【摘要】 目的 建立白芥子不同炮制品中芥子碱硫氰酸盐含量测定方法。方法 采用rp-hplc法,色谱柱为hypersil bds苯基柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),以乙腈-0.08 mol/l磷酸二氢钾溶液(15∶85)为流动相,检测波长240 nm,流速为1.0 ml/min。结果 芥子碱硫氰酸盐进样量在0.8～4.0 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 7,平均回收率为100.98%(rsd＝3.51%)。结论 本法操作简便,结果准确,重现性好,可用于白芥子炮制品的质量控制。
【关键词】 白芥子；芥子碱硫氰酸盐；高效液相色谱法
abstract：objective to develop an hplc method for the assay of sinapine thiocyanate in semen sinapis albae of different processed products. methods it was assayed by rp-hplc. the column was hypersil bds phenyl (5 μm, 250 mm×4.6 mm), the mobile phase was acetonitrile-0.08 mol/l kh2po4 (15∶85). the uv detection wavelength was 240 nm. the flow rate was 1.0 ml/min. results good linearity of sinapine thiocyanate was showed within the range of 0.8～4.0 μg (r＝0.999 7). the average recovery was 100.98% (rsd＝3.51%). conclusion the method is simple, accurate and good reproducible. it can be used for quality control of semen sinapis albae of different processed products.
key words：seman sinapis albae；sinapine thiocyanate；hplc
白芥子为十字花科1年生或越年生芥属草本植物白芥sinapis alba l.的种子,味辛、温,归肺、胃经,具有利气豁痰、温中散寒、通络止痛的作用,主要成分为白芥子苷(sinalbin)、芥子酶(myrosin)、芥子碱(sinapine)等[1],而芥子碱多以芥子碱硫氰酸盐的形式存在。www.11665.Com我们的实验表明,炒白芥子时,加热程度(火力)不同,芥子碱的含量不同。因此,可以用测定白芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量来控制白芥子炮制品的质量。本院院内制剂“冬病夏治消喘膏”由白芥子(炒)、白芷、细辛、延胡索等中药组成,白芥子能使皮肤发红、温暖,甚至发泡,从而破坏皮肤的正常屏障功能,促药渗透[2],在方中起重要作用。所以,原料药白芥子的质量控制,是为“冬病夏治消喘膏”的质量控制奠定基础。
1 仪器与试药
alliance 2690高效液相色谱仪(美国waters),pda-2996二极管阵列检测器(美国waters),empower数据处理系统(美国waters)；hx-200a型高速中药粉碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂)。芥子碱硫氰酸盐(sinapine thiocyanate)对照品(批号111702-200501)购自中国药品生物制品检定所；白芥子药材购于北京卫仁中药饮片厂,经鉴定为十字花科植物白芥sinapis alba l.的种子。乙腈为色谱纯(进口),磷酸二氢钾、甲醇均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及检测方法
色谱柱为hypersil bds苯基柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相为乙腈-0.08 mol/l磷酸二氢钾溶液(15∶85)；流速1.0 ml/min；检测波长：240 nm；柱温为30 ℃；理论塔板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算应不低于3 000。
2.2 标准曲线的绘制
精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品(五氧化二磷干燥器中减压干燥48 h)2.0 mg,加0.08 mol/l磷酸二氢钾溶液溶解并定容至5 ml,精密吸取2、4、6、8、10 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标,测得的对照品吸收度积分值为纵坐标绘制标准曲线,并计算得过原点的线性回归方程：y＝1 273 953x－359 801,r＝0.999 7。结果表明,芥子碱硫氰酸盐在0.8～4.0 μg范围内呈良好的线性关系。
2.3 重复性试验
取同一批号的白芥子6份,每份约0.5 g,精密称定,按“样品测定”项下方法测定样品中的芥子碱硫氰酸盐含量,平均结果为4.628 8 mg/g(rsd＝1.05%)。
2.4 精密度试验
精密吸取5份相同含量的同一供试品溶液,分别注入液相色谱仪,依法测定峰面积,结果芥子碱硫氰酸盐的rsd＝1.05% (n＝5)。
2.5 稳定性试验
将供试品溶液在0、1、2、4、8、16、24 h分别进样,记录峰面积,结果芥子碱硫氰酸盐的rsd＝1.07%(n＝7)。
2.6 回收率试验
取已知含量的样品6份,每份约0.25 g,精密称定,分别精密加入相当于0.25 g样品量的对照品芥子碱硫氰酸盐,按“样品测定”项下方法制备供试品溶液,并依法测定,其平均回收率为100.59%,rsd＝1.19%(n＝6)。结果见表1。表1 回收率测定结果（略）
2.7 样品测定
取60 ℃真空干燥的白芥子粉碎,过4号筛,取细粉0.5 g,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,加甲醇25 ml,超声提取20 min后过滤,并用少量的甲醇洗涤过滤器。洗液并入滤液中,同法提取3次,合并提取液,蒸干甲醇,残渣用0.08 mol/l磷酸二氢钾溶液溶解并定容至25 ml量瓶中,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,进样20 μl,依法测定,图谱见图1。依上述方法对3批不同炮制程度的白芥子进行了测定,结果见表2。表2 白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量测定结果(略)
3 讨论
芥子碱硫氰酸盐在波长240、326 nm处均有吸收,本实验考察了240 nm和326 nm波长的检测情况,在326 nm处白芥子药材峰形有脱尾,而在240 nm处峰分离效果更好,故选择检测波长为240 nm。
炮制程度不同的白芥子药材所含芥子碱硫氰酸盐的量不同,生白芥子高于炒白芥子,文火炒的高于中火炒的。
采用hplc法测定白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量具有快速、精确的特点,可控制白芥子炮制品的质量。
【参考文献】
[1] 徐国钧.中国药材学[m].第2版.北京：中国医药科技出版社,1996. 1224－1226.
[2] 马云淑,罗艳梅,潘 琦.麻黄的透皮吸收与白芥子促透皮作用的实验研究[j].中国医药学报,2002,17(1)：59－60.
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