作者：秦红兵 杨朝晔 熊存全 朱清 

【摘要】  　　目的观察麋鹿角醇提液对d-半乳糖（d-gal）诱导衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法取icr小鼠54只，雌雄兼用，随机分成4组：正常对照组（ng，n=12），模型对照组（mg，n=14），麋鹿角醇提液低剂量组（lg，2 g·kg-1·d-1，n=14），麋鹿角醇提液高剂量组（hg，4 g·kg-1·d-1，n=14）。正常对照组给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用d-半乳糖（d-gal）按120 mg·kg-1·d-1背部皮下注射6周，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组和高剂量组分别给予相应浓度的麋鹿角醇提液，正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠（cmc）。然后测定小鼠血清超氧化物歧化酶（sod）活力和丙二醛（mda）含量，并测定脑中的脂褐质（lp）含量以及肝中谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）活性。结果模型小鼠血清中sod以及肝中gsh-px活力均下降，血清中mda以及脑中的lp含量均升高；而麋鹿角醇提液能提高衰老小鼠血清中sod的活力，并减少血清中mda及脑中lp含量。结论麋鹿角醇提液对d-gal诱导衰老小鼠具有抗氧化作用。

【关键词】  麋鹿角 衰老模型 d-半乳糖 抗氧化

　　abstract：objectiveto investigate the antioxidation of elk antlers ethanolic extract on aging model mice induced by d-galactose. methods54 icr mice were randomly divided into 4 groups: normal control group (ng, n=12), model control group (mg，n=14), low-dose drug treatment group (lg，2 g·kg-1·d-1，n=14), high-dose drug treatment group (hg，4 g·kg-1·d-1，n=14).ng was subcutaneously injected with saline, other groups were given subcutaneously injection of d-galactose (d-gal) at 120 mg/kg per day for six weeks to produce subacute aging model. at the same time lg was orally administered elk antlers ethanolic extract at dose 2 g/kg and hg at 4 g/kg per day. ng and mg were given orally the same volume 0.5% carboxymethyl cellulose sodium. then the activity of superoxide dismutase（sod）and the content of malondialdehyde (mda)  in serum  were detected. the lipofuscin content in brain and glutathione peroxidase (gsh-px) activity in liver were determined.resultsthe activities of sod and gsh-px were decreased and the contents of mda and lp were increased in model mice. elk antlers ethanolic extract could enhance the sod activity and reduce the content of mda and lp in model mice. conclusionelk antlers ethanolic extract has  antioxidation on aging model mice induced by d-gal.

　　key words：elk antlers;  aging model;  d-galactose;  antioxidation
   
　　麋鹿角为古方记载之传统补益类名贵中药，传统中医临床应用已经证实麋鹿角具有强精益血、滋阴壮阳等作用。www.11665.Com因历史原因，麋鹿在我国已近绝灭，麋鹿角几乎无药可用。如今，人工繁殖技术的成功确保了药用资源和生态环境的协调发展，为麋鹿角恢复药用提供了来源［1］。目前，江苏大丰糜鹿保护区麋鹿已由1986年的39头繁殖到一千三百多头，并且野生放养自然繁殖成功，野生种群数达一百多头，每年自然脱落下来的麋鹿角也越来越多，现已达3 000 kg，这为其开发研究提供了充足的物质基础。现代药理学研究发现麋鹿角的乙醇提取物具有耐疲劳、抗衰老的药理作用［2］。本实验运用d-半乳糖诱导衰老小鼠模型，观察麋鹿角醇提液对衰老模型小鼠的抗氧化作用，探讨麋鹿角抗衰老的作用机制，为麋鹿角的开发利用提供相关的理论依据。

　　1  材料

　　1.1  动物icr小鼠54只，体质量（18±2） g，雌雄兼用，由南通大学动物实验中心提供〔合格证：syxk（苏）2007-0021〕。

　　1.2  受试药物配制及试剂麋鹿角，由江苏大丰麋鹿保护区提供，将麋鹿角刨片、粉碎成约100目粉末，准确称取麋鹿角粉末200 g，加入70%乙醇溶液浸泡3次，48 h/次，合并浸泡液并过滤，然后减压蒸馏，浓缩至80 ml，即为麋鹿角乙醇提取浓缩液，浓度为2.5 g/ml。用0.5%羧甲基纤维素钠(cmc)溶液配制成所需浓度的麋鹿角醇提液备用。d-半乳糖为美国amerisco公司产品，超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)、脂褐质（lp）以及谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

　　2  方法

　　2.1  分组与给药54只icr小鼠，雌雄兼用，随机分成4组：正常对照组（ng，n=12），模型对照组（mg，n=14），麋鹿角醇提液低剂量组（lg，2 g/kg，n=14），麋鹿角醇提液高剂量组（hg，4 g/kg，n=14）。正常对照组按0.1 ml/10 g给予背部皮下注射生理盐水，其余各组用d-半乳糖（d-gal）按120mg/kg背部皮下注射6周，1次/d，造成亚急性衰老模型。造模同时，麋鹿角醇提液低剂量组灌胃生药剂量2 g/kg麋鹿角醇提液（0.2 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g），高剂量组给予灌胃生药剂量4 g/kg麋鹿角醇提液（0.4 g/ml麋鹿角醇提液，给药容积0.1 ml/10g），正常对照组和模型对照组给予相同容积的0.5% 羧甲基纤维素钠。

