作者：热娜古丽·艾则孜,沙吉旦·阿不都热衣,金伟,哈木拉提·吾甫尔

【摘要】  目的 观察不同体液证型患者血栓前状态分子标志物的变化,探讨各体液证型与血栓前状态的关系。方法 采用流式细胞术、放射免疫法和elisa等方法,检测复杂性疾病异常黑胆质证外周血中cd41、cd62p的表达及内皮素(et-1)、组织型纤溶酶原激活剂及抑制剂(t-pa、pai)、纤维蛋白原(fib)、活化部分凝血活酶时间(pt)、凝血酶时间(tt)、凝血酶原时间(aptt)水平,并进行分析。结果 复杂性疾病中异常黑胆质证占65.96%,非异常黑胆质证占34.04%。与正常对照组相比,异常黑胆质证组和非异常黑胆质(异常血液质、异常黏液质、异常胆液质)证组cd62p、fib、pai、et-1水平升高(p＜0.05),t-pa水平降低(p＜0.05),pt、aptt时间缩短(p＜0.05)。异常黑胆质证组与异常血液质证组和异常胆液质证组相比,et-1水平升高(p＜0.05)；与异常黏液质证组和异常胆液质证组相比,cd62p阳性百分数增多(p＜0.05)；与异常血液质证组和异常黏液质证组相比,fib含量升高(p＜0.05)。结论 异常黑胆质证可能是肿瘤、糖尿病、高血压和冠心病等复杂性疾病的维医重要证型。复杂性疾病异常黑胆质证患者血栓前状态改变明显。wWW.11665.Com

【关键词】  复杂性疾病；维吾尔医学；异常黑胆质证；血栓前状态

    abstract：objective to observe the pre-thrombosis markers in patients of different body fluids and discuss the relations between body fluids type and prethrombosis state. methods the expression of cd41, cd62p on platelets, the level of plasma tissue plasminogen activator (t-pa) and its inhibiter (pai-1), endothelin (et-1), activated partial thromboplastin time (aptt), fibrinogen (fib), prothrombin time (pt) and thrombin time (tt) were tested by using flow cytometer, elasa, radioimmunoassay method and auto coagulometer. results patients with abnormal savda syndrome occupy 65.96% and non abnormal savda syndrome occupy 34.04% in complex diseases. compared with normal control group, the average expression of cd62p, the level of plasma pai-1, et-1, fib both in abnormal savda syndrome and non abnormal savda syndrome groups were significantly increased (p＜0.05), the level of t-pa was decreased and aptt, pt were significantly shortened (p＜0.05). compared with abnormal han and abnormal sapra syndromes, the level of et-1 was significantly increased in abnormal savda syndrome (p＜0.05). compared with abnormal balham and abnormal sapra syndromes, the expression of cd62p was significantly increased in abnormal savda syndrome (p＜0.05). compared with abnormal han and abnormal balham syndromes, the level of fib was significantly increased in abnormal savda syndrome (p＜0.05). conclusion abnormal savda syndrome might be an important syndrome type in tumors, diabetes, hypertension and coronary heart diseases in uygur medicine. prethrombosis state is more obvious in abnormal savda syndrome than that of non abnormal savda syndrome.
   
　　key words：complex diseases；uygur medicine；abnormal savda syndrome；prethrombosis state

    维吾尔医学认为,异常黑胆质是肿瘤、糖尿病、高血压和冠心病等复杂性疾病发生发展过程中不同阶段病因病机的高度概括,是上述疾病共同的病理生理学基础[1]。大量的基础及临床研究工作表明, 肿瘤、糖尿病、高血压和冠心病等复杂性疾病拥有现代医学病理生理的共同机理,如均存在血栓前状态(pre-thromboticstate,pts)[2-5]。本研究对285例上述复杂性疾病患者进行维医异常体液分型,并对其血栓前状态分子标志物进行检测,探讨异常黑胆质与血栓前状态的关系。

　　1  资料与方法

　　1.1  研究对象

    新疆医科大学附属中医医院285例糖尿病、高血压、冠心病、肿瘤等复杂性疾病患者,其中男性138例,女性147例,年龄21～78岁,平均60.23岁。正常对照组为33例经体检无心、肺、肝、肾及血液等疾病的健康人,其中男性13例,女性20例,平均年龄59.24岁。异常体液的分型由副主任医师以上维医专家严格按照《维吾尔医诊断学》[6]进行。

