作者：曾祥丽　丁安伟　单鸣秋

【摘要】  ：目的 比较侧柏叶生品和炭品中鞣质的含量。方法 采用2005版《中华人民共和国药典》鞣质含量测定方法,即磷钼钨酸-干酪素比色法,以没食子酸为对照,测定侧柏叶生品和炭品中的鞣质含量。结果 线性范围为0.026～0.26 mg(r＝0.999 4),平均加样回收率为97.85%,rsd＝1.07%(n＝9)。结论 该方法结果可靠,可用于侧柏叶生品及炭品的鞣质含量测定。

【关键词】  侧柏叶　鞣质　含量测定

　　abstract：objective to compare the tannin contents of platycladus orientalis (l.) franco and its carbonisatus. method a tungsten molybdophosphate-casein colorimetric method was used with gallic acid as reference substance. results the standard curve in the range of 0.026～0.26 mg (r＝0.999 4), and the average recovery rate was 97.85%, rsd＝1.07% (n＝9). conclusion the method is reliable and can be used to determine the tannic of and its different processed products.

　　key words：platycladus orientalis (l.) franco；tannic；content determine
 
   　 侧柏叶为柏科植物侧柏[platycladus orientalis(l.) franco]的干燥枝梢及叶[1],具有凉血止血的功效,临床常用于止血、镇咳、祛痰和抗结核。WwW.11665.com本实验使用磷钼钨酸-干酪素比色法,利用鞣质在碱性溶液中将磷钼钨酸还原,产生深蓝色,其吸收度与含量成正比,采用比色法测定,以没食子酸为对照品,测定总酚和不被干酪素吸附酚的含量,二者之差即为鞣质的含量。

　　1  实验材料

　　1.1  仪器

 　   岛津uv-2400紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；uv-2401pc紫外扫描仪、kq-500b超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；万能粉碎机(天津泰斯特)。

　　1.2  试剂

  　  钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、盐酸均为分析纯；干酪素(生化试剂)；没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110831-200302)；其它试剂均为分析纯。

　　1.3  药材

 　   侧柏叶生品购自南京市药材公司,并经我校中药鉴定教研室吴启南老师鉴定；炭品根据药典炒炭方法炮制而成。

　　2  方法与结果

　　2.1  测定波长的选择
   
　　取对照品总酚和不被吸附的酚比色液,在400～900 nm波长处测定,结果3种比色液均在760 nm处有最大吸收,因此,确定测定波长为760 nm。

　　2.2  供试品溶液制备方法选择

    　因鞣质受热不稳定,故不选加热回流提取,采用冷浸过夜超声提取,且操作简单。

　　2.3  干酪素用量选择

   　 参照2005版《中华人民共和国药典》,选用600 mg的干酪素可基本吸附完全。

　　2.4  对照品溶液的制备

    　精密称取没食子酸50.02 mg,置100 ml的棕色容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取5 ml置50 ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得每1 ml含没食子酸0.050 02 mg。

　　2.5  供试品溶液的制备

 　   取药材粗粉10.0 g,精密称定,置250 ml棕色量瓶中,加水150 ml放置过夜,超声处理10 min,放冷,用水稀释至刻度,摇匀,静置(使固体物沉淀),滤过,弃去初滤液50 ml,精密量取续滤液20 ml,置100 ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,静置,即得。

　　2.6  标准曲线的制备
   
　　精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml,分别置25 ml棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸溶液1 ml,再分别加水11.5、11、10、9、8 ml,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30 min,以相应的试剂为空白,照紫外可见分光光度法在760 nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为：y＝0.210 9x－0.142 5,r
＝0.999 4。

　　2.7  精密度试验

  　  取3号对照品显色后的溶液,连续测定6次,rsd＝0,结果表明本方法精密度良好。

　　2.8  稳定性试验

   　 取3号没食子酸对照品溶液,按“2.6”项下方法,自用29%的碳酸钠溶液定容至刻度开始,每隔若干时间测定1次,共测定10次,结果表明,没食子酸对照品显色后溶液在30 min内吸收度上升较大,在1～30 min内吸收度rsd＝5.17%,在30～60 min内吸收度rsd＝0.56%。故选择在30～60 min内测定。

　　2.9  重复性试验

   　 取侧柏生品粉末,依法处理样品6份,按“2.11”项下测定总酚与不被吸附酚,得出供试品中鞣质含量,重复性结果表明,样品中鞣质平均含量为0.273 4%,rsd＝4.51%。

　　2.10  加样回收率测定
   
　　取侧柏生品粉末1 g,共9份,精密称定,分别加入没食子酸对照品溶液(0.500 2 mg/ml)4.40、5.50、6.60 ml,依“2.2”项下方法制备并测定,计算鞣质的平均回收率为97.85%,rsd＝1.07%(n＝9)。结果见表1。表1  加样回收率考察结果（略）

　　2.11  样品含量测定

　　2.11.1  总酚 

　　精密量取供试品溶液2 ml,置25 ml棕色量瓶中,按“2.6”项的方法,自“加入磷钼钨酸试液1 ml起”加水10 ml,依法测定吸光度。从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的质量(mg),计算,即得。

　　2.11.2  不被吸附的多酚 

　　精密量取供试品溶液25 ml,加至已盛有干酪素0.6 g的100 ml具塞锥形瓶中,密塞,置30 ℃水浴中保温1 h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液。精密量取续滤液2 ml,置25 ml棕色量瓶中,按“2.6”项下方法,自“加入磷钼钨酸试液1 ml起”加水10 ml,依法测定吸光度。从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的质量(mg),计算,即得。

　　2.11.3  样品中鞣质的含量测定 

　　鞣质含量(%)＝(总酚量－不被吸附的多酚量)的浓度差×5×25×12.5/药材质量。结果见表2。表2  侧柏叶生品和炭品中鞣质含量的测定结果(略)

　　3  讨论

   　 将对照品总酚和不被吸附的酚比色液在400～900 nm的范围内扫描,结果显示在760 nm左右有最大吸收,且其波谱坡度较缓,误差较小,所以选择在此处测量。

  　  鞣质有多种显色方法,常用的显色剂有氯化铁、氯化铁- 1,10二氮杂菲、folin ciocalteu试剂、5%盐酸-丁醇、甲胺基粉-重铬酸钾溶液、folin dab8试剂、folin-denis试剂、偏钒酸铵等,但磷钼钨酸比常见的氯化铁显色的颜色更深,灵敏度更高。
   
　　鞣质的测量方法较多,有皮粉法、干酪素法、高锰酸钾法等。皮粉法虽是国际公认的鞣质含量测定方法,但耗用样品多,测定时间长,而且没有选择性,其测定结果往往偏高,适于测定鞣质含量较高的原药材。干酪素法的特点是选择性比皮粉法要高,测出有生理活性的鞣质,而无生理活性的鞣质不被测定。高锰酸钾法跟皮粉法一样选择性较小,易受样品中还原物质干扰,误差大；分光光度法的优点是操作简单,经磷钼钨酸显色后灵敏度较高。由于鞣质易氧化,所以本实验应在避光条件下操作。因鞣质受热不稳定,故不选加热回流提取,采用冷浸过夜超声提取,且操作简单。本实验结果显示,侧柏叶炒炭后鞣质含量下降,其止血作用还可能与药材中所含其它成分有关。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].北京：化学工业出版社, 2005.149.