作者：林静吟 冯小映 ,陈玉兴
【摘要】 目的 探讨跌打消肿贴皮肤用药的抗炎镇痛作用。方法 采用大鼠蛋清性足跖急性炎性肿胀实验、大鼠棉球肉芽组织增生实验、二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀实验及冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应实验观察跌打消肿贴皮肤用药的抗炎镇痛作用。结果 ①跌打消肿贴10.80 g药膏·kg-1、5.40 g药膏·kg-1、2.70 g药膏·kg-1组大鼠致炎后1 h、2 h、4 h足肿胀度均显著减小，皮肤用药对蛋清所致大鼠足跖急性炎性肿胀有明显抑制作用。②跌打消肿贴10.80 g药膏·kg-1、5.40 g药膏·kg-1、2.70 g药膏·kg-1组大鼠肉芽肿湿重、肉芽肿干重均显著减小，皮肤用药对大鼠棉球肉芽组织增生有显著抑制作用。③跌打消肿贴15.60 g药膏·kg-1、7.80 g药膏·kg-1、3.90 g药膏·kg-1组小鼠耳廓肿胀度均明显减小，皮肤用药对二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀有显著抑制作用。④跌打消肿贴15.60 g药膏·kg-1、7.80 g药膏·kg-1组小鼠扭体次数均显著减小，皮肤用药对冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应有一定抑制作用。wWw.11665.COm结论 跌打消肿贴对急性炎性肿胀有明显抑制作用，对化学物质刺激疼痛有一定抑制作用。
【关键词】 跌打消肿贴;皮肤用药;抗炎;镇痛
abstract:objective to study the antiinflammatory and analgesic effects of diedaxiaozhong plaster in rat and mouse models. methods the antiinflammatory and analgesic effects of diedaxiaozhong plaster was studied with acute inflammation model in rats with egg whiteinduced acute paw swelling,cottoninduced granuloma experiment in rats,xyleneinduced ear edema in mice,and writhing response induced by acetic acid in mice. results ① paw swelling after inflammation in rats was significantly alleviated 1 h,2 h,and 4h after applying with diedaxiaozhong powder at the doses equivalent to 10.80 g·kg-1. 5.40 g kg·kg-1,and 2.70 g·kg-1,indicating that topical application of diedaxiaozhong powder had significantly inhibitory effects on egg whiteinduced paw inflammatory swelling in rats. ② wet weight and dry weight of cottoninduced granuloma significantly decreased 1 h,2 h,and 4 h after applying with diedaxiaozhong powder at the doses equivalent to 10.80 g·kg-1. 5.40 g·kg-1,and 2.70 g·kg-1,indicating that topical application of diedaxiaozhong plaster had significantly inhibitory effects on cottoninduced granuloma in rats. ③ xyleneinduced ear edema in mice was significantly reduced after topical application of diedaxiaozhong plaster at the doses equivalent to 15.60 g·kg-1,7.80 g·kg-1,and 3.90 g·kg-1,indicating that topical application of diedaxiaozhong plaster had significantly inhibitory effects xyleneinduced ear edema in mice. ④ writhing times of mice in the groups at the doses of after topical application of diedaxiaozhong powder at the doses equivalent to 15.60 g·kg-1,7.80 g·kg-1 were significantly reduced,indicating that topical application of diedaxiaozhong plaster had certain inhibitory effects on writhing response induced by acetic acid in mice. conclusion diedaxiaozhong plaster had significant inhibitory effects on acute inflammatory edema,and had certain inhibitory effects on pains due to chemical stimulation.
