作者：王丽娟，王庆妍，杨春宝

【摘要】  目的研究独一味对蟾蜍离体心脏的作用及其相关机制。方法采用离体蛙心灌流法观察独一味提取物对离体心脏的收缩力、心输出量和心率的影响。结果①独一味提取物使蟾蜍离体心脏的收缩力减弱，心输出量减少，心率略有减慢。在0.01～2.0 mg·ml-1浓度范围内，独一味提取物抑制心肌收缩力的作用与剂量之间呈现明显的量效关系，最大效应可使心肌收缩力降低36.4%。②随灌流液中钙离子浓度增加，独一味对心脏的抑制作用增强；另外，独一味的心脏抑制作用可部分被阿托品拮抗。结论独一味可抑制蟾蜍离体心脏的功能，其作用可能与抑制细胞外的钙离子内流，减少细胞内钙有关，而与心肌细胞受体的关系有待进一步研究。

【关键词】  独一味； 蛙心灌流； 心肌收缩力； 心输出量

  chinaabstract：objectiveto investigate the effects of herba lamiophlomis on the isolated toad hearts and the underlying mechanism. methodswith isolated heart irrigation technique, the effects of herba lamiophlomis extract on the cardiac contractility, cardiac output and heart rate were investigated.results①herba lamiophlomis had the inhibitory effects on the isolated toad hearts, could attenuate the cardiac contractility, decrease the cardiac output and reduce the heart rate.it had an obvious dose-effect relationship within the concentration of (0.01～2.0)mg·ml-1.the maximal inhibitory effect on the cardiac contractility was near by 36.4%.②the inhibition of herba lamiophlomis on cardiac contractility became stronger along with the  increase of ［ca2+］ in the perfusion solution.besides,the effect of herba lamiophlomis on the cardiac function could be partially antagonized by atropine. conclusionherba lamiophlomis can inhibit the function of isolated toad hearts.the mechanism may be that herba lamiophlomis blocks ca2+ channel on the cell membrane,and inhibit the flowing of ca2+ from extracell to intercell, thus reduce the intracellular concentration of ca2+. while the interaction of  herba lamiophlomis and receptor on the cell membrane is worth further research.

　　key words：herba lamiophlomis;  frog heart perfusion;   cardiac contractility;   cardiac output

    独一味lamiophlomis rotate (benth.) kudo 为唇形科独一味属植物，以根茎及全草入药，具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、抗菌消炎、增强免疫力等功效［1～3］，临床主要用于软组织损伤、关节损伤、骨折等镇痛［4，5］。Www.11665.coM独一味主要含有黄酮类（木犀草素、芹菜素和槲皮素）、环烯醚萜苷类（独一味素a、独一味素b、独一味素c等）、苯乙醇苷类（独一味苷a）等化合物［6］。从以往的研究可以看出，独一味属于活血化瘀止痛药，但其对心功能的影响至今未见报道。该实验通过离体蛙心灌流的方法，初步探讨独一味对离体心脏功能的影响，为进一步研究奠定基础。

　　1  材料与仪器

　　1.1  药品和溶液

　　氯化乙酰胆碱，国药集团化学试剂有限公司生产，批号 20071109；阿托品，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号 0607281；肾上腺素，天津金耀氨基酸有限公司，批号 0701291；普萘洛尔，天津力生制药股份有限公司生产，批号 0701003；独一味提取物，由本校天然药物化学实验室提供。正常任氏液、高钙任氏液（钙离子浓度为正常任氏液2倍，其他离子浓度不变）和低钙任氏液（钙离子浓度为正常任氏液的一半，其他离子浓度不变）。

　　1.2 仪器

　　bl-420f生物信号记录系统，成都泰盟科技有限公司生产；ft张力传感器，成都泰盟科技有限公司生产；auy120分析天平，日本岛津公司生产。

　　1.3  动物蟾蜍60只，雌雄兼用，由天津市实验动物中心提供，合格证号为scxj（津）2005-0001。

　　2 方法

　　2.1  独一味提取物的制备［7］取独一味粉碎，加水煎煮3次，1 h/次，合并滤液，过滤，将过滤后的滤液浓缩成相对密度1.30的浸膏，80℃以下干燥成棕色粉末。用时用蒸馏水配制并用任氏液稀释至所需浓度，保存于冰箱。

　　2.2  离体心脏标本的制备 

　　采用巴木氏法制备蟾蜍离体心脏标本备用［8］。

　　2.3  独一味对蟾蜍离体心脏功能的影响 

　　按照累加法逐渐加入独一味溶液，使灌流液中的独一味浓度为0.01～2.0 mg·ml-1。观察心肌收缩力、心输出量和心率的变化。

　　2.4  独一味对心功能的作用机制研究 

　　分别以乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素、普萘洛尔为工具以及调整灌流液中的钙离子浓度，通过比较心肌收缩力、心每分输出量和心率的变化，分析独一味对蟾蜍离体心脏作用的机制。

　　2.5   数据处理各组数据均采用±s表示，组间差异的显著性检验采用t检验，p﹤0.05为差异显著。

　　3  结果

　　3.1  独一味对蟾蜍离体心脏功能的影响 

　　3.1.1  独一味对心肌收缩力的影响  灌流液中加入独一味后，心脏的收缩幅度降低。随独一味浓度的增加，收缩力逐渐降低。以药物浓度为横坐标，心肌收缩力变化为纵坐标作图，得出独一味的量效关系曲线。见图1。

