作者：赵淑明 郭秋红 张志良 吴迪 周桦 郝飞克 张一昕
【摘要】 目的探讨葶苈生脉方治疗压力超负荷致慢性心衰（chronic heart failure，chf）大鼠的作用机理。方法采用腹主动脉缩窄法建立慢性心衰大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、葶苈生脉方高剂量组（简称高剂量组）、葶苈生脉方低剂量组（简称低剂量组）、心宝丸对照组（简称心宝丸组），各组给予相应处理因素4周后，采用放免法检测血清肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、白细胞介素-6（il-6），motic6.0图象分析系统分析心肌胶原容积分数（cvf）。结果模型组与假手术组比较tnf-α、il-6表达显著增强（p<0.01），cvf明显升高；各治疗组与模型组比较，tnf-α、il-6表达显著减弱（p<0.01），cvf明显降低，其中高剂量组明显低于低剂量组和心宝组（p>0.01）。结论葶苈生脉方可能通过抑制炎性细胞因子的表达，调节心肌胶原代谢，从而阻止或逆转心室重构，改善心功能，达到治疗chf的目的。
【关键词】 葶苈生脉饮； 慢性心衰； 肿瘤坏死因子-α； 白细胞介素-6； 心肌胶原容积分数
chinaabstract:objectiveto explore the effects of tinglishengmaifang on heart failure rat model induced by pressure overload.methodsthe model with chronic heart failure was established by suprarenal aortic constriction operation, then was divided into 5 groups at random: sham operated group, model control group, tinglishengmaifang high-dose group (referred to as high-dose group), tinglishengmaifang low-dose group(referred to as low-dose group) and xinbaowan control group group(referred to as xinbaowan group). four weeks after treatment, the contents of tnf-α and il-6 were determined by radiation-immunization method, and motic 6.0 digital image analysis system was used to analyze myocardial collagen volume fraction (cvf).resultscompared with the normal group, the contents of tnf-, il-6 in model group were significantly inereased, cvf was significantly enhanced(p<0.01); compared treatment group with the model group,tnf-α, il-6 were significantly weakened, cvf was significantly reduced in treatment groups.conclusiontilishengmaifang can inhibit the expression of inflammatory factor, regulate collagen metabolism and reverse ventricular remodele, improving heart function, so to achieve the purpose of treating chf.
key words: tinglishengmaiyin chf； tnf-α； il-6； cvf
慢性心衰（chronic heart taliure,chf）是临床上常见的心血管病综合征，是大多数原发心血管疾病的严重或终末阶段，其5年存活率与恶性肿瘤相似，是心血管疾病最主要的死亡原因之一。wwW.11665.COM越来越多的研究表明，在chf进程中, 以炎性细胞因子升高为标志的免疫激活及胶原代谢异常发挥着重要作用［1］。葶苈生脉方是经临床证实治疗心衰的有效方剂。本研究以压力超负荷致慢性心力衰竭大鼠为实验对象，通过检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tnf-α）、白细胞介素-6（il-6），分析心肌cvf的变化，探讨葶苈生脉方治疗chf的作用机理。
1 材料与仪器
1.1 药物葶苈生脉方（河北医科大学中医学院制剂室制备）由葶苈子、红参、黄芪、五味子、丹参等组成，实验时用蒸馏水分别配成含生药1.5 g/ml（低剂量）和3.0 g/ml（高剂量）的混悬液；心宝丸（汕头市麒麟药业有限公司生产，批号：20070631），实验时研磨成细末，用蒸馏水配成浓度为0.024 g/ml的水溶液，放置4℃冰箱贮存备用。