key words:diedaxiaozhong plaster,topical application,antiinflammation,analgesia
跌打消肿贴是以我院长期临床应用的传统膏药跌打消肿膏改进而成，它是新型的透皮增效剂型膏药，由药粉袋和含有增效剂的溶剂组成。该制剂含药量大，透皮性强、疗效持久，有效成分直接透入肌肤，进入病变组织，具有清热解毒、活血化淤、消肿止痛的作用，主要用于各种跌打损伤、陈旧性扭伤、挫伤、关节脱位、肿痛等。本研究主要通过对大鼠的抗炎镇痛实验[1]研究跌打消肿贴皮肤用药对动物的药效[2-6]影响，为跌打消肿贴的临床应用提供实验依据。
1 材料与仪器
1.1 药品
1.1.1 供试品 跌打消肿贴(含增效剂)由本院制剂室提供，批号：20090104。
1.1.2 对照品 消痛贴膏，西藏奇正藏药股份有限公司。
1.2 试剂
乙醚，广州化学试剂厂产品，批号200710241;二甲苯，洛阳市化学试剂厂产品，批号060314;冰醋酸，天津市大茂化学试剂厂产品，批号20070628。
1.3 动物
spf级sd大鼠50只，雌雄各半，体质量180～220 g,许可证号为scxk(粤)20080002，由广东省医学实验动物中心提供，本实验环境设施使用许可证号为syxk(粤)20050059。spf级nih小鼠50只，雌雄各半，许可证号为scxk(粤)20080002，由广东省医学实验动物中心提供。本实验使用spf级动物实验室，实验环境设施许可证号为syxk(粤)20050059。
1.4 仪器
jj3000动物 电子 秤，g&g公司产品;yls7a足趾容积测量仪，山东医学 科学 院设备站产品;bs224s电子天平(1/万)，德国sartorius产品;8 mm金属打孔器，广州正宏医疗器械设备有限公司。
2 方法[7,8]
2.1 药物准备
2.1.1 跌打消肿贴为临床制剂，药贴面积较大，不利于贴于动物身上，试验时剪开制剂取出药粉，按药粉∶增效剂=1∶2(质量比)把药粉调成药膏(最大浓度)，即30 g药膏含10 g药粉，以便于药物固定在动物身上并与动物皮肤接触。
拟定跌打消肿贴每贴使用8 h，相当于人日用量为20 g药粉，以此临床日用量作为基础， 参考 文献 [1]剂量换算方法“体表面积比”换算动物临床等效剂量，为1.80 g药粉·kg-1。设计跌打消肿贴高剂量为3.60 g药粉·kg-1、中剂量为1.80 g药粉·kg-1、低剂量为0.90 g药粉·kg-1(分别为2倍临床等效剂量、临床等效剂量、1/2临床等效剂量)。实验时药膏高、中、低剂量应用时分别相当于10.80、5.40、2.70 g药膏·kg-1，4 ℃冰箱保存。
2.1.2 消痛贴膏处理方法和跌打消肿贴基本一致，试验时剪开制剂取出药粉，按药粉∶润湿剂=1∶2(质量比)把药粉调成药膏，即30 g药膏含10 g药粉，以便于药物固定在动物身上并与动物皮肤接触。
药品说明书标示每贴药芯袋内装黄色至黄褐色粉末1.2 g，使用时以润湿剂湿润后贴敷患处，每贴使用24 h,相当于每日应用1.2 g药粉，以此临床日用量为基础，剂量换算方法同“2.1.1”。消痛贴膏大鼠药效学实验剂量为0.22 g药粉·kg-1，应用时相当于0.66 g药膏·kg-1，4 ℃冰箱保存。
2.2 皮肤准备
试验开始前24 h将各组大鼠背部脊柱两侧用手术剪剪毛后再用8%的硫化钠溶液脱毛，脊柱两侧对称处各脱毛1块，每块脱毛面积约4 cm×5 cm，去毛面积约为40 cm2 ，剪毛和脱毛时动作应小心轻柔，以免大鼠皮肤受损，脱毛后以温水轻轻洗净去毛区皮肤，24 h后检查去毛区皮肤是否有损伤。各组大鼠涂敷药物前均以温水洗净去毛区皮肤。小鼠处理方法同大鼠。
2.3 大鼠蛋清性足跖急性炎性肿胀测定[1]
