【摘要】  　背景与目的 cox-2在多种肿瘤组织中高表达，参与了肿瘤的发生发展，rna干扰（rnai）技术是一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段。本研究应用rnai技术研究干扰cox-2 基因表达的抑制效果及抑制cox-2 基因表达对a2细胞体外恶性增殖的影响。方法 以cox-2为靶点，构建3个带有人u6启动子的cox-2小干扰rna（short interfering rna，sirna）表达载体。用脂质体lipofectamine介导，分别将3个sirna表达载体及空载体转染到cox-2表达阳性的a2细胞，建立转染细胞株。采用反转录聚合酶链反应（rt-pcr）和western blot方法检测cox-2表达水平的变化。通过细胞生长曲线、集落形成试验研究干扰cox-2 基因表达对a2细胞体外增殖的影响。结果 经过pcr扩增、内切酶鉴定、dna测序和blast比对证实3个sirna和u6启动子序列正确并准确克隆到pegfp载体。转染细胞株分别命名为a2-3、a2-7、a2-10和a2-p。转染后24 h、48 h、72 h，a2-p细胞均有绿色荧光表达，而a2-3、a2-7、a2-10细胞均未观察到绿色荧光。rt-pcr和western blot结果显示，3个sirna表达载体均发挥作用，cox-2表达受到抑制，与a2细胞比较，a2-3、a2-7、a2-10细胞的cox-2 mrna表达量分别降低15.6%、20.4%和64.2%，cox-2蛋白表达量分别降低23.7%、36.7%和60.2%。www.11665.CoM细胞生长曲线、集落形成试验的结果显示，a2-10细胞生长减慢，集落形成率减少，而a2-3和a2-7细胞生长没有明显的改变。结论 应用rnai技术熄灭cox-2 基因表达对a2细胞的体外恶性增殖有明显的抑制作用。

【关键词】  cyclooxygenase-2；rna干扰；体外；肺肿瘤