作者：易军，金描真，孙晓博，乔淑娟
【摘要】 目的 考察龙血竭中龙血素a在大鼠体内的药动学行为。方法 按100 g大鼠给予龙血竭250 mg灌胃给药，测定不同时间点的血药浓度，并以3p97软件计算其药动学参数。结果 龙血素a 的ka为(146±0.19) h-1，t1/2(ka)为(0.48±0.06) h，t1/2(k)为(2.59±0.67) h，tmax为(2.00±0.55) h，cmax为(1.13±0.24) μg·ml-1，auc为(2.84±0.68) μg·h·ml-1。结论 龙血素a在大鼠体内符合线性动力学一室开放模型，吸收较快。
【关键词】 龙血竭;龙血素a;高效液相色谱法;大鼠;药动学
abstract:objectiveto study on pharmacokinetics of loureirin a in rats.methods the blood samples were collected at a series of time points after an oral administration of dragon′s blood to rats (2.5 g·kg-1),and were analyzed by hplc.pharmacokinetic parameters were valuated by 3p97 software. results pharmacokinetic parameters of loureirin a were as follows:ka (1.46±0.19) h-1,t1/2(ka) (0.48±006) h,t1/2(k) (2.59±0.67) h,tmax (2.00±0.55) h,cmax (1.13±0.24) μg·ml-1,auc (2.84±0.68) μg·h·ml-1.conclusion the results demonstrated that the pharmacokinetics of loureirin a was consistent with one-compartment model,which was absorbed and distributed rapidly in rats.
key words: dragon′s blood;loureirin a;hplc;pharmacokinetics
血竭(dragon′s blood) 又名麒麟竭，是传统名贵中药。wWw.11665.COm国产血竭称龙血竭，具有祛瘀定痛、止血生肌的功效[1]，被誉为“活血圣药”，临床应用广泛。龙血竭的主要成分为黄酮类化合物,其在治疗冠心病、脑梗死、心肌缺血、脑缺血损伤等方面有显著疗效[2-3]。龙血素a是龙血竭黄酮的主要成分之一，目前未见关于龙血素a体内药动学的文献报道。本文采用hplc法[4]测定龙血素a在大鼠体内的血药浓度，研究龙血素a在大鼠体内的药动学，为临床应用提供理论依据。
1仪器与材料
1.1动物
sd大鼠66只，体质量(250±20)g，雌雄兼备，由中山大学医学院动物中心提供，合格证号：(粤)2006a064。
1.2仪器
waters高效液相色谱仪：515 hplc泵，2487双波长吸收监测器，n-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);tdl80-2b台式离心机(上海安亭科学仪器厂);scq5201超声仪(上海超声波仪器厂);zh-2 blender涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。
1.3材料
广西产龙血竭(广西中医学院制药厂提供);龙血素a对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：200402);乙腈、甲醇(色谱纯)，乙酸乙酯、无水乙醇、冰醋酸(分析纯)。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：diamonsil c18(5 μm，250 mm×4.6 mm);保护柱：easyguard c18 replacement cartridgescat#6101;流动相：乙腈-体积分数1%冰醋酸(体积比35∶65);检测波长：280 nm;流速：1.2 ml·min-1，柱温:25 ℃;进样量:20 μl。
2.2血样的采集和处理
大鼠禁食(自由饮水)12 h后，按100 g大鼠给予龙血竭250 mg，灌胃给药。分别在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于颈动脉取血,置于用肝素预处理过的离心管中。取全血1 ml置离心管中，加入乙腈2 ml、乙酸乙酯1 ml，涡旋混合均匀，3 000 r·min-1离心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴挥干，于残渣中加入100 μl甲醇，超声处理使之溶解，12 000 r·min-1离心10 min，取上清液作为样品，注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱图与峰面积，采用外标法定量。
2.3方法学考察[3]