取spf级sd大鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，分别为对照组、消痛贴膏组、跌打消肿贴高、中、低剂量组，每组10只。消痛贴膏实验剂量为0.66 g药膏·kg-1，跌打消肿贴高剂量为10.80 g药膏·kg-1、中剂量为5.40 g药膏·kg-1、低剂量为2.70 g药膏·kg-1(分别为2倍临床等效剂量、临床等效剂量、1/2临床等效剂量)。剪毛和脱毛方法同“2.2”皮肤准备。供试品药物各剂量组及阳性对照药药膏使用前置于40 ℃水浴锅中温浴加热，保持40 ℃膏温，然后按剂量在各组大鼠去毛区皮肤涂敷给药，每天1次，连续5 d;对照组同法涂敷等体积药物溶媒增效剂。药物涂敷后用无刺激性纱布胶布固定，使药物与皮肤接触良好。每天涂敷药物6 h后去除药物，以温水洗净去毛区皮肤。末次涂药前，在每只大鼠右后足跖处作一标记，乙醚浅麻醉后以yls7a足趾容积测量仪测量各组大鼠右后足跖体积，作为大鼠致炎前右后足正常体积。末次涂药后1 h，在各组大鼠右后足跖皮下注射新鲜蛋清0.2 ml·只-1，同法测定注入蛋清后1、2、4 h各组大鼠右后足跖体积，减去致炎前大鼠右后足正常体积，作为各组大鼠在不同时间的足肿胀度。
2.4 大鼠棉球肉芽组织增生测定[1]
取spf级sd大鼠50只，雌雄各半，分组同前。药膏剂量设置及动物备皮方法同“2.3”。各组大鼠乙醚浅麻醉，无菌操作下经胸腹部切口1 cm，将2个无菌棉球(每个棉球重20 mg，高压灭菌)分别植入大鼠两侧腋窝皮下，切口缝合，碘酊消毒。植入棉球当天各组大鼠按剂量涂敷相应药物给药。涂敷前后的准备同“2.3”，连续7 d,每天涂敷药物6 h后去除药物，以温水洗净去毛区皮肤。末次涂药后1h脱颈椎处死大鼠，取出大鼠两侧腋窝皮下棉球，称棉球湿重，置60 ℃烘箱烘6 h至恒重，称棉球干重。以棉球湿重、棉球干重数值减去原棉球重量(20 mg)即为肉芽肿湿重、肉芽肿干重， 计算 抑制率。
肉芽肿干重抑制率(%)=(对照组肉芽肿干重-给药组肉芽肿干重)/ 对照组肉芽肿干重×100%
2.5 二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀实验[1]
取spf级nih小鼠50只，雌雄各半，分组同前。消痛贴膏小鼠药效学实验剂量为0.93 g药膏·kg-1，跌打消肿贴小鼠药效学高剂量为15.60 g药膏·kg-1、中剂量为7.80 g药膏·kg-1、低剂量为3.90 g药膏·kg-1(分别为2倍临床等效剂量、临床等效剂量、1/2临床等效剂量)。试验开始前24 h将各组小鼠背部脊柱两侧用手术剪剪毛后再用8%的硫化钠溶液脱毛，脊柱两侧对称处各脱毛一块，每块脱毛面积约1 cm×3 cm，去毛面积约为6 cm2 ，剪毛和脱毛方法同“2.2”皮肤准备。各组小鼠按剂量涂敷相应药物给药。涂敷前后的准备同“2.3”。每天涂敷药物6 h后去除药物，以温水洗净去毛区皮肤。末次涂药后30 min，各组小鼠右耳均涂抹二甲苯溶液20 μl·只-1，4 h后脱颈椎处死小鼠，剪下左右耳，用直径8 mm金属打孔器打下小鼠左右耳片，称重，以右耳重量减去左耳重量之差作为小鼠二甲苯耳廓炎性肿胀度，计算抑制率。
抑制率(%)=(对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度)/ 对照组耳肿胀度×100%
2.6 对冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应实验[1]
取spf级nih小鼠50只，雌雄各半,分组同前。药膏剂量设置及动物备皮方法同“2.5”。末次涂药1 h后，各组小鼠均腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.1 ml·10 g-1体质量，计时，记录注射冰醋酸溶液后20 min内各组小鼠出现的扭体反应次数(扭体反应：腹部凹陷、伸展后肢、臀部抬高)，计算抑制率。
