【摘要】 目的 观察电针对大鼠缺血再灌注损伤脑组织超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)含量的影响。方法 54只成年sd雄性大鼠按完全随机法分为正常组，假手术组每组各12只，模型组、电针组每组各15只。采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型,于脑缺血再灌注3h、15h、27h动态观察各组脑缺血大鼠再灌注损伤脑组织sod活性和mda含量。结果 各造模组大鼠血浆sod活性比正常组均有所降低,模型组与各组比较有显著性差异(p<0.05)；各造模组大鼠血浆mda的含量比正常组均有所升高, 模型组与各组比较有显著性差异(p<0.01)；电针组与正常组比较有显著性差异(p<0.05)。结论 电针在某种程度上能够抑制自由基的产生及连锁反应的发生，提高sod活性，降低mda的含量，从而起到清除氧自由基、减轻再灌注损伤、保护脑细胞的作用。
【关键词】 电针 大鼠 缺血再灌注 sod mda
在缺血再灌注过程中，钙离子超载，氧自由基的大量形成和脂质过氧化的增加是加重脑细胞损伤的主要病理过程，钙离子超载与氧自由基的生成和释放密切相关，两者相互促进。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，sod）是生物体内主要的超氧自由基清除剂，丙二醛（malonyl-diadehyde，mda）是脂质过氧化反应的最终产物。www.11665.cOm脑缺血后脂质过氧化反应活跃，mda产生增多，sod则因消耗增多而减少。[1]文献曾报道，电针对家兔心肌缺血再灌注损伤心功能具有保护作用，[2]本实验通过观察电针疗法对大鼠缺血再灌注缺血的侧脑组织中超氧化物歧化酶(sod)活性及丙二醛(mda)含量的影响，以探讨电针对脑组织缺血再灌注损伤的保护作用，现将实验方法及结果报道如下。
1 材料
1.1实验动物：选用成年sd大鼠54只，雄性，体重350±40克。清洁级，由上海中医药大学实验动物中心提供。
1.2主要实验仪器及设备：g-6805-h 电针治疗仪（上海金山汇丰电子器材厂制造），mdc-500 型半导体激光治疗仪（上海曼迪森科贸有限公司），722-光栅分光光度仪（上海精密科学仪器有限公司），hitao-hi 冷冻离心机（hitachi koki co led），fj-200高速分散匀质机（上海标本模型机厂），xw-80a型vortex（上海医科大学仪器厂）。
1.3主要试剂：sod、mda试剂盒，购自南京建成生物工程研究所
2 方法
2.1动物分组：动物常规饲养1周后，采用完全随机法分为4组，即正常组、假手术组、模型组、电针组。正常组，假手术组每组各12只，模型组、电针组每组各15只。
2.2模型制备：（1）线栓制备：取进口4-0 号单股尼龙线3.0cm,一端加热使之成为光滑的圆球形，圆球直径0.244-0.249mm，生理盐水冲洗，置于1%的肝素钠溶液，备用。（2）模型制备：参照zea-longa 的方法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型（mcao），在原方法的基础上有所改进。缺血1.5h后再次麻醉，拔出栓线，使缺血区血流再灌。(3)步骤：①麻醉：10%的水合氯醛（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉。②固定：仰卧手术台，充分暴露大鼠颈部皮肤。③手术：颈部正中切口，从两侧颌下腺之间剪开浅筋膜，游离甲状腺右叶，显露右侧胸锁乳突肌，钝性分离胸锁乳突肌与胸骨舌骨肌间的肌间隙，分离右侧颈总动脉（cca），颈外动脉（eca），颈内动脉（ica），用电凝器电凝eca的分支，游离eca主干一段，在eca深面穿二条细线，近心端打一活结，并推向eca根部，远心端结扎eca，沿ica向下分离翼额动脉（ppa）。用小动脉夹夹闭cca、ica，在eca游离主干段两线结之间用弧形剪剪断，滴0.03ml浓度为2.4×106u/l的肝素钠溶液，然后将制备好的栓线插入eca，经cca分叉处通过ica，入颅脑至大脑前动脉（aca），深度为18.5±0.5mm,再灌注时再次麻醉，拔出线栓即可。大脑中动脉栓塞后1.5h恢复血供，再灌注3h。
2.3处理及治疗方法：正常组、假手术组、模型组同样抓取，不进行治疗。电针组：选百会、内关、环跳、足三里，g-6805-h 电针仪，采用疏密波，频率为4-20hz，强度以引起穴位周围组织轻微颤抖为度，在示波器监视控制下的电流强度为3ma，每次治疗25分钟，栓线拔出后再灌注3h，开始第一次治疗，12h治疗1次，共治疗3次。
2.4取材与样品基础处理：治疗完成24h后，断头取脑，冰浴环境下将大脑从视交叉后1.5mm处切开，取缺血侧前半脑称重，放入10mm×150 mm的玻璃试管中，按重量/体积1：10的比例加入生理盐水，-20℃保存，标测时制成10%的脑匀浆。sod活力、mda分别采用黄嘌呤氧化酶发光法、硫代巴比妥酸（tba）法，采用721可见分光光度计测定，用考马斯亮蓝测定蛋白含量。
2.5统计学方法：应用spss 10.0软件对数据进行分析处理,计量数据以平均值±标准差表示。各组间差异采用单因素方差分析。
3 结果
电针对大鼠缺血的侧脑组织sod、mda活性的影响：表1示，各造模组大鼠血浆sod活性比正常组均有所降低，模型组与各组比较有显著性差异(p<0.05)；各造模组大鼠血浆mda的含量比正常组均有所升高，模型组与各组比较有显著性差异(p<0.01)；电针组与正常组比较有显著性差异(p<0.05)。
表1： 各组大鼠脑组织sod、mad的变化（x-±s）
注：与模型组比较﹡p<0.05，﹡﹡p<0.01；与正常组比﹟p<0.05
4 讨论
研究发现,脑缺血后可产生大量的自由基，引起脑组织的脂质过氧化，导致血脑屏障损害和神经元凋亡或死亡，自由基的损害作用已成为脑缺血的关键性病理环节之一。[3]国内外研究均认为，氧自由基损伤是脑缺血再灌注损伤的最重要而肯定的原因之一，许多文献曾报道，大鼠脑缺血再灌注过程中，脑组织的sod活力降低，而mad含量升高。本实验也证明了这一点，术后24h，脑组织内的sod活性明显下降，而mda水平明显升高，表明这些脑区的氧自由基生成增多，直接破坏了抗氧化酶，脂质过氧化程度加剧。给予电针治疗后，sod活性升高，mda水平降低，说明针灸可通过清除自由基，或减轻氧自由基对抗氧化酶的破坏作用，从而以达到保护缺血脑细胞的效果。
参 考 文 献
[1]张平，张本恕，苏立凯，等.粉防己碱对大鼠脑缺血再灌注后脑组织钙离子和氧自由基的作用[j].中国现代医学杂志，2009, 19 (14): 2098-2101.
[2]朱泽华,吕光荣,刘楚玉.电针对心肌缺血再灌注损伤家兔心功能的保护作用[j].云南中医学院学报,2002, 25(3): 1-4.
[3]杨牧祥,于文涛,徐华洲,等.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织sod mda的影响[j].中医药学刊, 2005, 23(8):1365-1367.
