作者：姚慧娟，胡道德，顾磊，金剑，刘皋林
【摘要】 目的建立灵杞黄斑颗粒的质量控制方法，为控制其产品质量提供依据。方法采用薄层色谱法对处方中肉苁蓉、枸杞子、灵芝、当归、川芎和丹参等主要药味进行定性鉴别研究。结果灵杞黄斑颗粒中肉苁蓉、枸杞子、灵芝、当归、川芎和丹参的薄层色谱上具有鉴别特征，色谱斑点清晰，rf值适中，阴性对照无干扰。结论鉴别方法简便可靠，专属性强，重复性好，可用于灵杞黄斑颗粒的定性质量控制。
【关键词】 灵杞黄斑颗粒； 薄层鉴别； 肉苁蓉； 枸杞子； 灵芝； 当归； 川芎； 丹参
abstract：objective to establish the quality control method for lingqihuangban granules by tlc identification.methodsherba cistanches deserticolae, fructus lycii, ganoderma lucidum, radix angelicae sinensis, rhizoma chanxiong and radix salviae miltiorrhizae in lingqihuangban granules were identified by tlc. resultsherba cistanches deserticolae, fructus lycii, ganoderma lucidum, radix angelicae sinensis, rhizoma chanxiong and radix salviae miltiorrhizae in lingqihuangban granules could be detected by tlc.conclusionthis method is simple, accurate, selective and highly reproducible. it can be used for the quality control of lingqihuangban granules.
key words：lingqihuangban granules; tlc; herba cistanches deserticolae; fructus lycii; ganoderma lucidum; radix angelicae sinensis; rhizoma chanxiong; radix salviae miltiorrhizae
灵杞黄斑颗粒是在中医理论的基础上，结合眼科临床实践开发的医院制剂，主要用于治疗干性年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration armd）疾病。wwW.11665.CoM从armd病理机理上分析，许多患者的病因可能与活性氧中间物的积累有关，氧自由基过多或清除过慢，从而诱发黄斑变性［1］。灵杞黄斑颗粒由肉苁蓉、菟丝子、枸杞子、灵芝、当归、川芎、丹参等10味药材组方而成，具有补肾温阳、益气健脾、活血生精、通络明目之功效。其中提取物肉苁蓉总苷具有抗氧化、抗脂质作用［2］；菟丝子具有滋补肝肾、明目等作用［3］；枸杞子多糖具有抗脂质过氧化等作用［4］。该制剂经过多年临床实践，对armd有较好的疗效。为了更好地控制药品质量，建立该制剂完善的质量标准，本实验对方中的肉苁蓉、枸杞子、灵芝、当归、川芎和丹参6味中药进行薄层鉴别研究。
1 材料与仪器
1.1 材料和试剂
灵杞黄斑颗粒(上海炼塘中药厂，三批批号分别为：20080501、20080502、20080503)；阴性对照样品（上海炼塘中药厂提供）；毛蕊花糖苷对照品（批号：111530-200303），原儿茶醛对照品（批号：110810-200506），灵芝对照药材(批号：120968-200203)，枸杞子对照药材(批号：121072-200505)，当归对照药材(批号：120927-200613)，川芎对照药材(批号：120918-200809)，均购自中国药品生物制品检定所；硅胶g薄层板购于中国药品生物制品检定所；所用试剂均为分析纯。
1.2 仪器电子分析
天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，型号：al104）；台式离心机（上海安亭科学仪器厂，型号：tdl-60b）；数控恒温浴锅（上海申胜生物技术有限公司，型号：w2010）；超声仪(上海科导超声仪有限公司，型号：sk3300h)。
2 方法与结果
2.1 肉苁蓉的薄层色谱鉴别
取本品颗粒15 g，研细，加甲醇20 ml，超声提取30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇制成每1毫升含2.5 mg的溶液，作为对照品溶液。另取缺肉苁蓉的阴性样品15 g，同供试品溶液制备方法，制备成缺肉苁蓉的阴性对照溶液。照薄层色谱法［5］实验，吸取供试品溶液、对照品溶液及缺肉苁蓉药材的阴性对照溶液各5 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以醋酸乙酯：甲醇：9 %醋酸溶液 (15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图1。