　　1.2  试剂与仪器

    免疫荧光单克隆抗体cd41-pe、cd62p-fitc,美国immunotech公司提供；fib凝血酶、fib定值血浆、fib缓冲液,上海太阳生物技术有限公司提供；包被抗人t-pa抗体、包被抗人pai-1抗体、pai-1标准品、t-pa标准品、标本稀释液、酶标抗体工作液、底物opd片剂、20×浓缩洗涤液、底物稀释液、终止液,均由上海西唐生物技术有限公司提供；et标准品(s1-s5)、125i-et(红色)、兔抗-et抗血清(蓝色)、驴抗兔免疫分离剂、et缓冲液、edta抗凝剂,由北京北方生物技术研究所提供。
   
　　epicsxl型流式细胞仪,美国beckmon coulter公司；amax-200型全自动血凝分析仪,德国amelung公司；sunrise remote酶标仪,丹麦sunrise公司；sunrise remote洗板机,丹麦sunrise公司；dnp-9162电热恒温培养箱,上海精密实验设备有限公司；wzq-1型微量震荡器,沈阳市温控开关厂；gc-2016γ放射免疫计数器,科大创新股份有限公司中佳分公司；kdc-2046低速冷冻离心机,科大创新股份有限公司中佳分公司。

　　1.3  观察指标及方法

　　1.3.1  cd41、cd62p的检测 

　　清晨采肘静脉血,全血由edta抗凝。各管加稀释液70 μl,全血5 μl,分别加入荧光染料cd41-pe 5 μl、cd62p-fitc 8 μl进行染色,轻揉混匀,避光孵育30 min,用pbs调整血小板浓度为1×106/ml,待测。选择氩离子激光激发,激发浓度为488 nm,测定中以前向角散射(fsc)对侧向散射(ssc)设门,调整电压,圈出血小板群,获取20 000个血小板黄光信号(fitc、pe),用pmt2、pmt3收集,转化成log信号直方图,以expo软件进行处理,得出阳性血小板百分数。

　　1.3.2  凝血四项指标的检测 

　　包括活化部分凝血活酶时间(pt)、纤维蛋白原(fib)、凝血酶时间(tt)及血浆凝血酶原时间(aptt)。取清晨空腹静脉血2 ml,置于枸橼酸钠抗凝真空管,3 000 r/min离心15 min,然后由amax-200型全自动血凝分析仪检测,并使用配套试剂,采用clauss比浊法。

　　1.3.3  组织型纤溶酶原激活剂、抑制剂的检测 

　　血液离心后取血浆；将待测血浆分别加入包被抗人组织型纤溶酶原激活剂(t-pa)抗体及其抑制剂(pai)抗体的反应条内,充分混允, 37 ℃孵育150 min；洗板机洗涤；显色：每孔加邻苯二胺(opd)底物稀释液100 μl,37 ℃孵育15～20 min；终止：每孔加终止液50 μl；比色：在酶标仪上492 nm处测定各孔od值。

　　1.3.4  内皮素的检测 

　　取圆底聚苯乙烯试管若干,用微量加样器加待测样品、125i-et(红色)、兔抗-et抗血清(蓝色)各100 μl,摇匀,4～8 ℃温育18～24 h。驴抗兔免疫分离剂500 μl,充分摇匀,室温放置15 min,3 500 r/min离心15 min,吸弃上清,测各沉淀管的放射性计数(cpm)。数据处理采用logit-log处理软件。
　　
　　1.4  统计学方法

    应用spss13.0软件,数据以x±s表示,采用完全随机设计2组样本的t检验及多组样本的方差分析。取检验水准α＝0.05。

　　2  结果

　　2.1  血栓前状态分子标志物在各型体液患者中的变化

　　(见表1)表1  血栓前状态分子标志物各异常体液患者检测结果(略)注：与正常对照组比较,*p＜0.05；与异常黑胆质证组比较,▲p＜0.05
 
　　与正常对照组相比,异常黑胆质证组和非异常黑胆质(异常血液质、异常黏液质、异常胆液质)证组cd62p、fib、pai、et-1水平升高(p＜0.05),t-pa水平降低(p＜0.05),pt、aptt时间缩短(p＜0.05),各组cd41、tt间比较无统计学意义(p＞0.05)。异常黑胆质证组与异常血液质证组和异常胆液质证组相比,et-1水平升高(p＜0.05)；与异常黏液质证组和异常胆液质证组相比,cd62p阳性百分数增多(p＜0.05)；与异常血液质证组和异常黏液质证组相比,fib含量升高(p＜0.05)；而cd41阳性百分数、t-pa及pai-1含量、pt、tt和aptt在各异常体液组之间差异无统计学意义(p＞0.05)。

　　2.2  复杂性疾病的维医异常体液分型

　　(见表2)表2  285例复杂性疾病患者的维医异常体液分型[例(略)]

