西安地区hpv感染的基因型分布特点与宫颈病变的关系分析

【关键词】  宫颈癌;人乳头瘤病毒;亚型

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【摘要】  目的 分析西安地区宫颈组织中hpv的流行状况和感染亚型分布，分析其与宫颈病变的关系，以期为西安地区宫颈癌致癌机制及hpv疫苗研制起到推动作用。方法 收集2007年10月-2009年9月间在本院进行宫颈液基细胞学检测和组织病理学检查的150例标本(包括炎症50例，cinⅰ39例，cinⅱ35例，cinⅲ 20例，宫颈鳞癌6例)，进行hpv分型分析。结果 共检测出16种hpv亚型，其中包括 11 种高危型 hpv(16，18，31，33，35，39，52，58，59，66，68型)， 3 种低危型(6、11和42型)以及2种中国人常见亚型(53型和66型)。高危型中hpv-16 型是最常见的，累计检出35例(其中单一感染17例，混合感染18例)，占感染病例的37.6%(35/93);其次是hpv- 39型，累计检出18例(其中单一感染11例，混合感染7例)，占感染病例的19.4%(18/93)，而且6例宫颈癌中有2例都有hpv-39感染;hpv-58型居第三位，累计检出8例(其中单一感染4例，混合感染4例)，占感染病例的8.6%(8/93);而在其他国家和地区中常见的hpv-18型仅在1例混合感染中存在。WWW.11665.CoM低危型hpv感染率最高的亚型分别是hpv-6和hpv- 11型。不同类型的宫颈组织中hpv感染亚型并未见明显差异。结论 西安地区hpv流行亚型明显不同于其他地区，通常认为流行于非洲的hpv-39在西安占到第二位。不同病理类型的宫颈组织中，高危型hpv的分布无明显差别。明确一个地区宫颈hpv流行亚型分布，可为区域特异性hpv疫苗的研制提供依据。

【关键词】  宫颈癌;人乳头瘤病毒;亚型

　　distribution characteristic of hpv genotype from xi'an area and its relationship to cervix lesions

　　zhang jian-fang,chen bi-liang,song hui,et al.department of gynaecology and obstetrics,xijing hospital,fourth military medical unversity, xi'an 710000,china

　　[abstract] objective to analyze the prevailing status,genotype distribution of hpv infection and its relationship to cervix lesions,which will produce an active effect on the mechanism and hpv vaccine research of uterine cervix cancer.methods 150 cytology specimen of uterine cervix were collected for hpv typing.among the 150 cases,50 cases were inflammation,39 were cinⅰ,35 were cinⅱ,20 were cin ⅲ and 6 were squamous carcinoma of the cervix.results 16 hpv subtype were detected,including 11 hish risk type(16，18，31，33，35，39，52，58，59，66，68)，3 low risk type(6,11 and 42) and 2 chinese common type(53 and 66).hpv-16 was the most frequent high risk subtype,total 35 cases were detected hpv-16 infection(17 were single infection and 18 were mixed infection),which account 37.6% for infected cases;the next is hpv-39, total 35 cases were detected hpv-16 infection(11 were single infection and 7 were mixed infection),which account 19.4% for infected cases, moreover,2 of 6 squamous carcinoma of the cervix were hpv-39 infection. the third was hpv-58，total 8 cases were detected hpv-58 infection(4 were single infection and 4 were mixed infection),which account 8.6% for infected cases;but the hpv-18,which is common at other country or region,was only detected in one mixed infection.infection rates of hpv-6 and hpv-11 were the most frequent two low risk types.there was no obviously different hpv types among different cytology specimen of uterine cervix.conclusion hpv subtype distribution is obviouely different to other area.hpv-39,which is considered prevailing in afric,is the second common subtype in xi'an. different cytology specimen of uterine cervix weren't found different high risk hpv subtypes distribution. identifying the hpv prevailing ststus can provide clinical basis for regiospecificity hpv vaccine research.

