作者：仝会娟,张强,康琛,李曼玲
【摘要】 目的 建立木蝴蝶中黄芩素和白杨素的含量测定方法,为木蝴蝶的质量标准研究提供参考。方法 回流提取法获得供试品溶液,高效液相色谱法测定其含量。色谱条件：kromasil-c18(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-乙腈-水-冰醋酸(25∶25∶50∶0.2)；流速：1 ml/min；检测波长：275 nm；柱温：室温。结果 黄芩素和白杨素二者分离度和线性关系良好；rsd分别为1.53%和1.35%,表明重复性良好；回收率平均值分别为101.7%和103.0%,rsd分别为1.85%和1.59%,本方法回收率良好。结论 本方法简单可行,重复性好,能够为木蝴蝶质量控制提供参考数据。
【关键词】 木蝴蝶；黄芩素；白杨素；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to establish a hplc method of determining chrysin and baicalein in senmen oroxyli. method the contents of chrysin and baicalein were determined by hplc. the chromatographic conditions were：kromasil-c18 column (5 μm, 250 mm×4.6 mm), with methanol-acetonitrile-water-glacial acetic acid (25∶25∶50∶0.2) as the mobile phase, at the flow rate of 1 ml/min, the detecting wavelength at 275 nm and at the room temperature. results the contents of baicalein and chrysin could be detected by this hplc method, and got good separation and good linear relationship. rsd were 1.53% and 1.35%, indicating good repeatability, recovery rsd were 1.85% and 1.59%, indicating a good recovery. conclusion the method is simple, feasible and repeatable, and can be provide reference for quality control of senmen oroxyli.
key words：senmen oroxyli；chrysin；baicalein；hplc；content determination
木蝴蝶senmen oroxyli为紫葳科植物木蝴蝶oxoylum indicum(l.) vent.的干燥成熟种子。WWw.11665.COM自1963年版《中华人民共和国药典》就开始收载。木蝴蝶味苦、甘,性凉,入肺、肝、胃经,有清肺利咽止咳、舒肝和胃之功效,主治肺热咳嗽、喉痹、音哑、肝胃气痛、疮口不敛。药理研究表明,木蝴蝶有抗炎、抗诱变、抗菌、抗癌及止咳作用。木蝴蝶的化学成分主要为黄酮及其苷类,还含有对羟基苯乙醇类、紫檀碱类化合物,并且从中发现挥发油类物质。到目前为止,对木蝴蝶的质量控制方面大多只有对黄芩苷的含量测定。本试验采用高效液相色谱(hplc)法,同时对其中的白杨素和黄芩素进行了含量测定,以期对木蝴蝶的研究提供参考。
1 仪器与试药
hp1100 hplc仪：g1314a紫外检测器,g1310a单泵,g1314a手动进样器,g1316a柱温箱,g1322a在线形脱气机,agilent chem-station色谱工作站；kq-100型超声清洗器。
黄芩素(批号0732-9604)和白杨素对照品(批号110713- 200690)均购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用。甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：kromasil-c18(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：
甲醇-乙腈-水-冰醋酸(25∶25∶50∶0.2)；流速：1 ml/min；检测波长：275 nm；柱温：室温。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备
取本品粉末0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙酸乙酯50 ml,称定重量,加热回流2 h,过滤,滤液蒸干,加甲醇定容至5 ml容量瓶中,过0.45 μm滤膜,取续滤液,即得供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芩素和白杨素对照品适量,加甲醇制成每1 ml含0.094 mg黄芩素和0.080 4 mg白杨素的溶液,即得对照品溶液。
2.4 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液(mg/ml)5、10、15、20、25 μl,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,分别以二者含量为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程得到：y＝5e＋12x－116 139,r2＝0.999 9,表明黄芩素在0.47～2.35 μg范围内呈线性关系；y＝5e＋12x－74 680,r2＝0.999 7,表明白杨素在0.402～2.010 μg范围内呈线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液,重复进样５次,计算其峰面积积分值的相对标准偏差,结果测得黄芩素和白杨素峰面积rsd分别为0.64%和0.71%,表明精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批样品5份进行测定,计算相对标准偏差,结果测得黄芩素和白杨素含量的rsd分别为1.53%和1.35%,表明重复性良好。
2.7 稳定性试验
按照含量测定项下进行,对同一批样品进行了0、1、2、4、8、24 h测定,rsd分别为0.65%和0.68%。结果表明,其在24 h内基本稳定。
2.8 加样回收率试验
采用加样回收法。精密称定已知含量的木蝴蝶粉末,分别添加黄芩素和白杨素对照品,按上述方法进行测定,结果其回收率平均值分别为101.7%和103.0%,rsd分别为1.85%和1.59%(见表1、表2)。结果表明样品回收率良好。表1 黄芩素加样回收率试验结果（略）表2 白杨素加样回收率试验结果（略）
2.9 样品含量测定
取15个批号的样品,按照供试品溶液制备方法制备供试液,按上述色谱条件测定样品中黄芩素和白杨素的含量。结果见表3。表3 15批样品中黄芩素、白杨素含量测定结果（略）
3 讨论
本试验中,我们对有报道的流动相比例,即甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30∶20∶50∶0.2)[1]进行了预实验,但发现二者的保留时间相对较长,所以适当地进行了流动相的比例调整,即正文中所用到的比例,结果发现后者对二者的保留时间相对较为合适,故我们将调整过后的流动相列入正文。
从结果来看,本试验中所测的2种成分的含量规律性不强,也可以从另一方面说明仅用二者的含量来对木蝴蝶的质量进行控制是不合适的,应该结合其他成分尤其是特征性成分来对其进行质量控制。但本试验中的供试品溶液制备及测定方法,都是经过一系列的方法学考察证明其简单易行、精密度高、分离效果好、稳定性好,可为木蝴蝶的质量研究提供参考依据,同时也为其他中药中含有该2种或者其中1种成分进行含量测定提供参考。
【参考文献】
[1] 黄璐琦.中药材质量标准研究[m].北京：人民卫生出版社,2006.571.