    由表2可知,异常黑胆质证所占比例远大于非异常黑胆质证(异常血液质、异常黏液质、异常胆液质)；异常黑胆质证在临床复杂性疾病中较为常见,是其重要证型。

　　3  讨论

    维吾尔医学体液论认为,人体由胆液质、血液质、黏液质和黑胆质四种体液质组成。人体体液质的平衡是机体保持正常生理功能的基础。在正常生理状态下体液质处于一种动态平衡状态,人体的各种脏器、组织和细胞均发挥自己的正常生理功能,从而使机体保持内稳态。当机体遇到体内外几种或多种不良因素(如饮食、环境、精神因素等)的影响或长时间处于不良环境时,体液在质和量上发生变化,超越人体自行调节功能,导致体液平衡紊乱,产生异常胆液质、异常血液质、异常黏液质和异常黑胆质等异常体液。各异常体液长期积聚,所致疾病长期不愈,在机体“热”的作用下,体液质“燃烧”继而“沉淀”,形成最终病理产物或表现形式异常黑胆质体液。维吾尔医学临床中以望、闻、问、切等进行辨证,按症候群将患者分为异常黑胆质证、异常血液质证、异常胆液质证和异常黏液质证,不同的证具有不同的临床表现和特有的病理生理特点。

    本研究对285例现代医学的糖尿病、高血压、冠心病、肿瘤等复杂性疾病患者行维医辨证分型发现,异常黑胆质证患者占188例,其构成比为65.96%,是其他3种证型患者总和的2倍,体现了复杂性疾病中由异常黑胆质导致的病例最多、引起的病变最为复杂、顽固难治。在复杂性疾病中,糖尿病异常黑胆质证占65.59%,非异常黑胆质证占34.41%；肿瘤异常黑胆质证占69.57%,非异常黑胆质证占30.43%；冠心病异常黑胆质证占64.15%,非异常黑胆质证占35.85%；高血压病异常黑胆质证占64.29%,非异常黑胆质证占35.71%。提示异常黑胆质证在临床复杂性疾病中较为常见,是其重要证型,具有普遍存在性。根据维吾尔医体液论,异常黑胆质体液极易附着在血管壁上,使血管变硬变窄,通透性变差；焦灼黑液质的浓度较高时,容易引发黑胆质性凝结,而且具有强刺激和破坏作用,从而导致冠心病、高血压、肿瘤、糖尿病等复杂性疾病[7]。

    复杂性疾病异常黑胆质证组较对照组cd62p阳性百分数明显增高(p＜0.01),提示异常黑胆质证患者血小板活化性增强。血小板活化是异常黑胆质证产生的重要病理基础之一。异常黑胆质证组存在pt、fib、aptt的异常改变,pt、aptt较对照组都明显缩短(p＜0.05),而纤维蛋白原有不同程度的升高(p＜0.01),提示异常黑胆质证组患者体内存在血液凝固性增强倾向。异常黑胆质证组pai-1水平明显高于正常对照组(p＜0.01),而t-pa水平明显低于正常对照组(p＜0.01),说明其pai-1和t-pa的正常平衡状态被打破,提示异常黑胆质证组患者纤溶功能减退。我们认为,复杂性疾病异常黑胆质证患者血栓前状态改变明显,尤其是cd62p、t-pa、pai-1、pt、fib、aptt改变为主,由此建议将血栓前状态改变的相关指标纳入到量化判断复杂性疾病异常黑胆质证之中。

　　复杂性疾病异常黑胆质证组与异常血液质证组和异常胆液质证组相比,et-1水平升高(p＜0.05)；与异常黏液质证组和异常胆液质证组相比,cd62p阳性百分数增多(p＜0.05)；与异常血液质证组和异常黏液质证组相比,fib含量升高(p＜0.05)。提示复杂性疾病非异常黑胆质证患者同样存在血栓前状态,但程度较异常黑胆质证型患者为弱,从微观辨证方面分析,复杂性疾病非异常黑胆质证患者虽然没有异常黑胆质证的宏观表现,但微观指标的异常提示肿瘤、糖尿病、高血压和冠心病等复杂性疾病患者处于异常黑胆质证的“前状态”,伴随着疾病的发展,复杂性疾病非异常黑胆质证患者即可能出现异常黑胆质证的宏观临床表现。

【参考文献】
  　　[1] 斯依提·穆哈穆德·候赛音.麦合孜尼艾地维亚(草药宝库)(波斯文)[m].印度：吉维力可西瓦出版社,1988.251－292.

　　[2] falanga a, tickles fr. pathophysiology of the thrombophilic state in the cancer patient[j]. semin thromb hemost,2002,25(2)：173－182.

　　[3] dunn ej, grant pj. type 2 diabes：an atherothrombotic syndrome[j]. curr mol med,2005,5：323－332.

　　[4] lip gy, edmunds e, beevers dg. should patients with hyper- tension receive antithrombotic therapy[j]. intern med,2001,240：205－206.

　　[5] icholls sc, hoffer ek, chandler wl. failure of peripheral arterial thrombolysis due to elevated plasminogen activator inhibitor type1[j]. blood coagul fibrinolysis,2003,14(8)：729－733.

　　[6] 买买提明·沙比尔.维吾尔医学诊断学[m].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,1993.135.

　　[7] 哈木拉提·吾甫尔.维吾尔医气质、体液论及其现代研究[m].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,2003.44－52.