摘要】 目的 研究基质金属蛋白酶(mmp)2、9在胃癌组织中的表达及相关性。方法 采用免疫组化法观察60例胃癌及20例胃正常黏膜石蜡标本中mmp2、9蛋白的表达情况。结果 mmp2在胃癌组织中的表达率为75%，mmp9在胃癌组织中的表达率为68.3%，均显著高于周围正常组织(p<0.05)。mmp2和9的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及肿瘤临床分期相关(p<0.05)。且mmp2的表达与mmp9的表达呈正相关(p<0.05)。结论 mmp2和9在胃癌组织中显著高表达，与胃癌的浸润转移相关，其异常表达可能共同参与胃癌的发生、发展过程，检测mmp2、9可作为反映胃癌病理学特点的参考指标。
【关键词】 胃癌;免疫组化;基质金属蛋白酶
基质金属蛋白酶(mmps)与多种肿瘤的侵袭和转移有关。mmp2和mmp9是mmps家族的重要成员，主要降解明胶及ⅳ型胶原。近来在多种肿瘤中发现有mmp2和mmp9异常高表达，有研究证实它们与多种肿瘤的侵袭和转移有关〔1～3〕。目前有关mmp2和mmp9在胃癌中的研究已有少量国内外文献报道〔4，5〕，但多仅对其中一项指标进行研究。本文对mmp2和mmp9在胃癌组织中的表达进行研究，并分析mmp2、9在胃癌组织中表达的相关性及其意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 收集2007年1月至2008年1月我院病理科石蜡包埋胃组织标本80例，其中胃癌60例，癌旁正常胃黏膜20例;20例正常对照均取自距胃癌切缘5 cm以外正常胃黏膜组织。wwW.11665.com60例胃癌患者中，男 48例，女12例;年龄36 ～75〔平均(58.6±16.7)〕岁。病理类型：高分化及中分化腺癌36例，低分化腺癌、印戒及黏液细胞癌24例。无淋巴转移者17例，有淋巴转移者43例。tnm分期：ⅰ期及ⅱ期共19例，ⅲ期及ⅳ期共41例。所有患者在术前均未接受放疗和化疗处理;临床病理资料完整;每例标本都选择包括肿瘤中心和肿瘤边缘的石蜡块1～2个，制成连续切片，片厚3～4 μm。
1.2 实验试剂 mmp2兔抗人多克隆抗体、mmp9兔抗人多克隆抗体均为即用型，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 免疫组化染色及结果判定 每个病例的切片均分为三部分，分别检测mmp2、9蛋白的表达。免疫组化采用envision二步法。mmp2、9阳性染色位于细胞浆和/或细胞膜呈棕黄色，显色强时为棕褐色。光镜下用高倍镜视野对每例组织切片癌组织区域连续计数500个细胞，计算癌细胞所占的阳性比例。其中无细胞染色为阴性(-)，阳性细胞所占比例<10%为+，阳性细胞数占10%～50%为，阳性细胞数>50%为。为便于统计描述，对样本进行分类，0～+为弱染，定为阴性表达，～为强染，定为阳性表达。
1.4 统计学分析 采用spss11.0数据分析软件，应用χ2检验、spearman相关分析进行统计学处理。
2 结 果
2.1 胃癌组织中mmp2、9的表达 mmp2在正常胃黏膜中大多为阴性表达，少部分为阳性。mmp2其在胃癌组织中的表达呈细胞浆分布，阳性信号为棕黄色颗粒。本组病例在正常胃黏膜中mmp2阳性表达5例，阳性率为25%(5/20);在胃癌组织中阳性表达45例，阳性率为75%(45/60)，显著高于正常胃黏膜的表达(p<0.05)，见图1，表1。
mmp9在正常胃黏膜中大多为阴性表达，少部分为阳性。其在胃癌组织中的表达呈细胞浆分布，阳性信号为棕黄色颗粒。本组病例在正常胃黏膜中mmp9阳性表达4例，阳性率为20%(4/20);在胃癌组织中阳性表达41例，阳性率为68.3%(41/60)，显著高于正常胃黏膜的表达(p<0.05)，见图1，表1。表1 正常胃黏膜及胃癌组织中mmp2、9的表达
