摘 要：对采集于天津市宁河县七里海地区芦苇地的野生蘑菇苇蘑进行了形态学和rdna its区段克隆测序及序列特征比较分析鉴定。 结果表明，采集的这种野生蘑菇为蜡伞科（hygrophoropsidaceae）、拟蜡伞属（hygrophoropsis）蘑菇。
关键词：苇蘑；蜡伞科；拟蜡伞属
中图分类号：s646.9 文献标识码：a doi编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.014
天津市宁河县七里海地区芦苇地产苇蘑。每当盛夏溽暑绵雨过后，芦林苇海中多年败叶腐草厚积，形成难得的底质、湿度、温度和光照，苇蘑便蒸郁而生。人们采集后，或鲜食，或晒干食用，味道极其鲜美，远胜于其他蘑菇。在文献调研中，笔者发现国内外关于苇蘑的报道廖廖无几，而且天津七里海苇蘑与一些报道注明的种属形态不是很一致[1-2]。鉴于此，从其形态特征和dna测序的角度对其进行了鉴定。确定其为蜡伞科（hygrophoropsidaceae）、拟蜡伞属（hygrophoropsis）蘑菇。
1 材料和方法
1.1 材 料
2012年7月22日采集子实体于天津市宁河县七里海淮淀芦苇地。选取形态完整、新鲜、菌肉肥厚、七八成熟、未被昆虫啃食的子实体，用铲连同基物一齐采下，详细记录子实体形态特征。挂上号牌，用吸水软纸折成漏斗状，菌柄向下包好，放入标本盒内，送往中国科学院微生物研究所进行科属鉴定。实物标本保存在天津农学院菌物标本室和中国科学院微生物研究所菌物标本馆。Www.11665.Com
1.2 方 法
1.2.1 形态特征描述 按常规方法观察子实体的形态结构， 并测量菌盖直径以及菌柄长度、直径等；菌褶徒手切片，在显微镜下观察孢子的形态、色泽和大小。
1.2.2 基因组dna提取 取测试菌株，外部清洁后，掰开子实体，取里面未受污染的部分，液氮研磨处理后分装，-80 ℃超低温冰箱保存备用[3-4]。取0.2 g左右研磨好的样品，按参考文献[3， 5-6]采用ki法对基因组dna进行提取。然后将提取的dna保存于-20 ℃备用。
1.2.3 rdna its序列的扩增、克隆、测序及序列比较 采用通用引物lr0r和lr5扩增核糖体大亚基（nrdna-lsu）d1～d2区段，测序、blast比较[7-9]。
lr0r： 5’- acccgctgaacttaagc -3’
lr5： 5’- tcctgagggaaacttcg -3’
序列测定由北京诺赛基因组研究中心有限公司完成。
2 结果与分析
2.1 形态特征
子实体中等大，菌盖直径3.0～9.5 cm，幼时稍扁平，成熟后呈下凹状，表面柠檬黄色，中部色稍深，边缘内卷，光滑。菌肉黄色。菌褶黄色，稍稀，延生（图1）。菌柄长2.5～6.0 cm，粗0.5～1.4 cm，圆柱形，向下稍粗，污黄色，内实。孢子无色，光滑，椭圆形，2.6～4.3 μm×5.1～7.7 μm。夏季群生或单生于芦苇丛中地上。
2.2 rdna its序列测序结果
包括核糖体大亚基d1～d2区的大部分序列。从核糖体大亚基d1～d2区序列比较分析，其序列与属于黄拟蜡伞（hygrophoropsis aurantiaca） 的28srdna（ncbi号码ay586659.1）序列相似率为93%。
3 结论与讨论
最早关于苇蘑的报道是新疆王秀云等[1]描述发现的苇蘑孢子为印褐色。2005年吕绍生[2]报道苇蘑这一蘑菇名称，拉丁文为 agaricus campestris。agaricus campestris为伞菌属蘑菇[10-11]，孢子褐色， 光滑， 椭圆形[11]。笔者采集的苇蘑经显微鉴别，发现孢子为无色，光滑，椭圆形。拟蜡伞属黄拟蜡伞蘑菇子实体小型至中型。菌盖初期边缘内卷， 中央部位凹陷， 后期稍平展。表面平滑，橙黄色， 干后橙红色，边缘往往浅色。菌肉薄， 白色或黄白色， 有香味。菌褶橘黄色， 延生， 密， 窄， 有横脉。菌柄淡褐色，基部有短绒毛，孢子无色，光滑，椭圆形，孢子印奶油色，未见囊状体。菌丝具有锁状联合[12-13]。结合标本形态特征发现其也具有上述类似特征。
从核糖体大亚基d1～d2区序列比较分析，并结合标本形态特征，鉴定其为拟蜡伞科（hygrophoropsidaceae）、拟蜡伞属（hygrophoropsis）蘑菇。
致谢：苇蘑鉴定由中国科学院微生物研究所文华安研究员协助完成，特此表示感谢。
参考文献：
[1] 王秀云， 孔爱琴. 博斯腾湖野生苇蘑调查[j]. 干旱区研究， 1987（4）： 62-63.
[2] 吕绍生. 天津七里海生物集[m]. 北京：中国林业出版社，2005：5-6.
[3] 杨振华， 张靠稳， 马爱瑛. 贺兰山紫蘑菇基因组dna提取方法
研究[j]. 安徽农业科学，2010，38（20）：10557-10559.
[4] 张靠稳， 杨振华， 刘建利， 等. 四种贺兰山紫蘑菇rdna its序列分析[j]. 生物技术通报， 2011（12）： 88-91.
[5] 黄龙花， 杨小兵， 张智， 等. 基于its 序列分析鉴定灵芝属菌种[j]. 中国食用菌， 2010， 29（1）： 55-57.
[6] 尹永刚， 刘宇， 许峰， 等. 一株agaricus 属野生菌的分离与鉴定[j]. 华北农学报， 2012， 27 （3）： 126 -129.
[7] 李河，周国英，刘君昂.红汁乳菇、丰血红乳菇及橙色乳菇的rdna its序列分析[j].河南农业科学，2007（11）：88-91.
[8] 王守现，刘宇，耿小丽，等.北京地区8个白金针菇主栽菌株的鉴别研究[j].华北农学报，2009（1）：219-222.
[9] 何培新，刘伟，郭恒，等.rep-pcr技术在平菇栽培菌株鉴定中的应用[j].河南农业科学，2008（2）：78-80.
[10] 李跃进， 何晓兰， 李泰辉. 中国食用菌已知科属的系统排列[j]. 食用菌学报， 2010， 17（3）： 78- 86.
[11] 肖和艾，钱长发， 谭云峰， 等. 四湖地区稻田野生蘑菇调查初报[j]. 食用菌，1995（5）：6.
[12] 图力古尔. 吉林省担子菌补记（八）[j]. 菌物研究， 2007， 5（2）：72-75.
[13] 卯晓岚. 中国经济真菌[m]. 北京：科学出版社，1998：23.
