作者：龚卫红 韩立炜 郑海云 赵希贤

【摘 要】 目的 通过正交试验，优选处方的最佳提取工艺。方法 采用水提取方式，以水为溶剂进行提取，选择加水倍数，提取时间，提取次数三个因素，每个因素设计三个水平，因素水平见表1，按照正交实验l9（34）表进行试验。分别以总黄酮作为标志性成分，综合考虑，选定最优提取工艺。结果 因素相关性rc>ra>rb，药材的加水量(c)为主要因素。提取的最佳工艺条件为加8 倍量水，提取时间为1.5 h 一次。结论 优选得到的提取工艺简单、稳定、可行。
【关键词】 正交试验；提取工艺

[abstract] objective to experiment, the best extraction optimization prescription. methods the water extraction method, water as solvent extraction, multiple choice with water, extraction time and number of the three factors, each of the three levels of design, factor levels in table 1, in accordance with the orthogonal l9 (34) table experiment.
respectively, as a symbol of the composition of total flavonoids, considering the selected optimal extraction. results factors related to rc> ra> rb, herbs amount of water (c) as the main factor.the optimum extraction conditions for 8 times the amount of water, extraction time 1.5 h, once. conclusion the optimized extraction process is simple, stable and feasible.
[keywords] orthogonal; extraction
        骨碎补具有补肾强骨、养伤止痛之功效。WWw.11665.cOm用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。其活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物。据报道，用水提取和醇提取，提取的活性成分含量相差不多[2]。骨碎补浸膏以水为溶剂时提取效果较好[3]，淫羊藿，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效；黄酮类化合物及淫羊藿苷是淫羊藿重要的活性成分。可用水提或乙醇提取[4]。怀牛膝，具有活血祛瘀、补肝肾、强筋骨、利尿通淋、引血下行功效。甾酮，皂苷，多糖为主要成分。枸杞有清肺、明目、滋肝、补肾之功效，多糖为主要成分。延胡索具有活血化疲，行气止痛功效。五味配伍组方则有补肾，壮腰膝，强筋骨止痛之功效。为了保证制剂质量，用正交设计法研究其最佳提取工艺，分析加水倍数，提取时间，提取次数对总黄酮得率的影响，优选出最佳提取条件。
        1 仪器和材料
        1.1 仪器
        uv-2800h 型紫外可见分光光度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司）。
        1.2 材料
        所有药材均购于北京本草方源药业有限公司。
        2 方法和结果
        2.1 样品的制备
        按处方投料，加规定量的水，煎煮规定的时间和次数，滤过，滤液浓缩至稠膏，放入真空干燥箱，干燥得干膏作为样品，进行测定。
        2.2 正交试验设计
        选用l9(34)正交试验，结合影响该药材提取效率的主要因素，考察药材加水量、提取时间、提取次数对总黄酮含量的影响，同时考虑生产实际,选取3 个水平，见表1。 
         
        
         

       2.3 总黄酮含量的测定方法
        2.3.1 对照品溶液制备
        精密称取芦丁（批号100080-200707，购于中国药品生物制品鉴定所）5.1 mg，加甲醇溶解并定容至100 ml，即得0.051 mg/ml。
        2.3.2 标准曲线的制备
        吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml 于10 ml 比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360 nm 比色。求得回归方程，y=31.29x+0.0018 r2 = 0.9997，计算试样中总黄酮含量。
        2.3.3 供试品溶液的制备
        称取一定量的试样(大约0.5 g)，加乙醇定容至25 ml，摇匀后，超声提取20 min，放置，吸取上清液1.0 ml，于蒸发皿中，加1g 聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用甲苯洗，甲苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25 ml。此液于波长360 nm 测定吸收值。计算试样中总黄酮含量。
        3 结果
        见表2。
        4 结果分析
        影响因素大小顺序为c>a>b，即提取为最重要，其次为含醇量。
        5 讨论
        ①中药复方常含多种药材，若以某个药材的成分为标准考察提取工艺则不能反映全面，故多选用总成分做标准。但单一成分也不能全面反映，建议选取几种总成分综合评定。
        ②实验室正交设计研究时与生产存在差别，一般实验室提取更完全，出膏率高，有效成分含量略高；生产应根据情况进行调整。
参考文献
[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典[s].一部.北京:化学工业出版.2000.
[2] 张琳,杨中林.水提法与醇提法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较[j].江苏药学与临床研究,2004,12 卷(3):30-31.
[3] 王允,刘毅,姚干.骨碎补提取与含量测定研究概况[j].中国药业,2007,16(6):63.
[4] 申庆亮,丁涛.正交设计法研究淫羊藿提取工艺条件[j].中国实验方剂学杂志,2001,10(5):5-6.