hlaⅰ、cd68和cd3抗原在胃癌及周围淋巴结的表达及意义
【关键词】 胃癌hlaⅰ;cd68;cd3;免疫组化
【摘要】 目的 探讨hlaⅰ、cd68和cd3抗原在胃癌及周围淋巴结的表达。方法 胃癌组织30例，胃重度不典型增生组织30例做对照。周围淋巴结共40个。用抗hlaⅰ、cd68和cd3的单克隆抗体采用sp法做免疫组化分析。结果 阳性组织中细胞膜和细胞浆着色。hlaⅰ抗原阳性表达率胃癌组织为16.67%，胃不典型增生组织为40%，二者差异有统计学意义(p＜0.05)；cd68阳性表达率为36.67%，胃不典型增生组织为26.67%，二者差异无统计学意义(p＞0.05)；cd3阳性表达率为20%,胃不典型增生组织为36.67%，二者差异无统计学意义(p＞0.05)。淋巴结cd68阳性表达率为20%，cd3阳性表达率为35%。hlaⅰ和cd68、cd3三者表达呈直线相关关系。 结论 胃癌hlaⅰ表达下降，hlaⅰ和cd68、cd3浸润有相关关系。
【关键词】 胃癌hlaⅰ;cd68;cd3;免疫组化
the expression and significance of hlaⅰ cd68 and cd3in gastric carcinoma and lymph node
zhang guojian,wu aixu,yan qinghui, et al.
department of surgery,the second hospital of hebei medical university,shijiazhuang 050000,china
【abstract】 objective to investigate the protein expression of hlaⅰ, cd68 and cd3in gastric carcinoma and lymph node. methods 30 cases of gastric carcinoma tissue,30 cases of gastric severe dysplasia and 40 lymph nodes were enrolled in the study. the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3 was detected by immunohistochmical staining method.results the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3on cell membrane and cytoplasmic expression in positive tissues were found. the positive expression of hlaⅰ was observed in 16.67% gastric carcinoma cases and 40% gastric severe dysplasia, and there was a significant difference between the two kinds of tissues(p<0.05). the positive expressions of cd68were observed in 36.67% gastric carcinoma cases and 26.67% gastric severe dysplasia, and there was no significant difference between the two kinds of tissues(p>0.05). the positive expressions of cd3 were observed in 20% gastric carcinoma cases and 36.67% gastric severe dysplasia, and there was no significant difference between the two kinds of tissues(p>0.05).the expressions of cd68and cd3were found in 20% and 35% lymph node. the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3 had linear correlation with each other. conclusion the expression of hlaⅰon gastric carcinoma decreases. the expression of hlaⅰ, cd68and cd3has a linear correlation with each other in gastric carcinoma.
【key words】 gastric caicinoma;hlaⅰ; cd68;cd3; immunohistochemistry
肿瘤宿主免疫功能异常可能导致细胞恶变后继续生长发展成肿瘤和转移的原因之一［1］。WWW.11665.COm研究表明，癌细胞可以通过多种机制使宿主免疫功能异常，其中包括细胞表面hlaⅰ的表达缺乏。因此笔者探讨胃癌组织及周围淋巴结中hlaⅰ和cd68、cd3抗原的表达，以期望对影响肿瘤预后的因素及机体的免疫功能进行评价。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择河北医科大学第二医院外科2005年10月至2006年10月30例胃癌标本和30例胃重度部典型增生标本。所有标本均经10%甲酫固定，石蜡包埋。30例胃癌患者男12例，女18例;年龄41～72岁，平均53.5岁。30例重度不典型增生患者男11例，女19例；年龄35～75岁，平均年龄56.8岁。2组在年龄和性别比上差异无统计学意义（p>0.05）。