　　[key words] uterine cervix cancer;human papilloma virus;subtype

　　宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率居全球恶性肿瘤第二位，仅次于乳腺癌。相对于其他肿瘤，宫颈癌是病因相对明确的少数恶性肿瘤之一。高危型人乳头瘤病毒的持续感染是宫颈癌发生的必要条件。至今已经分离鉴定出超过200种hpv病毒的亚型，其中有20多种可感染生殖道上皮。文献报道hpv-16型和18型是最常见的，其与70%的浸润性宫颈癌有关。目前hpv疫苗研究多是针对hpv-16和18型，对其他型别的感染并不具有保护性。而不同国家和地区hpv的流行亚型存在地域性差异。本研究分析了西安地区宫颈组织中hpv的流行状况和感染亚型分布，分析其与宫颈病变的关系，以其为西安乃至西部地区宫颈癌致癌机制及hpv疫苗研制起到推动作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象 收集2007年10月-2009年9月间在本院进行宫颈液基细胞学检测和组织病理学检查的病例，共150例。年龄18～62岁，中位年龄34岁。所有病例都来自西安或其周边地区。按照2003年who《女性生殖器官和乳腺肿瘤的病理学和遗传学》诊断标准，炎症50例，cinⅰ39例，cinⅱ35例，cinⅲ 20例，宫颈鳞癌6例。宫颈液基细胞学诊断采用tbs(the bethesda system)报告系统。细胞学诊断分为wnl 20例，ascus 70例，lsil 34例，hsil 22例，宫颈鳞癌4例。

　　1.2 主要试剂和仪器 超薄tm液基细胞学制片系统;hpv核酸扩增分型检测系统,包括dna提取试剂盒、pcr扩增试剂盒及杂交试剂盒和医用核酸分子快速杂交仪由凯普生物科技有限公司生产;abi2720普通扩增仪由美国abi公司生产。

　　1.3 方法

　　1.3.1 标本取样步骤和要求 取宫颈脱落细胞标本，先用棉拭子将阴道或宫颈口过多的分泌物轻轻擦拭干净，再用宫颈刷紧贴宫颈口稍用力顺时针旋转5圈，然后放入有专用细胞保存液的试管中;对于组织标本，采用无菌手术剪取，同样装入专用保存液;以上标本均于4℃保存，1周内测定。

　　1.3.2 hpv的分型检测 严格按照凯普hpv分型检测试剂盒要求进行操作，在凯普医用核酸分子快速杂交仪中完成低密度基因芯片膜杂交。共能检测以下21型，包括13种高危亚型：hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68;5种低危亚型：hpv6、11、42、43、44;3种中国人群常见亚型：hpv53、66、cp8304。

　　1.4 统计学处理 所有数据录入计算机，采用spss12 0统计软件，进行列联表(r×c)资料分析及多元logitic回归分析。

　　2 结果

　　2.1 组织病理学诊断结果与液基细胞学诊断结果比较 见表1。表1 组织病理学诊断结果与液基细胞学注：wnl(正常范围);ascus(意义不明的不典型鳞状上皮细胞);lsil(低度鳞状上皮细胞病变);hsil(高度鳞状上皮细胞病变);scc (鳞状细胞癌)

　　2.2 hpv感染的基因型构成 150例患者标本的基因分型结果，见表2。共检测出16种hpv亚型，其中包括 11 种高危型 hpv(16、18、31、33、35、39、52、58、59、66、68)， 3 种低危型(6型、11型和42型)以及2种中国人常见亚型(53型和66型)。hpv- 16型累计检出35例(其中单一感染17例，混合感染18例)，占感染病例的37.6%(35/93);hpv- 6型累计检出24例(其中单一感染15例，混合感染9例)，占感染病例的25.8%(24/93);hpv- 39型累计检出18例(其中单一感染11例，混合感染7例)，占感染病例的19.4%(18/93);hpv- 58型累计检出8例(其中单一感染4例，混合感染4例)，占感染病例的8.6%(8/93)。高危型中hpv- 16 型是最常见的，其次是hpv- 39型，hpv-58型居第三位，而hpv-18型仅在1例混合感染中存在。低危型hpv感染率最高的亚型分别是hpv-6和hpv- 11型。表2 hpv感染的基因型构成 (n=93)

　　2.3 不同类型宫颈组织的 hpv 感染率 150 例宫颈标本中， 共检测到 93 例 hpv 感染， 阳性率62.0%。6 例宫颈鳞癌全部有高危型hpv 感染， 所感染的基因型包括hpv-16、39、58及混合感染。高级别病变(cinⅱ-cinⅲ)中未见低危型hpv单纯感染。不同组织病理学类型的宫颈组织中hpv型别未见明显差异。感染率见表3。表3 不同类型宫颈组织hpv感染率hpv阳性例数 hpv阴性例数 阳性率(%)

