作者：孟云辉， 田丽芬，于慧卿， 刘真， 李武卫 

【摘要】  目的探讨原发性高血压（eh）证型与外周血淋巴细胞过氧化物酶体增殖物激活受体信使核糖核酸（peroxisome proliferator-activated receptor γ，pparγ）mrna表达及颈动脉血管重构的关系。方法50例eh患者分为阴虚阳亢型组，痰湿壅盛型组，每组各25例，另选25例健康体检者为正常对照组。分离各组外周血淋巴细胞，采用逆转录-聚合酶链反应法（reverse transcription polymerase chain reaction，rt-pcr）检测各组pparγmrna表达，应用彩色多普勒超声诊断仪测量颈总动脉内膜-中膜厚度。结果与正常对照组比较，两组患者pparγ mrna均表达下调，且颈动脉内膜增厚（p<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛型组pparγ mrna表达下调及颈动脉内膜增厚明显（p<0.05）。结论淋巴细胞pparγ mrna表达可能与eh颈动脉重塑相关。

【关键词】  原发性高血压； 证型； 过氧化物酶体增殖物激活受体信使核糖核酸； 逆转录-聚合酶链反应法

           原发性高血压病（essential hypertension，eh）是一种多基因遗传与环境因素交互作用而产生的以动脉血压升高为特征的全身性疾病。www.11665.coM近年来研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activited receptor γ，pparr）与eh具有一定相关性［1］。pparγ存在于淋巴单核细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞，参与调节炎症，细胞增殖/凋亡，动脉粥样硬化等病理过程［2］。阴虚阳亢型和痰湿壅盛型是eh的常见证型。本研究采用通过观察比较此两种证型pparγ基因表达及颈动脉内膜-中膜厚度，为eh辨证分型提供分子水平依据，并且指导临床用药。

　　1  资料与方法

　　1.1  研究对象

　　1.1.1  病例选择2008～2009年在石家庄市中医院门诊或病房首次确诊为eh阴虚阳亢型25例（设为阴虚阳亢组），痰湿壅盛型25例（设为痰湿壅盛组），健康体检者（设为正常组）25例。各组病例资料见表1。表1  各组病例资料（略）

　　1.1.2  诊断标准西医诊断标准按照2005年《中国高血压防治指南》修订版中eh的诊断标准。中医证候诊断标准参照中华人民共和国国家药品监督管理局2002年制定颁布的《中药新药临床研究指导原则·中药新药治疗高血压病的临床研究指导原则》中阴虚阳亢型或痰湿壅盛型的诊断标准。

　　1.1.3  纳入标准西医诊断为eh；中医诊断为阴虚阳亢型或痰湿壅盛型。

　　1.1.4  排除标准年龄在 45岁以下或 70岁以上；继发性高血压；感染性疾病患者。

　　1.2  试剂及仪器人淋巴细胞分离液（晶美公司）、trizol（mrc公司）、半定量逆转录多聚酶链式反应试剂盒（fermentas公司）、pcr试剂盒（fermentas公司）、dna marker（fermentas公司）、pparγ引物（上游引物：5’-caagacaacctgctacaagc-3’ 下游引物：5’-tccttgtagatctcctgcag-3’， 上海生工工程技术服务有限公司）、β-actin引物（上游引物：5’- taaagacctctatgccaacacagt-3’ 下游引物：5’-cacgatggaggggccggactcatc-3’ ，上海生工工程技术服务有限公司）、琼脂糖（amresco公司）、eb（sigma公司）。低温离心机（journ公司）、pcr仪（pxe0.2，thermo公司）、电泳仪（dyy-8c型，北京市八一仪器厂）、凝胶成像分析系统（vilber lourmat公司）、彩色多普勒超声诊断仪（powervision6000，日本东芝） 。

