【摘要】 目的 对psa提取物正丁醇萃取部位中的化学成分进行研究。方法 利用色谱学和光谱学方法分离鉴定化合物。结果 从psa正丁醇部位中分离得到5个化合物，分别鉴定为没食子酸乙酯（ethyl gallate，ⅰ）、苯甲酸（benzoic acid，ⅱ）、芍药苷（paeoniflorin，ⅲ）、没食子酰基氧化芍药苷（galloyl-oxypaeoniflorin，ⅳ）、芍药内酯苷（albiflorin，ⅴ）。结论 本研究阐明了psa提取物正丁醇萃取部位中的主要化学成分。
【关键词】 psa；化学成分；芍药苷；没食子酰基氧化芍药苷；芍药内酯苷
psa为常用中药材，具有多种药理活性。为了确定其药理作用的物质基础，为该药材的现代化开发利用提供科学基础，我们对psa的化学成分进行了较系统的研究，此论文工作为系统工作的一部分。
1 psa正丁醇部位化学成分研究
1.1 药材概况及选题依据
1.1.1 基源及性味归经、功能主治 中药psa系毛莨科芍药属植物牡丹（paenoina suffruticosa andr.）的根皮，始载于《神农本草经》，列为中品，性微寒，味苦，辛，归心、肝、肾经，具有清热凉血，活血化瘀之功效[1]。
1.1.2 化学成分 目前，国内外对牡丹根及根皮的化学成分已有一些研究。文献报道psa中含有丹皮酚（paeonol）、丹皮酚苷（paeonoside）、丹皮酚原苷、丹皮酚新苷（apio-paeonoside）、芍药苷（paeoniflorin）、苯甲酰芍药苷（benzoylpaeoniflorin）、氧化芍药苷（oxypaeoniflorin）、2，3-二羟基-4-甲氧基苯乙酮、2，5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮、3-羟基-4-甲氧基苯乙酮、paeonilide、挥发油及植物甾醇等[2]。Www.11665.cOm牡丹根还分离出2-羟基-4-甲氧基苯乙酮、paeonisothuion、deoxypaeonisuffrone、isopaeonisuffral、paeonisuffrone、3-o-methylpaeonisuffral、paeoninorigeaone、paeonisuffral[3-4]；suffruticoside a、b、c、d、e、没食子酸（gallic acid）、没食子酰氧化芍药苷等[5]。此外psa还含有丰富的微量元素，包括zn、cd、pb、co、mn、cr、cu、p、fc、k等[6]。
1.1.3 药理作用
1.1.3.1 抗病原微生物作用 体外试验表明，牡丹酚对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和大肠杆菌的mic分别为1：2000，1：5000和1：5000，psa浸剂在试管内对铁锈色小芽孢等10种皮肤真菌也有一定的抑制作用。psa煎剂对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、变形杆菌、肺炎双球菌、霍乱弧菌等均有较强的抑制作用。煎剂抗菌的主要有效成分为没食子酸[1]。
1.1.3.2 抗心肌缺血作用 psa对实验性心肌缺血有减轻损伤程度作用，并能够降低心肌耗氧量，增加冠脉流量，可以认为psa有调节血行，疏通血脉之作用，因而对心肌缺血有保护作用[7]。
1.1.3.3 抗炎作用 丹皮对由角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀与二甲苯诱导的小鼠耳片水肿（均为急性特异性的炎症）和福氏完全佐剂（cfa）诱导的大鼠佐剂性关节炎（aa）均有明显的抑制作用，此作用与psa中的活性成分丹皮总苷（tgm）有关[8]。丹皮水煎剂能抑制炎症组织的通透性和抑制pge的生物合成，从而对多种急性炎症反应具有抑制作用，并且它不抑制特异性抗体的产生，不影响补体旁路途径的溶血活性，故它在发挥抗炎作用的同时，不影响正常体液免疫功能[9]。
