原发性血小板增多症骨髓病理学特征观察

　 et是临床论文联盟http://上较为少见的一种骨髓增殖性疾病（myeloproliferative disease，mpd），主要表现为骨髓巨核细胞增多、血小板持续增高，并伴有一系列临床症状。该病起病较为隐匿，容易误诊。目前国内对于et的骨髓特点特别是关于其骨髓病理组织学改变报道较少。基于此,本文对北京大学人民医院血液病研究所85例et病人的骨髓活检病理组织学特征并结合骨髓细胞学及分子生物学等检测结果进行了分析。
　　1 资料与方法
　　1.1 病例来源：2010-2011年北京大学人民医院血液病研究所诊治的et患者85例；男36例，女49例。年龄19-81岁，中位年龄51岁。
　　1.2 骨髓样品收集方法：骨髓活检针（b65-01）与髂后上棘分别采涂片标本和活检标本。骨髓细胞学采用瑞氏常规染色。骨髓切片采用he 、gomori常规染色。骨髓活组织块用苦味酸进行固定，经酒精梯度脱水后，采用hemapun系列包埋剂进行包埋制成切片，其中3um切片进行he染色；5um切片进行gomori染色。在olimpus光学显微镜下，对骨髓活检进行形态学观察，包括造血组织容量、粒、红系有无病态造血、前体细胞定位紊乱（abnormal location of immature precursor,alip）、巨核细胞分布及形态变化等。造血组织容量采用网形目镜测微器记点法计算，gomori阳性密度分级参考文献[1]。
　　1.3 网银纤维积分标准（manoharan）等改良法
　　+（正常）:偶见纤细或粗大之单一纤维丝，或在单一纤维丝散在分布的同时，可见血管周围的局限性纤维网络，或良性淋巴滤泡四周的局限性纤维网络。wWw.11665.cOM
　　+：可见贯穿于切片大部分区域的纤细纤维网络，粗大纤维偶见；或者于血管及良性淋巴滤泡附近的局限性网硬蛋白纤维增多。
　　++：可见弥漫性纤维网络，伴以散在分布的粗纤维增多现象。
　　+++：可见弥散性以粗纤维为主的网络形成，但胶原纤维之染色阳性。
　　++++：可见弥散性的粗纤维网络，伴以染色阳性的胶原纤维形成区。
　　1.4 染色体检测:利用g显带的技术对患者骨髓标本进行染色体分析的方法参见文献。[2]
　　1.4 基因检测:基因检测jat2-v-617f突变的方法参见文献。[3]
　　其他观察指标：静脉血检测血常规并进行涂片观察。并取骨髓检测染色体及融合基因。
　　1.5 统计学分析:采用spss13.0软件进行统计学分析。卡方检验用于评估两组间检出率的显著性。两组间差异应用单因素方差分析。p<0.05被认为具有统计学差异。
　　2 结果
　　2.1 血常规检查:85例患者wbc中位数10.61×109/l（（5.5-35.5）×109/l）。hb中位数138g/l（68-192）g/l。plt中位数838×109/l（（520-2023）×109/l）。其中5例病人外周血涂片发现幼稚粒细胞。wbc计数增高（>10×109/l）患者47例。hb增高者（女>150g/l，男>160g/l）18例。贫血（hb 女<110g/l，男<120g/l）患者6例。
　　2.2 骨髓细胞学检查:85例患者中骨髓增生活跃54例，增生明显活跃1例，极度活跃1例。骨髓增生低下21例。5例患者取材时出现干抽。所有患者粒、红两系均未见明显病态造血，且原始细胞分类计数均小于5%。全片巨核细胞计数中位数为78（0~292）只，以产板、颗粒巨核细胞为主。所有患者血小板均为成大堆分布，并可见大血小板。
　　2.3 骨髓塑料活检组织病理学检查:85例患者中，5例患者可见基质出血、水肿。造血组织容量[造血组织容量(v%)=造血细胞（组织）击中点数造血细胞（组织击中点数）+脂肪细胞×100]中位数为60%（20%~95%）。所有患者粒系均增生活跃，14例患者红系增生偏低下。7例患者可见前体细胞定位紊乱。所有患者巨核细胞均有不同程度异常增生（>10只/高倍镜视野），其中30例患者巨核细胞为片状分布。70例患者可见明显巨核系病态造血，其中以巨大、过度及不规则分叶核为主，38例患者可见小巨核细胞，但未见典型淋巴样小巨核细胞，1例可见单圆核及多圆核。gomori染色结果显示，81例患者为阳性，其中65例为网状纤维轻度增生（+~++），16例患者骨髓可见明显纤维化（≥+++）。
　　2.4 染色体及融合基因检测:85例患者中有76例检测了jak2-v617f基因突变，51例阳性，阳性率为67.1%。75例患者检测了bcr-abl（p210）融合基因表达情况，全部为阴性。79例患者进行了染色体检查，所有患者均未发现ph染色体，但其中2例可见核型异常。我们进一步对比了jak2-v617f基因突变阳性患者和jak2-v617f基因未突变患者巨核细胞形态改变及纤维化程度。结果发现，51例jak2-v617f基因突变阳性患者中，有44患者（86.3%）可见巨核系明显病态造血（过度及不规则分叶核、小巨核、单园及多园核等），10例患者（19.6%）可见明显纤维化（≥+++），而25例jak2-v617f基因未突变患者中，有20患者