　　3.1.2  独一味对心输出量和心率的影响
 
　　在0.5 mg·ml-1独一味的作用下，蟾蜍心脏的心输出量明显减少，而心率变化不明显。结果见表1。表1  独一味对心输出量和心率的影响（略）

　　3.2  独一味抑制心脏的作用与m受体的关系

　　3.2.1  氯化乙酰胆碱对心肌收缩力的作用及阿托品的拮抗作用  10μg·ml-1的氯化乙酰胆碱使心肌收缩力降低，阿托品（2μg·ml-1,下同）可完全拮抗乙酰胆碱的作用。结果见图2（其中1例，n=8。振幅为心肌收缩力，下同）。

　　3.2.2  独一味对蟾蜍离体心脏的作用及阿托品对独一味作用的影响 

　　在2.0 mg·ml-1独一味的作用下，心肌收缩力降低33.3%，心输出量减少48.3%。给予阿托品后，再给予相同浓度的独一味，心肌收缩力仅降低了15.0％，心输出量减少34.7%。结果见图3(其中1例，n=8)和表2。

　　3.3  独一味的作用与β受体之间的关系 

　　肾上腺素(2μg·ml-1,下同)可明显使心肌收缩力加强，心输出量增加，心率加快。2.0  mg·ml-1独一味不能阻断肾上腺素的上述作用，而普萘洛尔(4 μg·ml-1)则能完全阻断肾上腺素的心脏兴奋作用。结果见图4（其中1例，n=8）。

　　3.4  细胞外钙离子浓度对独一味作用的影响

　　分别用低钙任氏液、正常任氏液和高钙任氏液进行灌流，并分别给予0.5 mg·m-1的独一味，可见独一味使心肌收缩力分别降低15.2%，33.0%和47.3%。独一味的作用随钙离子浓度的升高而增强。结果见图5（其中1例，n=4～9）及表3。表2  给阿托品前后独一味对心肌张力及心输出量的影响（略）表3  细胞外钙离子浓度对独一味作用的影响（略）

　　4  讨论

    独一味是藏、蒙、纳西等民族民间常用草药，以往对独一味的研究集中在止血、止痛、免疫调节、抗菌抗炎、抗肿瘤等方面，而独一味对心血管的作用研究较少。本实验研究结果显示：独一味提取物对蟾蜍离体心脏具有抑制作用，明显使心肌收缩力减弱，心输出量减少，而对心率的影响不明显。在0.01～2.0 mg·ml-1浓度范围内，随着独一味浓度的升高，其对心肌收缩力的抑制作用增强，呈现出明显的量效关系。由此分析，独一味可能主要影响心脏的工作细胞，而对心脏的自律细胞影响较小。
   
　　心肌收缩力和心输出量是影响心肌耗氧量的重要因素。独一味抑制心脏的作用可使心肌的耗氧量减少，对控制心脏兴奋及心绞痛发作是有利的。

    通过改变灌流液中的钙离子（ca2+）浓度及加入不同的工具药可以进一步分析独一味对心脏作用的相关机制。ca2+是心肌细胞兴奋-收缩偶联的关键物质。由于心肌细胞的肌浆网不太发达，所以，细胞外ca2+内流的多少对细胞内的ca2+浓度影响较大。实验中观察到，随灌流液中的ca2+浓度升高，心肌的收缩力加强；加入独一味后，心肌的收缩力降低，并且随灌流液中的ca2+浓度升高，独一味的作用明显增强。说明独一味可能通过阻断心肌细胞膜上的ca2+通道，抑制ca2+内流，从而减少细胞内的ca2+浓度而使心肌收缩力减弱。

    心肌细胞膜上的m受体兴奋及β受体被阻断均可以使心脏抑制。该实验结果尚不能明确独一味作用与心肌细胞膜上的m受体及β受体的关系。有关独一味对心血管的作用及其作用机制还有待于进一步研究。

【参考文献】
  1］林天慕,顾 宜,方坤泉.藏药独一味两种提取组分对小鼠镇痛作用的影响［j］.第四军医大学学报,2003,29(5):444.

　　［2］苑伟，宋玉威，梁资富，等. 不同产地藏药独一味的镇痛、抗炎作用比较研究［j］.中国药房，2003，14（2）：716.

　　［3］沈涛，贾正平，李茂星，等. 独一味水提取物止血作用及其机理的初步研究［j］.中国新药与临床药理，2006，17（2）：93.

　　［4］扶世杰，黄家骏，彭忠毅，等.独一味胶囊和三七伤药片治疗软组织损伤研究［j］.西部医学，2007，19（5）：828.

　　［5］高峻峰.独一味胶囊治疗膝关节滑膜炎120例［j］.中国中医药信息杂志，2002，9（7）：41.

　　［6］王瑞冬，孙连娜，陶朝阳，等.独一味化学成分的研究［j］. 第二军医大学学报，2005，26（10）：1171.

　　［7］国家药典委员会.中国药典，ⅰ部［s］.北京:化学工业出版社,2005:541.