颈性心绞痛家兔模型颈椎椎间盘病理学观察
【摘要】 目的观察颈性心绞痛家兔模型颈椎椎间盘病理学变化。方法选用大耳白兔，采用低头干预使家兔颈椎退变失稳并注射瘀血使其诱发出现心肌缺血性改变，建立颈性心绞痛动物模型，运用masson染色法观察颈椎椎间盘的病理变化。结果模型组造模12周时masson染色可见深绿色胶原纤维毛糙，后侧纤维束间有明显裂隙，髓核皱缩可见偏一侧分布。且有沿后侧突出趋势。结论说明长期的异常应力及炎症刺激诱发的颈性心绞痛也能引发颈椎间盘的早期退变。
【关键词】 颈性心绞痛； 椎间盘； 动物模型
颈椎退行性变、椎体失稳，可导致支配心脏的交感神经受累而引起心肌缺血。颈性心绞痛对颈椎结构会产生什么样的影响呢？由此我们对颈性心绞痛家兔颈椎椎间盘的病理改变进行观察。
1 材料与仪器
1.1 动物健康大耳白兔40只，6个月龄，体质量2.0～2.5 kg，雌雄不拘，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供，动物合格证号：scxk(京)2005-0004。各组家兔均在贵阳中医学院实验动物研究所分笼饲养，喂标准兔饲料。
1.2 试剂多聚甲醛，浓甲酸:分析纯，北京益利精细化学品有限公司；浓盐酸，酸性品红，丽春红，橙黄g，亮绿sf，磷钨酸：分析纯，北京化工厂；多聚赖氨酸（粘片剂）poly-l-lysine:zli-9006；苏木素：sigma-aldrich ltd，usa lot:074k4351，伊红：sigma-aldrich ltd，usa lot:064k4342。WWW.11665.COM
1.3 设备光学显微镜：nikon o-a-s型，日本。石蜡切片机：aihua qpj-ic，中国。生物组织自动脱水机:aihua tsj-ia，中国。生物组织包埋机：aihua bmj-1，中国。图象分析系统：biomias2001图象分析系统, 四川大学图象图形研究所。
2 方法
2.1 颈性心绞痛动物模型制备［1］40只家兔适应性饲养1周后，随机分为对照组和模型组。家兔用3％戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，并取俯卧位固定于操作台上，常规术野碘酒、酒精消毒，c臂x光机引导下穿刺，抵达家兔左侧第7颈椎横突，选择小关节下角处为进针点，向深面进针至针尖抵达骨质，用制备好的3 ml瘀血注入，瘀血浸润模型组家兔左侧颈夹肌，横突间肌与横突棘肌的肌内与肌间隙。待家兔苏醒后，送回笼养。次日，将模型组家兔放置于特制的低头位框架中以改变颈部正常应力分布，每只家兔的低头角度为45°，1次/d，每次低头5 h，松解后笼中自由饲养。两周后重复注射1次。低头饲养12周。对照组不做任何处理。
2.2 观察指标和方法
2.2.1 组织学观察造模后12周取材，采用空气栓塞法处死家兔，即刻取颈椎6～7，生理盐水冲洗后放入已准备好的4%多聚甲醛固定液瓶中。经脱水、脱钙、石蜡包埋、切片,he及masson染色，进行组织病理学检查。
2.2.2 显微镜观察及图像分析显微镜的物镜固定为：40×。光栅孔径：0.25。光源电压：9 mv。曝光时间：0.1 ms。色温为:5 500 k。分辨率：1 600×1 200。图像采集程序为：biomias2001。
3 结果
3.1 大体标本观察肉眼观察对照组及模型组均可见椎间平滑完整的纤维环包绕髓核，髓核呈胶冻状发亮。 大体未见明显异常。
3.2 光镜观察结果对照组masson染色(见图1)可见深绿色胶原纤维呈致密板层状有序排列，髓核居中，其内髓核细胞亦呈圆环状层层排列，且层次分明。模型组造模12周时masson染色(见图2)可见深绿色胶原纤维毛糙，后侧纤维束间有明显裂隙，髓核皱缩可见偏一侧分布。且有沿后侧突出趋势。
4 讨论
众所周知，生物力学因素是诱发和促进椎间盘退变的一个重要外部条件［2］。颈椎间盘处受长期屈曲应力失衡状态的影响，是导致颈椎间盘加速退变的主要原因之一［3］。余氏［4］通过动物颈部在体测量，认为颈部肌肉病变使颈椎正常应力发生变化，导致颈椎力学失衡、颈曲改变和骨质增生。其肌组织自由基反应增强［5］，颈椎失衡及局部炎症可导致颈肌本身发生明显的病理变化，而颈肌的异常又对颈椎静力平衡产生重要影响，这可能是颈性心绞痛的发病机理之一［6］。因此本实验选取该节段作为长时间屈颈位导致颈椎间盘退变的研究对象。由于骨骼肌对维持颈椎动力平衡起着非常重要的作用，其发生病理性异常必然会影响颈椎间盘组织的正常生理状态，进而引发间盘的退变。目前相关研究认为，在颈椎屈曲过程中，颈部肌群一方面通过改变椎间盘上的应力分布或增加椎间盘内压，影响椎间盘的营养代谢引起椎间盘退变；另一方面是引起前屈肌群及后伸肌群痉挛、缺血、变性等，破坏动力平衡，加剧椎间盘退变，导致早期颈椎病的发生。
正常家兔颈椎间盘由外周的纤维环和中央的髓核组成，上下缘则由透明软骨终板封闭。通过本实验对兔颈椎间盘的大体病理观察，我们发现：模型组家兔颈椎间盘出现了纤维环粗糙，髓核皱缩，内部纤维网状结构消失，髓核与纤维环交界处、纤维环层还出现明显沿走行方向的裂隙，髓核表现为脱水皱缩，体积缩小,具有轻微后突趋势，髓核内细胞有向纤维环迁移趋势等病理变化。这可能与颈椎屈曲位时椎间盘前方受到较大的压应力负荷，髓核易于向后移位有关。说明长期的异常应力及炎症刺激诱发的颈性心绞痛也能引发颈椎间盘的早期退变。
【参考文献】
［1］唐东昕,杨 柱,金亚弦.应用气血理论建立颈性心绞痛动物模型的探讨［j］.辽宁中医杂志,2008，35（8）：1148.
［2］taylor tk，melose j，burkhardt d，et al spinal biomechanics and aging are major determinants of the proteoglycan metabolism of intervertebral disc［j］.cell spine，2000，25:3014.
［3］ayad s,weiss jb. biochemistry of the intervertebral disc［a］.//jayson miv. the lumbar spine and back pain［m］.edingburgh:chruchill-linvinigstone,1986:100.
［4］余家阔. 颈椎病生物力学发病机制的实验研究［j］.安徽医科大学学报，1990，25（1）：47.
［5］唐东昕，杨 柱，于 浩.针刺对颈性心绞痛动物模型颈肌自由基变化的影响［j］.江苏中医药,2009,41（3）：69.
［6］唐东昕，杨 柱.颈性心绞痛动物模型的肌组织病理学观察［j］.时珍国医国药,2009,20（4）：865.
