作者：齐冰，丁涛，常正尧，郭淼，刘京昇，李文雍
【摘要】 目的探讨泰山四大名药之一的黄精对实验性衰老小鼠的抗衰老作用及机制。方法以d-半乳糖致亚急性衰老小鼠为模型，同时给予不同浓度泰山黄精和药房购买黄精(产地湖南)煎剂治疗，6周后，分别测定小鼠脾脏指数和胸腺指数，以超氧化物歧化酶(sod)、谷氨酸的含量来研究黄精延缓衰老作用。结果与正常对照组相比，模型小鼠的胸腺和脾脏指数以及sod含量明显降低，而谷氨酸含量明显的升高(p<0.01)。黄精治疗组和衰老模型组相比，高剂量的泰山黄精处理后，胸腺和脾脏指数以及sod含量均显著的升高，而谷氨酸含量显著降低(p<0.01)。结论泰山黄精能显著延缓衰老。其作用机理可能与其清除自由基，提高免疫功能以及增强神经免疫网络有关。
【关键词】 黄精; d—半乳糖衰老模型; 抗氧化作用; 胸腺指数; 脾脏指数
黄精polygonatum sibiricum delar.ex.redoute属百合科，黄精属。其根块入药[1] 。中医临床上主要用黄精来治疗糖尿病、冠心病、高脂血症、肺结核、淋巴结核、白细胞减少、腹泻、便秘、失眠等多种病症[2] 。泰山黄精为鸡头黄精，是泰山四大名药之一，多生于阴坡的石壁、杂草丛中和树下，有滋阴润肺、补脾益气、止喘消咳等功效。WwW.11665.CoM近年来对黄精的抗衰老作用有所研究，本实验采用d-半乳糖致亚急性小鼠衰老模型，观察研究泰山黄精的抗衰老作用及其机制。
1 材料与仪器
1.1 动物昆明种雄性小鼠80只，体质量为(25±2.0)g，雌雄各半，购自泰山医学院实验动物中心。
1.2 试剂 d-半乳糖购自上海试剂二厂。sod、谷氨酸含量测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。泰山黄精采自泰山，对照黄精购自泰山医学院附属医院中药房(产地湖南)。其它常用试剂为国产分析纯。
2 方法
2.1 黄精水煎剂的制备晚秋后采挖泰山黄精的根状茎，去掉茎叶，抖尽泥沙，削去须根和烂根，用清水洗净，放在蒸笼内蒸20 min,边晒边揉至全干为止。两种黄精各500 g加蒸馏水2 500 ml煎煮30 min ,4层纱布过滤,药渣用2 000 ml蒸馏水煎煮30 min过滤,合并滤液,浓缩至2 kg/l,120℃高压灭菌,4℃冰箱保存备用[3] 。
2.2 动物分组及给药昆明种小鼠80只，适应性喂养1周后随机分为4组，即正常对照组、模型对照组、泰山黄精组和对照黄精组，每组10只。除正常对照组外，其余各组每只颈背皮下注射5% d-半乳糖0.5 ml，1次/d，连用6周，造成衰老模型。正常对照组颈背皮下注射同等剂量生理盐水。待出现衰老表征后，两个黄精实验组分别给予5，20，30 g/kg 黄精水煎液灌胃治疗,1次/d,对照组、模型组每日灌胃等量生理盐水。
2.3 脑组织sod、谷氨酸含量以及脾脏指数的测定给药7周后，称量小鼠体重并断头处死，迅速取出小鼠脑，用冰冷生理盐水洗两次后，用滤纸拭干后称重，剪碎组织块后倒入匀浆瓶中迅速量取9倍体积的生理盐水，匀浆，制成10%的脑组织匀浆。再完整剥离小鼠脾脏和胸腺，用生理盐水洗2次后，滤纸拭干称其重量并记录。参照南京建成生物工程公司试剂盒说明书进行测定。
2.4 统计学处理实验数据用±s表示，采用方差分析处理数据，利用t检验判断差异是否显著。
3 结果
3.1 泰山黄精对衰老模型小鼠胸腺和脾脏指数的影响 结果见表1 。与正常对照组比较，衰老模型组小鼠胸腺指数、脾脏指数明显降低(p<0.01)。两种黄精高、中、低浓度处理均能提高衰老模型小鼠的胸腺指数和脾脏指数。泰山黄精高、中浓度处理后胸腺和脾脏指数均明显升高。表1 黄精对d-半乳糖衰老模型小鼠脾脏和胸腺指数的影响(±s)
3.2 泰山黄精对衰老模型小鼠脑组织sod和谷氨酸含量的影响 结果见表2。表2 黄精对d-半乳糖衰老模型小鼠脑组织sod含量和谷氨酸含量的影响(±s)
与正常对照组比较，衰老模型小鼠脑组织sod活性明显降低(p<0.01)。而谷氨酸含量则明显的升高(p<0.01)。泰山黄精高剂量组较衰老模型小鼠sod的活性明显升高，而谷氨酸的含量明显下降(p<0.01)。对于sod含量，泰山黄精中低以及对照黄精的高剂量组与衰老模型组对比也有显著差异。对于谷氨酸含量，泰山黄精中浓度和对照黄精高剂量组与衰老模型对比也有显著差异(p<0.05)。
4 讨论
机体衰老的分子机制包括诸多因素。正常情况下,体内存在的氧化防御系统包括sod ,gsh-px 等,对抗氧化应激反应,清除机体内产生的自由基,从而起到抗衰老的作用。因此，sod的高低可间接反映机体清除氧自由基的能力。免疫器官胸腺和脾脏随着衰老进行而不断萎缩，造成衰老机体免疫功能的低下。所以使用免疫增强剂抑制胸腺和脾脏的萎缩也是延缓衰老的方法之一。谷氨酸是中枢神经系统内含量最高、分布最广、作用最强的兴奋性神经递质，在学习记忆、神经元的生存以及树突的生长与退化方面具有重要作用[4，5]。
我们的研究发现，d-半乳糖衰老模型小鼠sod的活性明显下降，表明机体衰老时体内抗氧化防御体系活性降低，清除自由基能力下降，导致体内ros生成过量。过量的ros攻击位于线粒体内膜上的脂类、蛋白质和mtrna，影响线粒体的功能[6]。线粒体功能受损，必然导致细胞内atp生成不足，使细胞内na大量滞留，从而激活神经元突触末梢上glu摄入载体的反向运载，使glu大量释放[7]。大量释放的glu可通过促进na+ 、c1-、水的内流以及ca2+ 超载来发挥神经毒性，引起急性神经元损伤和迟发性神经元损伤，最终出现记忆力下降、认知障碍、思维迟缓等脑老化表现。
本研究发现，泰山黄精较对照黄精能明显提高衰老模型小鼠中的胸腺指数和脾脏指数，来提高衰老小鼠免疫功能;泰山黄精能明显的提高衰老模型小鼠中的sod含量，通过清除衰老模型小树体内的自由基来延缓衰老;另一方面，泰山黄精能明显降低衰老模型小鼠中的谷氨酸含量，从而抑制衰老时glu的异常释放，减轻glu的神经毒性作用，从而改善神经元的功能。因而，泰山黄精可以从多种机制来达到延缓衰老的目的。这将为泰山黄精的抗衰老临床应用和保健品的开发奠定试验基础。
【参考文献】
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