2.2 胃癌组织中mmp2、9的表达与临床病理特征的关系 胃癌组织中mmp2、9的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及tnm分期均显著相关(均p<0.05)。但与患者的年龄、性别及胃癌分化程度无显著相关(均p>0.05)。mmp2、9在t1+t2、t3+t4阳性表达率分别为16.7%(1/6)和81.5%(44/54)，16.7%(1/6)和74.1%(40/54)，浸润越深，表达越强;在ⅰ+ⅱ期、ⅲ+ⅳ期阳性表达率分别为52.6%(10/19)和85.4%(35/41)，47.4%(9/19)和78.0%(32/41)，分期越晚，表达越强;在无淋巴结转移及有淋巴结转移的阳性表达率分别为52.9%(9/17)和83.7%(36/43)，35.3%(6/17)和81.4%(35/43)，淋巴结转移越多，表达越强。见表2。
2.3 胃癌组织中mmp2，9表达的相关性 胃癌组织中35例mmp2与mmp9共阳性表达，9例mmp2与mmp9共阴性表图1 正常胃黏膜及胃癌组织中mmp2、9的表达(×400)表2 mmp2、mmp9与胃癌临床病理特征的关系 达，仅mmp2阳性10例，仅mmp9阳性6例，经相关性分析表明mmp2与mmp9表达呈正相关(r=0.352，p<0.05)。
3 讨 论
肿瘤从开始形成到浸润和转移，经历三个重要阶段：细胞粘连、局部蛋白酶解及细胞动力增加和迁移。有许多证据表明在癌细胞侵袭转移过程中，涉及许多特殊基因及其表达产物。mmps是一类高度保守的依赖于锌离子的内切蛋白水解酶家族，可降解基底膜和细胞外基质的大多数蛋白质，有关mmp2和mmp9在人类肿瘤中表达与肿瘤侵袭转移的关系，国内外许多作者做了大量的研究。陈洪雷等〔6〕研究发现，随着肺癌原发肿瘤的增长、淋巴结浸润和远处转移的出现，mmp2、9的表达阳性率逐步增高。同时肺癌的临床分期与上述指标的表达呈正相关，说明它们的表达与肺癌的进展程度相关。mmp2和mmp9能降解细胞外基质和基底膜，促进肿瘤间质血管的新生，与肿瘤的浸润及转移有关。davies等〔7〕发现mmp2和mmp9的水平随膀胱的分级增高而升高，侵袭性肿瘤明显高于表浅性肿瘤。有学者研究发现食管癌组织中mmp2和mmp9表达率明显高于正常组织，而且mmp2和mmp9在淋巴结转移组阳性表达率明显高于无淋巴结转移组〔8，9〕。吕增发等〔10〕在研究中发现肝癌中mmp2、9的表达比周围组织高，而且其活性增高与肝癌细胞对门静脉和包膜浸润以及发生肝内转移、肿瘤复发密切相关。
有作者发现胃癌中mmp2、mmp9表达增强。monig 等〔4〕观察114 例胃癌患者，其中93 例癌组织mmp2表达阳性，并且mmp2 表达与胃癌进展及其淋巴结转移正相关。而且随着浸润程度由黏膜层到浆膜外的加深，mmp2的阳性表达逐渐增加。王璐等〔5〕研究发现随着胃癌组织浸润深度的增加，胃癌细胞内mmp9的含量逐渐增高，淋巴转移阳性组mmp9表达率高于阴性组。
本研究发现正常胃黏膜中mmp2和mmp9的阳性表达率明显低于胃癌组织，且胃癌中浸润越深、有淋巴结转移及tnm分期晚者mmp2和mmp9的阳性表达越高，提示mmp2，mmp9也参与了胃癌的侵袭转移过程。并且，mmp2的表达和mmp9的表达呈正相关，这提示mmp2和mmp9在胃癌浸润和转移过程中可能有协同作用，共同参与了胃癌的恶性演进，检测mmp2、9可作为反映胃癌病理学特点的参考指标。
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