【摘要】 目的比较建昌帮与樟树帮、中国药典法炮制的熟地黄中还原糖的含量差异。方法采用直接滴定法测定熟地黄中还原糖含量。结果葡萄糖平均回收率为99.80 %，rsd=2.02%；3种炮制方法制备的熟地黄中还原糖含量分别为：(33.88±2.81)%，(30.09±2.13)%，(30.83±2.63)%。结论建昌帮炮制的熟地黄中还原糖含量高于其他两种方法，实验为发展建昌帮炮制方法提供一定的实验依据。
【关键词】 建昌帮；熟地黄；还原糖
熟地黄为玄参科植物地黄rehmannia glutinosa libosch的根茎经炮制加工而成，为临床常用中药，具有滋阴补血，益精填髓的功效［1］。地黄经不同的炮制方法加工后，其化学成分会发生改变［2,3］。纵观历代本草，地黄的炮制方法有十余种之多［4］，不同的炮制方法导致炮制品的质量不一。江西建昌帮采用炆制方法炮制地黄的工艺极具地方特色，本研究比较了建昌帮与樟树帮、中国药典法炮制的熟地黄中还原糖的含量差异。
1 仪器与材料
1.1 仪器
mettler-toledd ab265-s型电子分析天平(瑞士)；可调式电炉（1000w，北京市永光明医疗仪器厂）。WWW.11665.COM
1.2 材料
地黄药材由江西富中药业有限公司提供，经本校李秀英副教授鉴定为玄参科植物地黄r.glutinosa；辅料砂仁、陈皮由本校标本陈列室提供；黄酒（食品级20070913，镇江恒顺酒业有限责任公司）；熟地黄样品：自制；25ml酸式滴定管；无水葡萄糖(分析纯20070122，天津市福晨化学试剂厂)；试剂乙醇、硫酸铜（cuso4·5h2o）、亚甲基蓝、酒石酸钾钠、 氢氧化钠、亚铁氰化钾［k4fe(cn)6］均为分析纯；蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 熟地黄样品的制备
2.1.1 建昌帮法取净生地黄，浸1～2 d，取出，沥干后放入炆药坛内，炆制1天后加入定量的砂仁、陈皮细末，炆至药熟汁尽，起坛，取出，晒至半干，加入定量黄酒拌匀，闷润，取出，适当蒸制，用竹刀或铜刀切斜长厚片，晒九成干，即得。
2.1.2 中国药典法（酒炖法）取净生地黄，加入黄酒拌匀，置适宜的容器内,密闭,隔水加热,炖至酒吸尽,取出,晾晒至外皮黏液稍干时,切厚片或块,干燥,即得。
2.1.3 樟树帮法取洗净润透（润过夜）生地黄用木甑内蒸2白天，焖二晚，中间翻转一次，蒸焖后取出晒至八成干，用铜刀切成约0.6cm厚之横片，干燥，即得。
2.2 试液的配制
2.2.1 碱性酒石酸铜溶液的配制
碱性酒石酸铜甲液的配制：称取15 g硫酸铜及0.05 g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1 000 ml。
碱性酒石酸铜乙液的配制：称取50 g酒石酸钾钠及75 g naoh，溶于蒸馏水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1 000 ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
2.2.2 乙酸锌溶液称取21.9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
2.2.3 亚铁氰化钾溶液称取10.6 g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100 ml。
2.2.4 0.1％葡萄糖标准溶液的配制取无水葡萄糖(105℃干燥至恒重)约1.0 g，精密称定，加水溶解后加入5 ml盐酸，并以水稀释至1 000 ml。
2.3 标定碱性酒石酸铜溶液准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5.00 ml，置于150 ml锥形瓶中，加蒸馏水10 ml，加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2 min内沸腾，准确沸腾30 s，趁热以每2 秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：
f＝c×v
式中：f──10ml碱性酒石酸铜溶液（甲液和乙液各5.00 ml）相当于葡萄糖的量（mg）；
c──葡萄糖标准溶液的浓度（mg/ml）；
v──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积（ml）。