2.3.1龙血素a对照品贮备液的制备取龙血素a对照品，用甲醇配制成每1 ml约含100 μg的溶液，作为对照品贮备液。
2.3.2方法专属性取大鼠2只，实验前禁食12 h，自由饮水，1只做空白对照，1只按100 g给予龙血竭250 mg灌胃给药，给药2 h后取血样，按“2.2”项下方法操作测定。由图1可见，全血中的内源性物质不干扰龙血素a的测定，表明本方法有较好的专属性。[psd261;s*2〗a.空白血浆; b.空白血浆+对照品; c.样品图1 hplc图谱figure 1hplc chromatograms
2.3.3标准曲线与最低检测限取空白全血适量，精密加入龙血素a对照品储备液，配制质量浓度为0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·ml-1的系列浓度标准溶液，按“2.2”项下的方法，自“加乙腈2 ml、乙酸乙酯1 ml”起，依法操作，记录峰面积。以质量浓度(ρ)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标进行回归，结果表明龙血素a的质量浓度在0.076～4.836 μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为：a=49679ρ+2784.3，r=0.998 3(n=7)。取标准曲线用溶液，逐步稀释至溶液中龙血素a的响应值约为基线噪音的3倍(s/n=3)，记录色谱图，得出最低检测限(lod)为0.025 μg·ml-1。
2.3.4相对回收率与精密度精密量取对照品储备液，以空白全血分别配成高、中、低3种质量浓度(4.836、1.209、0.076 μg·ml-1)的样品溶液，按 “2.2” 项下的方法，自 “加乙腈2 ml、 乙酸乙酯 1 ml”起，依法操作。记录峰面积并代入标准曲线计算各样品浓度，计算相对回收率。结果表明，高、中、低3个质量浓度的样品的相对回收率均高于80%。见表1。
取以上高、中、低3个质量浓度的样品溶液于同一天内连续测定3次，计算日内rsd;每天测定3种浓度样品各1次，连续测定3 d，计算日间精密度rsd。结果日内和日间精密度rsd值均小于10%，表明该法精密度较好。见表1。
2.3.5样品稳定性精密量取对照品储备液，以空白全血配制质量浓度为0.076、0.605、1.209、2.418 μg·ml-1的样品，分别考察室温25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反复冻融3次的稳定性。结果各样品的rsd值均在2.76%～11.42%(n=6)之间，符合《中国药典》相关规定，表明样品稳定性较好。表1龙血素的回收率与精密度
2.4大鼠体内的药动学
取sd大鼠66只，禁食不禁水12 h后，按时间点随机分为11组，每个时间点6只，按100 g体质量给予龙血竭250 mg灌胃给药，采集不同时间点的血样，按“2.2”项下方法处理样品并测定龙血素a的浓度。
2.4.1血药浓度曲线按不同时间点求算平均血药质量浓度，并绘制血药质量浓度—时间曲线，见图2。由图可见，血药质量浓度达峰时间为(2.0±055)h，峰质量浓度为(1.13±0.24)μg·ml-1。[psd262;s*2〗图2 大鼠口服龙血竭(2.5 g·kg-1)后龙血素a平均血药质量浓度—时间曲线figure 2mean concentration-time curve of loureirin a in rats (n=6)
2.4.2药动学参数用药动学数据处理软件3p97对所测得数据进行拟合，所得药动学参数见表2。由表2可见，龙血素a在大鼠体内符合一室模型。
3讨论
3.1本文选取龙血竭主要成分之一的龙血素a作为指标成分，对龙血素a在大鼠体内的药动学情况进行了研究，为临床用药提供了依据。
3.2对sd大鼠一次性灌胃龙血竭(250 mg/100 g)后，取全血进行处理后测定血药浓度，根据aic(akaike′s information criterion)值最小原则，确定其符合一室吸收动力学模型，吸收半衰期为0.48 h;消除半衰期为2.59 h。从本文得到的药动学参数，并结合文献[6]数据推断，龙血竭口服后吸收较快，且迅速向体内各组织分布。表2大鼠口服龙血竭(2.5 g · kg-1)后药动学参数
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[m].北京：中国医药科技出版社，2010：96.
[2] 刘忠和.复方血竭胶囊对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的拮抗作用[j].武汉大学学报:医学版,2005,26(6):174-177.
[3] 方伟蓉,李运曼,邓嘉元.龙血竭总黄酮对动物心肌缺血的保护作用[j].中国临床药理学与治疗学,2005,10(9):1020-1024.
[4] 周晔,金描真,易军,等.含中药龙血竭的血清处理方法研究[j].广东药学院学报,2007,23(2):151-153.
[5] 李好枝.体内药物分析[m].北京：人民卫生出版社，2008.
[6] 孙晓博,金描真,李雪,等.龙血竭中龙血素a与龙血素b在大鼠体内的组织分布研究[j].广东药学院学报,2008,24(3)：214-216.