抑制率(%)=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/ 对照组扭体次数×100%
2.7 统计方法
计量资料以 (±s)表示，多组间均数的比较采用oneway anova snk法，由spss15.0统计软件完成，p<0.05为差异有显著性。
3 结果
3.1 跌打消肿贴对蛋清所致大鼠足跖急性炎性肿胀的影响
表1显示，与对照组相比，消痛贴膏组和跌打消肿贴高、中、低剂量组大鼠致炎后1 h、2 h、4 h足肿胀度均显著减小(p<0.01)。
3.2 跌打消肿贴对大鼠棉球肉芽组织增生的影响
表2显示，与对照组相比，消痛贴膏组和跌打消肿贴高、中、低剂量组大鼠肉芽肿湿重、肉芽肿干重均显著减小(p<0.01)。
3.3 跌打消肿贴对二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀的影响
表3显示，与对照组相比，消痛贴膏组和跌打消肿贴高、中、低剂量组小鼠耳廓肿胀度均明显减小(p<0.01)。
3.4 跌打消肿贴对冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应的影响
表4显示，与对照组相比，消痛贴膏组和跌打消肿贴高、中、低剂量组小鼠扭体次数均显著减小(p<0.01)。表1 跌打消肿贴皮肤用药对蛋清所致大鼠足跖急性炎性肿胀的影响与对照组相比：*p<0.05,**p<0.01表2 跌打消肿贴皮肤用药对大鼠棉球肉芽组织增生的影响与对照组相比：**p<0.01表3 跌打消肿贴皮肤用药对二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀的影响与对照组相比：**p<0.01表4 跌打消肿贴皮肤用药对冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应的影响与对照组相比：**p<0.01
4 讨论
急性软组织损伤是骨伤科临床常见病、多发病，属于中医筋伤范畴，祖国医学认为该病的病因病机是外力致伤，筋肉、脉络损伤，淤血为患，因而得出“活血化淤”的 治疗 大法[9]。跌打消肿贴是以我院长期临床应用传统膏药“跌打消肿膏”改进而成，它是新型的透皮增效剂型膏药，由药粉袋和含有增效剂的溶剂组成。该方选用三黄粉(大黄、黄柏、黄芩)、栀子清热解毒、破积滞、行淤血、解肌热为主;配以凉血活血化淤、消肿止痛的药物银花、地丁、公英、地骨皮、入地金牛、芙蓉叶、五加藤为辅;佐以祛风通络的药物泽兰、土荆芥、刘寄奴、无名异;再以当归、桃仁、白芷、姜黄、苏木等活血化淤、消肿止痛药物为使;共奏凉血解毒、活血化淤、祛风通络、消肿止痛之功。该制剂具有含药量大、透皮性强、疗效持久、皮肤刺激少、不易引起过敏等优点，有效成分能直接透入肌肤，进入病变组织，具有清热解毒、活血化淤、消肿止痛的作用，主要用于各种跌打损伤、陈旧性扭伤、挫伤、关节脱位、肿痛等。
为了进一步了解跌打消肿贴的药效学作用，本研究建立了大鼠蛋清性足跖急性炎性肿胀、大鼠棉球肉芽组织增生、二甲苯所致小鼠耳廓炎性肿胀及冰醋酸所致小鼠疼痛扭体反应等实验模型[10]，研究了跌打消肿贴对急性炎性肿胀及疼痛的抑制作用。实验证明跌打消肿贴对急性炎性肿胀有明显抑制作用，对化学物质刺激疼痛有一定抑制作用。为开发新药源，更好在临床中发挥药物的疗效提供了理论依据。
【 参考 文献 】
[1] 陈奇.中药药理研究方法学[m].北京：人民卫生出版社,2000：627-629.
[2] 丁伟国，章建华.中医药治疗急性软组织损伤实验研究进展[j].甘肃中医学院学报，2008，1(25)：51-53.
[3] 李世根，卢锦.风痛宁片的药效学研究[j].实用医技杂志，2007，34(14)：4693-4694.
[4] 刘元，宋志钊，李星宇，等.跌打扭伤灵酊的药效学研究[j].