　　3 讨论

　　高危型hpv持续感染是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件，据munoz[1]等和einstein[2]等报道，hpv基因型分布有地区差异，与宫颈癌相关的型别也不尽相同。在国际癌症研究协会(iarc)的最新研究中，15种最常见的亚型分别为 (按递减顺序排列)16、18、45、31、33、52、58、35、59、56、39、 51、73 、68和66。除16亚型外，18亚型感染比例最高;居第3位的在非洲、南亚、欧洲、北美是45亚型，而在美国中南部则为31亚型;居第4位的在非洲北部是33和31，非洲南部则是33/58和56，美国中南部是45和33，南亚是52和58，欧洲和北美是31和56/68 亚型。日本52型居第2位，韩国33和58型分别居第2、3 位。

　　目前国内hpv感染的流行病学研究较少，而宫颈癌 hpv感染型别有着很大的区域性，中国地域宽广，人口众多，hpv 基因型分布复杂。深圳地区主要流行的hpv亚型为hpv-16(44.3%)、hpv-58(16.4%)及hpv-52(13.4%)[3]。hpv-16、58、18、31亚型是湘南地区浸润性宫颈癌最常见的感染类型[4]。延边地区宫颈病变组织中hpv感染类型主要有hpv-16、18、33、45、52型等[5]。

　　本文的资料则表明，在西安地区高危型hpv感染中，hpv-16型也是最常见的，但第2位却与其他地区不同，为hpv-39型，hpv-58型居第3位，而hpv-18型仅在1例混合感染中存在。这更进一步说明hpv分布的地域差异。

　　目前hpv疫苗用于预防和治疗hpv感染已成为研究的热点。现已上市的hpv预防疫苗具有“型特异性”，仅对预防hpv-16和18型2种高危型的hpv感染有效。而不同hpv亚型对不同种族人群致癌性的强弱也明显不同[6,7]。明确一个地区 hpv流行的主要型别，对于评估患者预后，指导临床制定合理的治疗方案有重要意义;与此同时，还可以为科研人员研制有针对性的基因疫苗提供可靠依据。

　　高危型hpv基因型的持续感染是宫颈癌形成的先决条件，但是，目前hpv持续感染的标准还很模糊。从时间上来说不同学者的研究有不同的时间定义，从3个月到2年不等。从感染的hpv基因型上来说，有学者认为不同时间相同hpv基因亚型的感染才可以定义为持续感染。另一种观点则认为不同时间即使不同的高危型hpv基因亚型的感染也应当看作持续感染。由于90%hpv感染都可以在6个月内被自身免疫机制所清除，检测患者感染的hpv基因亚型可以监测患者携带病毒的时间和患者机体清除病毒情况，对病毒持续感染有一定的提示价值。

【参考文献】
  　1 munoz n, bosch fx, sanjose s, et al. epidemiologic classification of human papilomavirus types associated with cervical. cancer. n engl j med, 2003, 348(6): 518- 527.

　　2 einstein mh, goldberg gl. human papillonmvirus and cervical neoplasia. cancer invest, 2002, 20(7- 8): 1080- 1085.

　　3 韩定英，吴洁，姜碧卿，等.深圳市罗湖区1420例妇女生殖道人乳头瘤病毒筛查结果分析. 中国初级卫生保健,2008,22(2):42-43.

　　4 陈建辉，陈忠东.湘南地区浸润性宫颈癌 hpv基因分型的研究. 中国现代医学杂志,2009,12(12):1852-1854.

　　5 姜宏宇，张美花，韩艳，等. 韩国与中国延边地区宫颈病变组织中人乳头瘤病毒感染类型比较.吉林大学学报，2009，35(4)：746-750.

　　6 崔英,胥爱辉,蔡永娥,等.人乳头瘤病毒致宫颈癌的分子机制研究.现代肿瘤医学,2008,16(1):143-145.

　　7 shi jf,qiao yl,smith js,et al.epidemiology and prevention of human papilloma virus and vervical cancer in china and mongolia. vaccine.2008,26s(12):m53-m59.