非小细胞肺癌组织中ezrin及cd44v6表达及其意义
【关键词】 癌,非小细胞肺;ezrin;抗原, cd44;免疫组织化学
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【摘要】 目的 探讨ezrin和cd44v6在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。方法 应用免疫组化sp法，检测64例非小细胞肺癌病人癌组织及相应癌旁正常上皮组织中ezrin和cd44v6的表达情况。结果 64例正常上皮组织中，ezrin表达阳性28例，cd44v6表达阳性18例;64例非小细胞肺癌组织中，ezrin表达阳性48例，cd44v6表达阳性43例，两者比较差异有显著性(χ2=12.96、19.57,p<0.005)。ezrin和cd44v6的表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移关系密切(uc=2.92～21.48,p<0.05)。ezrin与cd44v6同时表达的38例病人中，淋巴结转移率高达60.0%。结论 联合检测ezrin和cd44v6的表达有助于综合判断非小细胞肺癌的恶性程度和转移潜能，ezrin有望成为判断肿瘤预后的新指标。WWW.11665.com
【关键词】 癌,非小细胞肺;ezrin;抗原, cd44;免疫组织化学
expressions of ezrin and cd44v6 in nonsmall cell lung cancer and their clinical significancedong shaoan, zhao jinglan (department of thoracic surgery, the second affilated hosiptal of qingdao medical college,qingdao 266042, china); [abstract] objective to evaluate the expressions of ezrin and cd44v6 in nonsmall cell lung cancer (nsclc) and their significance. methods the expressions of ezrin and cd44v6 in 64 patients with nsclc and that in paraneoplastic tissue, and in 64 normal tissue were detected by immunohistochemical method. results in 64 samples of normal tissue, the positive ezrin was found in 28, and cd44v6 in 18; in 64 nsclc, ezrinpositive was noted in 48 cases, and cd44v6 in 43, the difference was significant (χ2=12.96,19.57;p<0.005). the expressions of ezrin and cd44v6 were closely related with the stage of tumor,and lymph node metastasis (uc=2.92-21.48,p<0.05). in 38 cases with simultaneously positive ezrin and cd44v6, the lymph node metastasis was as high as 60.0%. conclusion combined detection of cd44v6 and ezrin is conducive to estimation of malignancy and the potential of metastasis of nsclc. ezrin is hopefully to become a new index predicting prognosis of tumor.
[key words] cancer, nonsmall cell lung; ezrin; antigen, cd44; immunohistochemistry
转移是恶性肿瘤病人治疗失败和死亡的主要原因，因此与转移高度相关基因的研究已成为肿瘤转移机制研究领域的热点。ezrin是erm蛋白家族的成员，参与细胞膜与细胞骨架的连接和细胞外信号向细胞内的传递，对细胞黏附力和肿瘤细胞运动侵袭能力均有重要的调节功能。cd44v6是与侵袭、转移密切相关的细胞表面因子，活化的ezrin蛋白通过n端与cd44等跨膜蛋白的膜内区域相连，参与黏附分子介导的细胞黏附功能。为研究ezrin和cd44v6在非小细胞肺癌发生和进展过程中的作用，本研究应用免疫组织化学方法检测了64例非小细胞肺癌标本中ezrin和cd44v6的表达情况，以探讨其临床病理意义。
1 材料与方法
1.1 材料
收集我院2005年2月～2007年6月手术切除非小细胞肺癌存档蜡块64例，每例均有详细的临床资料，所有病人术前均未接受化疗和放疗。其中男43例，女21例;年龄34～76岁，平均63.2岁。根据国际抗癌联盟提出的tnm分期系统(1997年修订版)进行术后病理分期，其中ⅰa期5例，ⅰb期13例，ⅱa期15例，ⅱb期22例，ⅲa期7例，ⅲb期2例。伴有淋巴结转移28例，无淋巴结转移36例。鳞癌30例，腺癌27例，其他类型细胞癌7例(大细胞癌4例，腺鳞癌3例)。取64例相应癌旁正常肺组织作为对照。
1.2 免疫组化染色方法
采用免疫组化sp法染色，按sp试剂盒操作说明进行操作。鼠抗人ezrin单克隆抗体为neomarker公司产品;cd44v6抗体为福州迈新公司分装的neomarker公司产品。染色过程中设阳性和阴性对照，阳性对照用已知阳性切片，阴性对照用pbs代替一抗。