2.2 枸杞子的薄层色谱鉴别
取本品颗粒15 g，研细，加甲醇30 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，用醋酸乙酯振摇提取2次，20 ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取枸杞子对照药材1 g，加水30 ml，加热回流30 min，放冷，过滤，滤液自上述“用醋酸乙酯振摇提取2次”起，同法制成对照药材溶液。另取缺枸杞子药材的阴性样品15 g，同供试品溶液制备方法，制备成缺枸杞子的阴性对照溶液。照薄层色谱法［6］ 实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及缺枸杞子药材的阴性对照溶液各10 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以醋酸乙酯：氯仿：甲酸 (3∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图2。
2.3 灵芝的薄层色谱鉴别
取本品颗粒15 g，研细，加甲醇30 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取灵芝对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取缺灵芝药材的阴性样品15 g，同供试品溶液制备方法，制备成缺灵芝的阴性对照溶液。照薄层色谱法［6］ 实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及缺灵芝药材的阴性对照溶液各5 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）∶甲酸乙酯∶甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图3。
2.4 当归、川芎的薄层色谱鉴别
取本品颗粒15 g，研细，加乙醚30 ml，加热回流1 h，放冷，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。分别取当归和川芎的对照药材各0.5 g，加乙醚30 ml，同法制成对照药材溶液。另取同时缺当归和川芎药材的阴性样品15 g，同供试品溶液制备方法，制备成缺当归和川芎的阴性对照溶液。照薄层色谱法［6］ 实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及缺当归和川芎药材的阴性对照溶液各5 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷：醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图4。
2.5 丹参的薄层色谱鉴别
取本品颗粒15 g，研细，加水50 ml使溶解，离心，上清液用乙醚振摇提取2次，30 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。另取缺丹参药材的阴性样品15 g，同供试品溶液制备方法，制备成缺丹参的阴性对照溶液。照薄层色谱法［5］ 实验，吸取供试品溶液和缺丹参药材的阴性对照溶液各10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿：丙酮：甲酸(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 %三氯化铁乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图5。
3 讨论
灵杞黄斑颗粒为中药复方制剂，成分复杂，笔者通过多次试验，筛选出合理的提取方法和层析系统，对方中主要药物进行质量控制，经样品实验证明，该方法简便易行，斑点分离清晰，重复性好，阴性对照无干扰，可作为该制剂的定性质量控制方法。在丹参的薄层鉴别过程中曾考察以丹参酮ⅱa为对照品，结果发现样品中出现的暗红色斑点不清晰，故而采用原儿茶醛作为对照品，斑点清晰，且分离效果较好，阴性对照无干扰。
【参考文献】
［1］卜文娟，徐国兴.年龄相关性黄斑变性的发病机制研究进展［j］.眼科学，2007，12（12）：41.
［2］木合布力·阿布力孜，毛新民，热娜·卡斯木，等.肉苁蓉总苷在hl-60细胞中的抗氧化活性研究［j］.中国药理学通报，2008，24（3）：362.
［3］聂新华. 高效液相色谱法测定菟丝子中金丝桃苷的含量［j］.中国实验方剂学杂志，2006，12（9）：13.
［4］黄琳娟，田庚元，王仲孚，等. 枸杞子糖缀合物及其糖链对ldl氧化修饰的抑制作用［j］.药学学报，2001，36（2）：108.
［5］国家药典委员会．中国药典，i部［s］.北京：化学工业出版社，2000：附录ⅵb.
［6］国家药典委员会．中国药典，i部［s］.北京：化学工业出版社，2005：附录ⅵb.