1.2 试剂与方法
hlaⅰ单克隆抗体w6/32购自美国sigma 公司。cd68和cd3抗体及免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡标本常规脱蜡至水化。采用免疫组化sp法染色，染色程序严格按照试剂盒说明。pbs代替一抗做空白对照。
1.3 结果判断标准
细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。光镜下按着色范围结合着色强弱进行分级。着色范围以阳性细胞数百分率判定：未着色为0分；着色25%以下为1分；着色25%～50%为2分；着色50%以上为3分。着色强度判定：无着色为0分；浅着色为1分；棕色为2分；深棕色为3分。上述两项相加为分级标准。阴性：＜3分；阳性：≥3分。
1.4 统计学分析
应用spss 11.0统计软件，计数资料采用χ2检验，相关性采用相关分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 hlaⅰ和cd68、cd3在大肠癌的表达及相关分析结果
hlaⅰ抗原阳性表达于细胞膜和细胞浆，hlaⅰ抗原阳性表达率胃癌组织为16.67%，胃不典型增生组织为40%，二者差异有统计学意义（p＜0.05）； cd68阳性表达于细胞浆，cd68阳性表达率胃癌组织为36.67%，胃不典型增生组织为26.67%，二者差异无统计学意义（p＞0.05）。cd3阳性表达于细胞浆，cd3阳性表达率胃癌组织为20%；胃不典型增生组织为36.67%，二者差异无统计学意义（p＞0.05）。hlaⅰ和cd68阳性表达呈直线负相关（r=-0.627，p＜0.05）。hlaⅰ和cd3阳性表达呈直线正相关（r=0.904，p＜0.05）。
2.2 cd68和cd3在淋巴结的表达及相关性分析结果
cd68阳性表达于细胞浆，40个淋巴结中阳性表达率为20%；cd3阳性表达于细胞浆，阳性表达率为35%；cd68和cd3阳性表达呈直线负相关（r=-0.694，p＜0.05）。
3 讨论
机体的免疫功能状态是影响肿瘤发生的一个重要因素，恶变细胞可通过多种机制逃避机体的免疫监视，使机体的免疫系统出现障碍而无法对肿瘤细胞进行识别和杀伤。hlaⅰ分子表达下调是一个普遍的肿瘤生物学现象［2］。我们之前研究发现大肠癌组织与正常组织比较，hlaⅰ表达明显下降，不同组织学分级中hlaⅰ蛋白的表达有明显统计学意义，组织学分化越差，hlaⅰ表达越低［3］。笔者研究结果表明，与重度不典型增生比较，胃癌组织hlaⅰ蛋白表达明显下降。hlaⅰ抗原在t细胞清除转化中起重要作用，胃癌组织hlaⅰ表达下降可能与肿瘤免疫逃逸有关。
肿瘤相关的巨噬细胞是指移行到肿瘤间质的巨噬细胞，其表面标记为cd68，是机体抗肿瘤免疫中重要的效应细胞，它在肿瘤免疫中的作用日益受到人们的重视。王光芬等［4］研究发现胃癌中肿瘤相关巨噬细胞计数明显高于胃炎组织，并且有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。笔者研究结果表明胃癌组织中cd68细胞广泛存在与肿瘤间质中，与重度不典型增生比较，cd68阳性细胞表达明显增多，cd68阳性细胞在肿瘤微环境中具有促进肿瘤血管生成作用，影响肿瘤的生物学行为导致肿瘤转移［5］。同时结果表明胃癌组织中hlaⅰ的表达与cd68的浸润呈明显负相关，说明hlaⅰ表达越低，肿瘤间质中的巨噬细胞越多，肿瘤转移性就越强，这可能胃癌组织易发生转移的原因之一。
齐朝阳等［6］研究发现胃癌间质中有不同程度淋巴细胞浸润，淋巴细胞浸润明显组与少量浸润组比较，胃癌伴淋巴结转移率低。肿瘤中浸润的淋巴细胞其表面标记为cd3。t细胞在免疫识别和清除肿瘤细胞方面具有重要作用。笔者研究结果表明与重度不典型增生比较，胃癌组织中cd3阳性细胞表达降低；胃癌组织中hlaⅰ的表达与cd3的浸润呈明显正相关，说明hlaⅰ表达越低，t细胞的免疫活性就越下降，机体免疫细胞对肿瘤细胞免疫识别能力降低。
巨噬细胞的浸润和t细胞的免疫活性密切相关。笔者研究结果表明与重度不典型增生比较，胃癌组织中cd68阳性细胞增加，cd3阳性细胞减少，不论胃癌组织还是周围淋巴结中cd68阳性细胞和cd3阳性细胞的浸润呈负相关。说明胃癌组织巨噬细胞浸润增加而t细胞免疫活性下降，这可能导致t细胞不能识别并对肿瘤细胞发起攻击，是胃癌发生免疫逃逸，从而转移和复发的机制之一。
综上结果,提示胃癌细胞是通过多种途径逃脱机体的免疫抑制，这些生物学特性可能影响胃癌转移和预后，是临床诊疗中需要引起注意的。
【参考文献】
1 hosch sb, meyer aj, schneider c, et al. expression and prognostic significance of hla class ⅰ，icam, and tumor infiltrating lymphocytes in esophageal cancer. j gastrointest surg, 1997, 1:316323.
2 hirata s, yamazaki k, kubo y, et al. dna content analysis and expression of human leucocyte antigen on esophageal cancer. rinsho byori，1995，43：227232.
3 张国建，闫庆辉，王凤安，等. 大肠癌组织hlaⅰ基因蛋白的表达及意义.河北医药,2006，28：78.
4 王光芬，郑海燕，辛琪，等.胃癌中upa、肿瘤浸润性巨噬细胞的表达及其与血管生成的关系.安徽医药,2008，11：3133.
5 白晓燕，夏养志. 胃癌巨细胞浸润和微血管密度与侵袭转移的关系. 中国体视学与图像分析，2003,8:201204.
6 齐朝阳，邱月燕，郑则钦，等.进展期胃癌的间质反应特点及其意义.河北医药，2001，23：68.