1.3 结果判定标准
免疫组化结果请有经验的病理科医生进行双盲阅片。依据细胞显色的有无及深浅，按半定量方法判断。①按显色深浅评分：0分，细胞不显色;1分，浅黄色显色;2分，棕黄色显色;3分，棕褐色显色。②按显色比例评分：1分，显色细胞占细胞总数<25%;2分，显色细胞占细胞总数25%～50%;3分，显色细胞占细胞总数51%～75%;4分，显色细胞占细胞总数>75%。最后以两者的乘积作为判定标准：阴性(-)0分;弱阳性(±)1～4分;阳性(+)5～9分;强阳性()>9分。
1.4 统计学分析
应用ppms 1.5[1]统计学软件进行处理，组间比较采用χ2检验和秩和检验。
2 结 果
2.1 ezrin的表达
ezrin阳性表达均定位于细胞质，表现为细胞质内出现棕黄色颗粒。ezrin在癌组织中的阳性表达率为75%，而在正常肺组织的阳性表达率为44%，二者比较差异有显著性(χ2=12.96，p<0.005)。ezrin 的表达与病人的性别、年龄以及肿瘤的分化程度无关，而与有无淋巴结转移和临床tnm分期有关。见表1。
2.2 cd44v6的表达
cd44v6阳性表达定位于细胞膜,呈明显棕黄色染色。 64例非小细胞肺癌组织中，cd44v6阳性表达43例，正常肺组织cd44v6阳性表达18例，二者比较差异有统计学意义(χ2=19.57,p<0.005)。 cd44v6的表达与肺癌组织类型无关,而与淋巴结转移和临床分期有关。见表1。
2.3 非小细胞肺癌组织ezrin和cd44v6表达关系
在43例cd44v6表达阳性的病人中，有41例ezrin表达阳性; 而21例cd44v6表达阴性的病人中，仅5例ezrin表达阳性， 二者差异有统计学意义(χ2=35.72,p<0.05)。
3 讨 论
ezrin为膜细胞骨架连接蛋白，是连接细胞膜和细胞骨架之间的erm家族成员之一。近年来研究显示，ezrin在肿瘤细胞转移过程中扮演重要角色。ezrin通过调整黏附分子和信号转导等途径，参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用，从而在肿瘤发展、侵袭和转移中过程发挥重要作用。yu等[2]在对横纹肌肉瘤的研究中发现，高侵袭组的细胞系villin2基因(ezrin编码基因)持续高表达，将villin2基因转染到低侵袭能力的细胞系中，可以极大地提高细胞的侵袭转移能力，很容易形成肺转移灶;相反，如果用rna干扰技术抑制ezrin的表达，原本具有高转移能力的细胞系转移能力大大下降，不能形成肉眼转移灶，说明ezrin的过表达不仅赋予肿瘤细胞高转移活性，而且对肿瘤转移过程是必不可少的。陶晓峰等[3]指出，在肝癌中ezrin的高表达与肝癌的侵袭性密切相关。本实验采用免疫组化法检测ezrin的表达，结果显示肺癌组织中的表达明显高于正常肺组织，提示在肺癌中可能存在ezrin表达调控机制的失调，使其表达上升;且伴有淋巴结转移组ezrin阳性表达率高于无淋巴结转移组。这说明ezrin的阳性表达可预示肺癌有较高的侵袭性和预后不良;ezrin可能对肺癌肿瘤细胞发生、分化和转移有着重要的促进作用。
cd44是一种分布广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间特异性粘连作用。cd44已被证实在很多肿瘤的转移中发挥作用，尤其cd44v6与肿瘤细胞的侵袭、转移密切相关。其机制可能为：①cd44v6在细胞膜外近膜区多出一段氨基酸序列，这导致了细胞内羧基段的结构发生变化，影响了细胞骨架蛋白的构象和分布，从而改变肿瘤细胞的运动能力，参与肿瘤侵袭、转移;②与透明质酸之间的相互作用，cd44v6将自身“锚”在宿主组织的细胞外质及基底膜上，导致肿瘤细胞侵袭转移的发生;透明质酸与肿瘤细胞膜表面的cd44v6结合后，即能帮助其完成免疫逃逸，延长其在血液循环中的存活时间，又可在细胞浆区内形成信号，诱导肿瘤细胞自分泌产生出刺激生长的细胞因子，导致肿瘤细胞的增长繁殖。本研究显示，cd44v6与肺癌组织的淋巴结转移及临床分期密切相关，提示cd44v6高表达预示肺癌转移潜能高，预后较差。近年来研究显示，ezrin与肿瘤细胞表面分子的连接，参与了肿瘤细胞的转移过程，尤其是与cd44同时表达时，往往出现在恶性肿瘤的侵袭和转移中[4]。ezrin可以直接与细胞表面受体cd44分子的胞浆部分发生作用。
本研究结果表明，cd44v6表达同ezrin表达有明显的关联，在cd44v6阳性表达的43例肿瘤中，ezrin同时阳性表达者占95%;而cd44v6阴性表达的21例肿瘤中，ezrin表达阳性者仅占24%，有明显差别，提示二者可能有着共同的作用机制。hefler等[5]研究认为,cd44v6ezrin细胞骨架之间存在着一种连接，这种连接不仅对细胞表面的形态发育起着重要作用，而且还参与细胞的跨膜联系和信号转导，调节多种生理功能。可见cd44v6和ezrin在肿瘤转移过程中的作用机制是极其复杂的，但二者密切相关，可能有着共同的作用机制。当二者同时高表达，则预示着肿瘤有高侵袭、高转移的活性，这对指导临床治疗有着重要意义。
【参考文献】
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[3]陶晓峰,王齐敏,金晓明. 肝细胞癌中ezrin、moesin表达的临床病理学意义[j]. 临床与实验病理学杂志, 2007,23(1):3032.
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[5]hefler l a, concin n, mincham d, et al. the prognostic value of immunohisochemically detected cd44v3 and cd44v6 expression in patients with surgically staged vulvar carcinoma:a multicenter study[j]. cancer, 2002,94:125130.