1.1.3.4 保肝作用 丹皮活性成分丹皮总苷（tgm）对ccl4和d-gal-n所致小鼠化学性肝损伤的保护作用机制的研究表明，tgm能够降低ccl4和d-gal-n所致的血清alt和ast的升高，促进损伤组血清蛋白含量增加和肝糖原合成增加，还可降低损伤组肝脏肝匀浆脂质过氧化物丙二醛（mda）的含量，提高血清和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（gsp-px）活力，清除体内有害自由基，增强机体抗氧化作用，且可缩短ccl4中毒小鼠ip戊巴比妥钠后的睡眠时间，增强解毒能力，因此tgm具有肝脏保护作用[10-12]。
1.1.3.5 降血糖作用 丹皮多糖粗品100、400mg·kg-1灌胃给药可使正常小鼠血糖显著降低；200、400mg·kg-1灌胃给药对葡萄糖诱发的小鼠高血糖有显著降低作用[13]。
1.1.3.6 调节免疫细胞作用 psa的甲醇提取物400mg/kg，牡丹酚25mg/kg或50mg/kg灌胃，能显著增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能，使体内碳廓清时间明显缩短，腹腔渗出液中细胞数明显增加[14]
丹皮总苷（tgm）对由刀豆蛋白a（cona）诱导的t淋巴细胞增殖和分泌以及由脂多糖（lps）诱导b淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖和分泌功能具有浓度依赖性双向免疫调节作用。tgm还具有机能依赖性调节小鼠体液和细胞免疫的功能[15]。
1.1.3.7 其他 psa还有镇痛、镇静、解痉、退热等中枢作用；抗动脉粥样硬化作用；利尿作用；抗早孕作用；抑制由adp诱导的血小板聚集等作用。
1.1.4 临床应用 psa在临床上用于治疗皮肤病、高血压、过敏性鼻炎、血小板减少性紫癜等多种疾病。
综上，牡丹皮具有清热凉血，活血化淤的作用。
1.2 实验部分
1.2.1 实验仪器与材料 旋转蒸发器r205（无锡星海王生化设备有限公司）；电子恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；循环水式多用真空泵shb-b95型（郑州长城科工贸有限公司）；bruker drx 400超导核磁共振波谱仪；pekin-elmer983g型红外光谱仪；zab-hs型质谱仪；x-4型显微熔点仪。
乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇均为分析纯（北京化工厂产），氘代二甲基亚砜、氘代丙酮（北京化工厂生产，tms内标），薄层层析硅胶（gf254）和柱层析硅胶均为（青岛海洋化工有限公司）产，葡聚糖凝胶lh-20为pharmacia公司产。
psa药材购自亳州亳广药业，经鉴定为毛茛科芍药属植物牡丹（paenoina suffruticosa andr）的根皮。
1.2.2 实验步骤
1.2.2.1 提取分离 取psa 5kg，用十倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时。提取液合并，减压回收溶剂，得总提物浸膏830g。总提物浸膏用5000ml水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次。各溶剂萃取液分别浓缩，得到石油醚部位浸膏252g，乙酸乙酯部位浸膏130g和正丁醇部位浸膏326g。正丁醇部分浸膏用热水转溶后，上样d101大孔树脂柱，依次用水、20%、50%、80%、95%乙醇洗脱，每种比例洗脱10倍柱体积。各比例的洗脱液分别浓缩得水洗浸膏158g，20%乙醇洗浸膏65g，50%乙醇洗浸膏50g，80%乙醇洗脱浸膏24g，95%乙醇洗脱浸膏8g。取20%乙醇洗脱浸膏进行常压硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇（50：1-1：1）梯度洗脱。从fr.17-20中得到化合物ⅰ（900mg），fr.8-13合并经反复凝胶柱层析得到化合物ⅱ（20mg），fr.54-72中得到化合物ⅲ（30g），fr.87-93经凝胶柱层析得到化合物ⅳ（20mg），fr.78-81经反复凝胶柱层析得到化合物ⅴ（10mg）。
1.2.2.2 结构鉴定。
