乙醇。然后加热回流3小时，放冷，滤过放于量瓶中（容量为100ml）。再分别对残渣和容器进行洗涤，洗液并入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取缺黄芩的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液[5]。
2.2 线性关系考察 取在60℃减压干燥4小时的对照品约10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀。分别进样1、2、4、6、8、10、12、14、16、18μl，记录峰面积，以峰面积积分值（y）对对照品浓度（x）进行线性回归，得回归方程：y=5827.96835x-42.05934，r=0.9999。结果表明，对照品在0.0834-1.5012μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系[6]。
2.3 色谱条件 流动相选用比例为53：47：0.2的甲醇-水-磷酸，流速0.6ml/min；填充剂选用十八烷基硅烷键合硅胶，检测波长为276nm，柱温控制在35℃[6]。
2.4 精密度实验 取黄芪药材样品粉末（50目）约1.5g，进行供试品的制备，采用上述色谱条件，进样20μl，连续进样6针，并以5号峰作为参照峰，结果各峰相对保留时间和相对峰面积的rsd（n=6）均小于2%。
2.5 稳定性试验 在室温条件下，取供试品溶液分别在0，2，4，6，8，10，12h各进样10μl，（放置0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时，然后各进样10μl），得出试验结果：n=7，rsd为：0.9%，平均峰面积为：2714238，这些数据充分表明在12h内，样品的稳定性良好。
2.6 重复性实验 取同一批黄芪药材样品粉末（50目）约1.5g，平行称定5份进行供试品的制备，采用上述的色谱条件，进样20μl，结果各色谱峰相对保留时间和相对保留峰面积的平均值的rsd均小于3%。
2.7 回收率试验 回收率试验采用加样回收法，取100g黄芪药材，然后对其进行认真地研细，研细之后称取样品18g，分为6份，每份3g。然后加入5ml含量为0.2055mg.ml-1的对照品储备液，按照（3）的方法进行提取，制成供试品溶液。然后计算回收率、平均回收率等，见表1，可见回收率、平均回收率、rsd都较高。
2.8 指纹图谱中峰面积相似度计算 实验结果表明，10批不同产地黄芪药材的相似度在0.826-0.990之间，除了样品2（山西大同）和样品10（陕西旬邑）外，其它各批的相似度均
于0.94，见表2。3 讨 论
3.1 本实验建立黄芪中活性成分黄酮类成分hplc指纹图谱，为了提高黄酮类成分的溶解度和纯度，实验对其提取工艺进行了反复的摸索与优化[7]。
3.2 本文所选用的方法回收率好、操作简便，同时专属性较强，可以对黄芪药材中黄酮类成分的质量更好地控制。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典（一部）2005.
[2] 白焱晶，王智颖，杜新刚等.黄芪药材的hplc-uv指纹图谱研究[j].中草药，2008，3（7）：1089-1092.
[3] 朱恩圆，窦玉玲，魏东芝，王峥涛，卢艳花.蜂胶hplc指纹图谱及质量控制[j].中国中药杂志，2005（18）：123-126.
[4] 刘芳，胡坪，annika küster，任德权.绞股蓝药材黄酮类化合物的hplc指纹图谱研究[j].中成药，2009（04）：122-125.
[5] 武彦舒，周丹蕾，鄢丹，任永申，方艺霖，肖小河，杜晓曦，王建.天然虫草与虫草菌丝体的hplc指纹图谱研究[j].中国中药杂志，2008（19）：120-123.
[6] 李海燕，李宏博，郝宁，许永男，朴钟云.白头翁属药用植物的hplc指纹特征与化学分类研究[j].中国中药杂志，2011（11）：133-136.
[7] 王巍，鞠成国，朱旭，赵焕君.急性子中黄酮类成分hplc指纹图谱的初步研究[j].中成药，2011（02）：145-147.