2.4 精密度实验取熟地黄样品(建昌帮法)，按“2.7”项制备方法制成供试品溶液并依法连续测定5次，计算还原糖含量，结果rsd为0.88％。
2.5 重复性实验取同一批熟地黄样品(建昌帮法)5份，精密称定，按“2.7”项方法测定还原糖含量，结果样品中还原糖平均含量为34.25%，rsd为2.27％。
2.6 加样回收率实验精密称取6份已知含量的样品0.7g，每份加入无水葡萄糖约230 mg，按“2.7”项下测定，计算平均回收率。结果见表1。表1 回收率试验结果（略）
2.7 样品含量测定
2.7.1 样品溶液的制备［5］
取60℃干燥至恒重的生地与熟地黄细粉约1.4 g，精密称定，加80％ 甲醇60 ml于烧瓶中，在水浴上回流提取3 h，过滤，用80％甲醇液洗涤药渣3次，合并滤液，转移至100 ml量瓶中，加80％ 甲醇至刻度，摇匀；精密移取上述甲醇提取液50 ml，置蒸发皿中，在通风柜内80℃水浴上挥干甲醇，用水溶解，转移至50 ml量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，滤过；吸取续滤液10ml，置100ml量瓶中，加水50ml摇匀，边摇边加乙酸锌溶液5 ml及亚铁氰化钾溶液5 ml，加水至刻度，混匀。静置30 min，用干燥滤纸过滤，取续滤液，备用。
2.7.2 样品溶液预测
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00 ml，置于150 ml锥形瓶中，加蒸馏水10 ml，加玻璃珠3粒，加热使其在2 min内沸腾，准确沸腾30 s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。
2.7.3 样品溶液测定
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00 ml，置于锥形瓶中，加蒸馏水10 ml，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1 ml的样品溶液，加热使其在2 min内沸腾，准确沸腾30 s，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。
2.7.4 结果处理以无水葡萄糖（c6h12o6）计算熟地黄中还原糖含量（％）。结果见表2。表2 样品中还原糖含量测定结果（略）
还原糖含量（以葡萄糖计，%）＝f×100×50×100m×v×10×50×1000×100%
其中：m──样品重量（g）；
式中：f──10ml碱性酒石酸铜溶液（甲液和乙液各5.00 ml）相当于葡萄糖的量（mg）；
v──测定时平均消耗还原糖样品溶液的总体积（ml）；
1 000──mg换算成g的系数。
3 讨论
本法原理是利用碱性酒石酸铜溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品滴定煮沸的碱性酒石酸铜溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求得还原糖的含量。
直接滴定法对操作条件要求较高，尽量保证每次操作时间、锥形瓶规格、加热电炉功率、滴定速度、预加入大致体积及终点确定方法等条件基本一致，而碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合。试验表明本法准确度高，重复性好。
建昌帮药业起源于江西南城县，以中药饮片加工炮制方法和集散经营著称，中外药界有“药不到樟树不齐，药不过建昌不灵”之说，是我国中医药宝库中一个有显著地方特色的药帮。本研究表明，采用建昌帮炆制方法制备的熟地黄中还原糖含量高于其他两种方法，为继承与发展建昌帮传统炮制方法提供了一定的实验依据，而还原糖含量差异是否会导致药效的变化有待进一步深入研究。
【参考文献】
1］叶定江,张世臣.中药炮制学［m］.北京:人民卫生出版社,1999:289.
［2］温学森,杨世林,马小军,等.地黄在加工炮制过程中hplc图谱的变化［j］.中草药，2004，35(2):153.
［3］刘彦飞,赵宇,武卫红.地黄的化学成分及其在加工炮制过程中的变化［j］.国外医药·植物药分册,2007, 22(3):102.
［4］王孝涛.历代中药炮制法汇典(古代部分)［m］.南昌:江西科学技术出版社,1984:71.
［5］李军，张丽萍，张振凌，等.熟地黄清蒸和酒炖不同时间还原糖含量测定［j］.中成药，2006，28(4)：513.