1.2 仪器与试剂fj-2020型γ射线免疫计数器（国营262厂），mse-25型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），lauda-c3型循环恒温水浴箱（泰克仪器有限公司），motic6.0数码医学图象分析系统（厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司）。il-6、tnf-α试剂盒，均由解放军总医院科技开发中心放免所提供（批号：071125）。
2 方法
2.1 动物模型的建立、分组与给药健康成年wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（180±20）g（河北省实验动物中心提供）。随机分为5组：假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组，每组12只。采用腹主动脉缩窄法造模，用丝线将模型组、各给药组大鼠腹主动脉缩窄至7号针头粗细，假手术组丝线穿过腹主动脉，不结扎，其它操作相同。于造模4周后开始给药，高剂量组、低剂量组分别按30，15 g/kg的标准灌服，心宝丸组按0.24 g/kg的标准灌服，假手术组和模型组灌服等量生理盐水，1次/d，每次用药体积均按1 ml/100 g计算，持续4周。实验过程中假手术组、模型组、高剂量组、低剂量组、心宝丸组各死亡0，3，2，2，3只，最后进入检测的动物分别为12，9，10，10，9只。
2.2 检测指标
2.2.1 tnf-α和、il-6表达的放射免疫法检测于末次灌胃后禁食12 h，麻醉状态下股动脉取血，严格按试剂盒说明书检测血清tnf-α和il-6。
2.2.2 心肌胶原容积分数（cvf）分析取部分左室心肌组织固定，组织切片行masson染色，采用motic6.0数码图象分析系统分析cvf，每个标本选取3张切片，每切片观察5个视野，最后计算平均值。
2.3 统计学处理所有数据均采用spss 12 .0统计软件包进行分析，数据结果以±s，组间比较用单因素方差分析。
3 结果
见表1。表1 各组大鼠血清tnf-α、il-6及cvf结果比较（略）
结果显示，模型组大鼠血清tnf-α、il-6及心肌cvf较假手术组明显升高（p<0.01）；各治疗组血清tnf-α、il-6及心肌cvf均明显低于模型组（p<0.01）；且高剂量组优于低剂量组（p<0.01）。
4 讨论
慢性心衰属于祖国医学的胸痹、心悸、怔忡、水肿等病证的范畴。气虚、血瘀、水停为其主要病机，益气活血，强心利水为其主要治则。临床实践证实，葶苈生脉方具有益气、活血、利水之功效，是治疗心力衰竭的有效方药。
大量研究报道炎症细胞因子活化可破坏心脏结构和功能，使心衰进一步恶化，tnf-α是核心，此外还包括il-1β和il-6。本实验结果表明，心衰大鼠模型血清tnf-α、il-6含量升高，证实了上述观点。提示以tnf-α、il-6升高为标志的炎症机制参与了chf的进程，它们可能通过抑制心脏收缩、促进心肌细胞的凋亡、促进心室重构等途径参与chf的发生发展。tnf-α主要来源于激活的单核巨噬细胞，正常心肌细胞不能产生tnf-α，慢性心衰时在多种因素刺激下，心肌细胞产生大量tnf-α，它一方面可通过激活基质金属蛋白酶（mmps）和抑制基质金属蛋白酶抑制剂（timps）表达参与细胞外基质重塑，导致渐进性的左室扩张、左室泵衰竭和心肌细胞收缩功能障碍 ，另一方面又可直接作用于成纤维细胞导致胶原纤维的合成分泌增多［2］。此外，tnf-α还能促进其他炎性细胞因子il-6的表达和释放。il-6是一种具有多向性作用的细胞因子，主要由单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞等产生。有研究表明il-6可增加间质纤维化和胶原增生，且il-6水平的增高与ⅰ型和ⅲ型胶原沉积密切相关［3］。心肌胶原是细胞外基质的主要成分，它在维持心脏结构和功能方面起重要作用。正常时胶原的生成和降解在体内处于动态平衡状态，病理条件下，胶原的增多或减少都会引起心室重构及心肌纤维化，加重心衰。
本实验证明,葶苈生脉方对慢性心力衰竭大鼠血清tnf-α、il-6的表达具有明显的抑制作用，同时调节心肌胶原的代谢，阻止心室重构，改善心功能，达到治疗chf的目的。
【参考文献】
1］aronow ws·epidemiology, pathophysiology, prognosis, and treatment of systolic and diastolic heart failure［j］.cardiolrev,2006，14(3):108.
［2］马永娜，李拥军.肿瘤坏死因子-α和左心肌重构［j］.中国介入心脏病学杂志,2005,13(5):325.
［3］yue p, massie bm, simposin pc , et al. cytokine expression increases in nonmyocytes from rats with postinfarction heart failure［j］.am j physiol , 1998, 275(1pt2) : 250.