　　2.2  老化相关产物及抗氧化酶的测定末次给药30 min 后，眼眶取血，3 000 r/min，离心10 min，取血清按试剂盒说明书中方法测定sod 的活力和mda 的含量。然后处死小鼠，取小鼠的脑组织与肝组织，加入预冷生理盐水进行匀浆，然后按试剂盒中提供方法测定脑中脂褐质（lp）含量以及肝中gsh-px活性。

　　2.3  统计方法数据用±s表示，用spss11.0统计软件，采用方差分析，组间比较采用t检验。以p<0.05作为统计显著性差异标准。

　　3  结果

　　3.1  一般情况衰老模型组连续给d-半乳糖6周后，毛色逐渐枯槁无光泽，易脱落，皮肤弹性差，精神萎靡，倦怠嗜睡，群体喜扎堆，进食明显减少，体重增加缓慢，呈现出明显衰老体征（见表1），各组小鼠初始体质量基本一致，无统计学差异；与正常组比较，模型组的末次体质量和增重都有所降低（p<0.05）。表1  d-gal诱导衰老模型小鼠体质量变化情况(略)

　　3.2  麋鹿角醇提液对衰老小鼠的抗氧化作用如表2 所示，模型小鼠血清中mda含量及脑中lp含量增加，麋鹿角醇提液低剂量与高剂量组均能降低血清中mda含量（p<0.05），麋鹿角醇提液高剂量组可以减少脑中lp的含量（p<0.05），低剂量组虽有降低lp的趋势但未能达统计学意义（p>0.05）。如表3 所示，模型小鼠血清中sod及肝中gsh-px活力下降，麋鹿角醇提液低剂量与高剂量组均能提高血清中sod活力（p<0.05），麋鹿角醇提液两个剂量组虽有提高肝gsh-px活力趋势，但没有统计学意义（p>0.05）。表2  麋鹿角乙醇提取液对小鼠老化相关产物的影响，表3  麋鹿角醇提取液对d-gal衰老模型小鼠抗氧化酶活性的影响(略)。

　　4  讨论
   
　　根据衰老的代谢学说,衰老是机体新陈代谢障碍的结果，糖代谢紊乱必然会引起心、肝、肾、脑等重要器官代谢异常，最终出现衰老。d-gal衰老模型在国内早已得到了广泛应用，其机制为d-gal在醛糖还原酶催化下还原成为半乳糖，堆积在细胞内形成高渗透压；d-gal经氧化酶氧化分解为co2和木酮糖，同时伴有o2和过氧化氢的产生，大量的自由基与体内的生物大分子发生反应，并破坏或消耗机体抗氧化物质，导致组织细胞受损，出现细胞衰老和死亡［3～5］。体内自由基产生过多，超出机体调节能力，导致自由基链锁反应诱发脂质过氧化作用，生成过氧化脂质（lpo），并不断产生自由基。脂褐质的化学本质是膜脂质和蛋白氧化后的一种复合产物，即schiff碱，测定schiff碱的含量，可知道细胞被自由基损伤的程度，即过氧化程度。mda 是自由基攻击生物体的降解产物，mda 生成的多少可间接反映组织细胞损伤的程度。超氧化物歧化酶（sod）为自由基清除剂，它广泛存在于生物体的各种组织中，能清除自由基o-2·（超氧阴离子自由基）。谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统，能清除脂质氢过氧化物(rooh)和h2o2，分布于肝脏、胃肠、睾丸等组织中，其中肝含量较高，故测肝的gsh-px较好。由于sod和gsh-px是机体清除自由基的主要抗氧化酶，所以测定sod与gsh-px的含量可间接反映机体清除自由基的能力。
   
　　本研究表明，模型小鼠衰老体征明显，脂质过氧化产物mda和lp均增加，而抗氧化酶sod与gsh-px活力均下降，说明衰老模型复制成功。而麋鹿角醇提液能减少氧自由基产物mda以及lp，减少组织细胞过氧化的损伤，增加机体内抗氧化酶sod与gsh-px的活性，可增强机体清除自由基的能力，表明具有较好的抗氧化作用。这可能是其抗衰老机制的一个方面。

【参考文献】
  　　［1］汪银银，彭蕴茹，方泰惠，等．麋鹿角的传统功效与现代研究［j］．现代中药研究与实践，2007，27（2）：30.

　　［2］秦红兵，杨朝晔，朱清，等．麋鹿角乙醇提取液抗衰老作用研究［j］．中成药，2004，26(4)：322.

　　［3］王赟，陆承荣，宋建贞．d-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生理生化改变［j］．中国比较医学杂志，2003，13(14)：236.

　　［4］malaguanera l ,ferlito l ,di mauro s ,et al . immunosenescence and cancer. a reviewe［j ］ . arch gerontol geriatr ,2001 ,32 (2) :77.

　　［5］熊顺华，郭青平，唐俊明，等．吡咯喹啉醌对d-半乳糖致衰老大鼠海马神经元的影响［j］．基础医学与临床，2006，26(9)：965.