　　1.3  rt-pcr法检测外周血淋巴细胞ppapγ mrna表达［3］抽清晨空腹肘静脉肝素抗凝血，1 000 r/min离心1 min，弃上清；盐水与血等体积混匀稀释；1 ml淋巴细胞分离液面上，用滴管沿壁缓慢加2 ml稀释血；2 000 r/min离心20 min；管内分为4层，吸出云雾层（淋巴细胞）；用5×生理盐水稀释，1 500 r/min离心10min，重复1次，分离淋巴细胞。提取细胞总rna，总rna逆转录成cdna，pcr扩增，反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35个循环，72℃延伸5 min。pcr产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶摄像系统采集电泳图像，用pparγ条带灰度与β-actin标准条带的比值进行半定量分析。

　　1.4  彩色多普勒超声测量颈总动脉内膜-中膜厚度由专人操作将探头置于颈部纵横扫查，观察颈总动脉，颈内动脉、颈外动脉，测量颈总动脉内膜-中膜厚度（imt）。

　　1.5  统计处理计量资料数据均用±s表示，采用spss12.0软件进行分析，组间比较用单因素方差分析，以p<0.05具有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1  各组pparγ mrna表达与正常对照组（0.77±0.11）比较，阴虚阳亢型组（0.35±0.10）及痰湿壅盛型（0.22±0.11）患者pparγ mrna表达减弱，组间比较具有显著性差异（p<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛组pparγ mrna表达下调明显（p<0.05）。见表2。

　　2.2  各组颈动脉血管病变与正常对照组比较，阴虚阳亢型和痰湿壅盛型高血压患者imt增厚，组间比较具有显著性差异（p<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛型imt增厚明显（p<0.05）。见表2。表2  各组pparγ mrna表达及imt变化（略）

　　3  讨论
   
　　动脉粥样硬化是一种常见病、多发病，是多种心脑血管疾病的病理基础。高血压是动脉粥样硬化的重要危险因素，可加速动脉粥样硬化的发生和发展。用高频探头彩色多普勒超声检测颈动脉内膜中层厚度已经被公认是当代判定动脉硬化程度最可靠的指标。国内外近年来大量临床与流行病学研究提示颈动脉的厚度与冠心病、脑血管病显著相关［4］。本研究结果显示，痰湿壅盛型和阴虚阳亢型eh患者血压均高于正常对照组，且痰湿壅盛型增高较阴虚阳亢型明显。同时痰湿壅盛型imt增厚较阴虚阳亢型明显，表明高血压是引起内中膜厚度增加的重要因素，且血压越高，内中膜增厚越明显。在中医辨证分型中，痰湿壅盛型血管重构较阴虚阳亢型明显，提示作为病理产物和致病因素的痰湿在血管重构中起重要作用。
   
　　过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activited receptors, ppars）是一类由配体激活的核转录因子超家族成员，ppars有3种亚型：pparα、pparβ（亦称pparδ）、pparγ。其中pparγ基因在人类位于3号染色体。pparγ至少有7种亚型，γ1和γ2是最主要的亚型，主要存在于脂肪组织，是参与调节糖、脂质代谢的重要因子。近年发现pparγ还存在于血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、心脏组织，参与调节炎症，细胞凋亡，平滑肌增殖，迁移及动脉粥样硬化等病理过程。本研究结果显示，健康人和eh患者外周血淋巴细胞均有pparγ基因表达，且痰湿壅盛型和阴虚阳亢型eh患者外周血淋巴细胞pparγ基因表达减弱，提示pparγ可能参与eh循环中淋巴细胞功能的调节，参与颈动脉重构。在中医辨证分型中，痰湿壅盛型pparγ表达较阴虚阳亢型明显减弱，提示pparγ表达的变化可作为高血压辨证分型依据。

【参考文献】
  1］付燕.ppars与心血管疾病［j］.医学分子生物学杂志，2004，1(6)：376.

　　［2］刘尊敬，刘运海，杨期东. pparγ配体和相关血管病变的防治［j］.国外医学·神经病学神经外科学分册，2004，31（2）：117.

　　［3］孟云辉，涂 欣，涂晋文，等.天麻钩藤饮含药血清对人脐静脉内皮细胞保护作用的研究［j］.中国实验方剂学杂志，2007，13（1）：26.

　　［4］杨丽秀.颈动脉超声在心血管疾病中的应用［j］.医学综述，2008，14（6）：947.