突变型与野生型nm23-H1 基因原核表达方式的构建及纯化的论文_肿瘤论文

摘要】 　背景与目的 nm23-h1 基因是一个肿瘤转移抑制基因，但关于nm23-h1 基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚。该实验目的就是构建nm23-h1野生型和p96s、h118f突变型原核表达载体，并在大肠杆菌中表达及纯化。方法通过pcr方法扩增野生型和突变型nm23-h1目的片断，利用基因重组技术构建pet28a-nm23-h1野生型和突变型原核表达载体，并进行酶切和测序鉴定，鉴定正确克隆转化bl21（de3）溶源菌，进行蛋白表达及可溶性分析，同时采用镍柱亲和层析法进行纯化，应用western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测。结果通过酶切和测序鉴定，pet28a-nm23-h1野生型和突变型原核表达载体序列正确，编码框正确。转化溶源菌后能够表达目的蛋白，蛋白表达量高，且均为可溶性蛋白，western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-h1蛋白分子量为20 kda，与预计值相符。结论成功构建pet28a-nm23-h1野生型和p96s、h118f突变型原核表达载体，所表达蛋白可用于下一步实验研究。

【关键词】 nm23-h1 基因；基因表达；转移抑制基因

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