【摘要】 目的：研究犬急性心房颤动(房颤)时心房内皮细胞环氧酶-2(cox-2)的变化。方法：12条健康成年杂种犬被随机分为快速心房起搏(rap)组(6只)与正常对照组(6只)，pap组建立犬急性房颤动物模型。分别取两组犬的左心耳、右心耳部位心肌组织，应用免疫组织化学技术检测心耳内皮细胞cox-2的改变。结果：(1)rap组所有犬均可诱发出阵发性房颤;(2)rap组犬心耳内皮细胞cox-2阳性率为83.3%(10/12)，对照组为25.0%(3/12)，rap组显著高于对照组(p=0.013)。结论：急性房颤时心耳内皮细胞cox-2水平增加，提示在房颤早期发生了炎症反应。
【关键词】 心房颤动;过氧化物合酶-2;炎症
change of level of cyclooxygenase-2 in atrium of canines with acute atrial fibrillation
pan weitao，chen guozhen，wu lichun，zheng boren，zhang wenbing
abstract：objective:to investigate the expression of cyclooxygenase-2(cox-2) in right and left atrial appendages in acute atrial fibrillation (af) model of caine.methods:twelve adult mongrel canines were randomly divided into rapid atrial pacing (rap) group (n=6) and sham control group (control group，n=6).a model of acute af in rap group has been developed. immunohistochemistry was performed to detect the change of cox-2 at the protein level in endothelium of atrial appendages.results:(1) paroxysmal af was induced in all of the canines of rap group. (2) immunohistochemistry study indicated that in rap and control groups, the rate of cox-2 expression was 83.3%(10/12) and 25.0%(3/12) respectively. cox-2 expression was significantly stronger in the former (p=0.013).conclusion:acute af in canines led to cox-2 protein expressed in rap group showed its inflammation mechanism.
key words：atrial fibrillation; cyclooxygenase-2;
inflammation
心房颤动(房颤)是临床上最常见的快速型心律失常，并且是脑卒中和死亡的独立危险因素之一 [1]。www.11665.com本研究通过建立犬急性心房颤动模型，观察心耳内皮细胞胞浆环氧酶(cox)-2含量的改变，探讨急性房颤时心房内膜炎症反应的改变。
1 资料与方法
1.1 一般资料
成年健康杂种犬12只，雌雄不限，体重14～24，平均(18.0±2.5)kg，分为2组：快速心房起搏(rap)组和空白对照组，每组6只。2组犬在性别、体重方面无显著差别。本实验严格执行国家有关实验动物管理的规定。
1.2 研究方法
1.2.1 动物模型建立：rap组与对照组犬腹腔注射3%戊巴比妥(北京化学试剂有限公司)30mg/kg麻醉，根据麻醉情况，术中适量经静脉追加。经左侧第四肋间后外侧切口入胸，rap组分别在心房中部、左心室前壁缝置一5f双极电极(美国st. jude medical inc)，左心房双极电极尾端连接df-5a型心脏电生理刺激仪(苏州工业园区东方电子仪器厂)，左心室双极电极尾端连接axq-3按需心脏起搏器(上海医用电子仪器厂)。通过左心房电极，予以脉冲频率400次/min的快速心房刺激诱发房颤，分别持续30s、60s，各重复刺激2次，记录房颤诱发次数及持续时间。如果单纯快速起搏不能诱发出房颤，再给予心室起搏+心房起搏，直至重复诱发出房颤为止。记录房颤诱发次数及持续时间。对照组仅予以开胸手术而不进行起搏。可重复诱发出3次以上、持续时间超过1 min者定义为房颤。
1.2.2 取材：rap组在房颤成功诱发后心脏停跳之前，对照组在行开胸手术后，各取左右心耳组织100mg左右，生理盐水冲洗干净后立即置入液氮中保存，然后转入-80℃深低温冰箱保存待测。
1.2.3 心房组织cox-2免疫组织化学检测：石蜡切片脱蜡、水化、磷酸盐缓冲液(pbs，ph7.4)冲洗后，每张切片加50μl的兔抗人cox-2单克隆抗体(福州迈新生物技术开发公司)室温下孵育60 min，pbs冲洗，每张切片加50μl 即用型maxvisiontm 试剂，室温下孵育15 min。除去pbs液，每张切片加100μl新鲜配制的3，3二氨基联苯(dab)溶液染色，自来水冲洗，苏木素复染，pbs冲洗返蓝，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。
1.2.4 阳性判断标准：以阳性细胞比例及阳性色泽强度为准，见表1。表1 阳性判断标准(略)注：两者得分(0～9)可分四档：0分为“-”，1～3分为“+”，4～6分为“++”，7～9分为“+++”。
1.3 统计分析
计量数据以均数±标准差(±s)表示;计数资料采用x2检验与fisher确切概率法，统计处理均由spss12.0软件包完成，p<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 房颤动物模型的建立
2.2 cox-2蛋白免疫组化表达
免疫组化中，cox-2阳性表达主要表现为棕褐色细颗粒，主要分布在细胞膜与细胞浆，胞核无染色。纵切视野阳性颗粒沿胞膜、胞浆分布。在心内膜与心肌血管内皮细胞均有不同程度的表达，在心肌组织不表达(见图2)。如表2所示，房颤组心耳内皮细胞cox-2蛋白表达的阳性率为83.3%，对照组为25.0%(p=0.013)。表2 房颤组与对照组环氧酶(cox)-2表达水平比较(略)
3 讨 论
心房快速起搏是建立房颤犬模型的有效方法。本研究应用快速心房起搏或心房起搏加心室起搏时，诱发房颤的成功率高。这与既往研究结果是一致的。
bruins等[2]发现心脏手术后白细胞介素(il)-6、c反应蛋白(crp)、补体-crp复合物和c4d-crp复合物水平明显升高，crp水平与术后房性心律失常(尤其是心房颤动)的发生显著相关。frustaci等[3]对特发性房颤患者进行活检时发现心房组织有炎症细胞浸润、细胞坏死和纤维化，符合心肌炎的诊断标准，认为房颤时心房组织存在炎症反应。对慢性心房颤动患者予以小剂量甲基氢化强的松治疗可明显降低血浆crp水平，同时心房颤动的复发率明显减少。crp水平越高甲基氢化强的松的治疗效果越明显，反之亦然[4]。王长华等[5]发现，慢性房颤患者血浆crp水平显著高于窦性心律者，右心耳il-1β、il -6、肿瘤坏死因子(tnf)-α表达显著增加。
cox-2在炎症的早期阶段就开始表达并诱导合成前列腺素e2(pge2)，加重炎症反应，但在6 h后，cox-2已不复存在;48 h后又可重新表达，此时并不产生pge2，而是产生抗炎性前列腺素——pgd2、pgf2α、15-脱氧-△[12,13,14]pgj2。pgj2通过激动过氧化物酶体增值物激活受体γ，拮抗激活蛋白(ap)-1、核因子(nf)-κb，从而产生抗炎作用[6]。cox-2是一种诱导产生的酶，在正常组织一般很少表达，这主要是由于内源性糖皮质激素的抑制作用[7];但可高表达于炎症组织，表达水平与炎症的炎症程度相关，主要表达在单核细胞、血管内皮细胞、滑膜成纤维细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等一系列与炎症有密切关系的细胞上。
本研究显示，房颤组心耳组织cox-2含量显著高于正常对照组，提示在房颤的急性期，就有炎症反应的参与。
【参考文献】
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