作者：赵新超，白虹， 王元书， 刘爱芹， 李国庆
【摘要】 目的探讨头花蓼总黄酮最佳提取工艺。方法采用正交实验方法进行优选，紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果乙醇浓度对总黄酮的提取有显著影响。结论结合正交实验结果和方差分析，确定12倍量55%乙醇提取3次，1h/次为最佳工艺。
【关键词】 头花蓼； 总黄酮； 提取工艺； 正交实验
abstract：objectiveto optimize the conditions for the extraction of the total flavonoids of polygonum capitatum. methodsthe optimum extraction process of the total flavonoids was selected by orthogonal experiment. the content of total flavonoids was determined by uv-spectrophotometry. resultssignificant effect of alcohol concentration is discovered. conclusionthe optimum extraction process is as follows: polygonum capitatum was extracted with 55% alcohol for 3 times, one hour per time, with the solvent volume 12 times amount.
key words：polygonum capitatum; total flavonoids; extraction process; orthogonal experiment
头花蓼，别名石莽草，石辣蓼和四季红，为蓼科蓼属植物头花蓼polygonum capitatum buch.-ham. ex d. don的干燥全草或地上部分，主产于贵州、云南、四川、西藏、广西等省区，具有清热利湿、解毒止痛、和血散瘀、利尿通淋等功效。WwW.11665.CoM头花蓼长期以来为民间常用草药，国内外对其化学成分、药理作用研究较少，经文献检索，其主要成分为黄酮类化合物［1，2］，还包括苯甲醛、乙酸、没食子酸、β-谷甾醇等［3］，具有抗菌、降温、利尿等药理活性，临床上主要用于治疗泌尿生殖系统感染和排石［4～9］。关于头花蓼总黄酮的提取工艺研究未见文献报道，我们以总黄酮得率为指标，通过正交实验考察了乙醇浓度、乙醇体积、提取时间和提取次数4个对提取因素的影响，确定了头花蓼总黄酮的最佳提取工艺。
1 材料与仪器
1.1 材料与试剂头花蓼，产地贵州，由本所天然药物化学研究室鉴定为蓼科蓼属植物头花蓼polygonum capitatum buch.-ham. ex d. don的干燥全草，芦丁对照品，由本所天然药物化学研究室杜成林博士提供，实验所用试剂均为ar。
1.2 仪器梅特勒万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），u-3000紫外分光光度计（日立有限公司)。
2 方法与结果
2.1 总黄酮含量测定方法
2.1.1 标准曲线的制备精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品6.5 mg，置25 ml 量瓶中，加60%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取6.0 ml至25 ml量瓶中，60%乙醇稀释至刻度，得对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml 分别置10 ml 量瓶中，各加0.1 mol/ml 三氯化铝溶液2 ml，1 mol/ml 醋酸钾溶液3 ml，60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置30 min，以相应的溶液作空白，在420 nm处测定吸收度，以浓度对吸收度作标准曲线，得线性回归方程为：a = 33.307c + 0.0004，r=0.999 8，线性范围：0.003 086 4～0.030 864 mg/ml。
2.1.2 供试品溶液的制备及测定称取一定量头花蓼原药材，石油醚索氏提取8 h，取出药材晾干，得脱脂头花蓼。精密称取脱脂头花蓼5 g，共9份，按正交实验设计（见表2）回流提取，过滤，合并滤液，浓缩，用60%乙醇转移至50 ml 容量瓶并稀释至刻度，再精密量取1 ml 至25 ml 容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，滤过，作为样品溶液。精密吸取1 ml 不同提取条件下的样品溶液至10 ml 容量瓶中，按“2.1.1”项测定，并用回归方程计算总黄酮含量。
2.1.3 回收率实验精密吸取一定量的已知黄酮含量的头花蓼提取液，分别加入一定量的芦丁对照品溶液，按上述方法测定总黄酮的含量，平均回收率为98.1%（n=6），rsd为1.07%。
2.2 正交实验设计以总黄酮得率为考察指标，选择溶媒（乙醇）浓度、溶媒用量、提取时间和提取次数为考察因素，每个因素取3个水平，进行l9(34)正交实验，因素水平见表1。结果见表2。表1 头花蓼总黄酮提取因素水平（略）表2 l9(34)正交实验结果分析（略）
根据以上正交分析结果可知，各考察因素的极差关系为：ra＞rd＞rb＞rc，理论最佳提取工艺为：a1b3c1d3，对于提取效率影响最小者为c项，即提取时间因素影响最小，把c作为空列，作为误差项处理，进行方差分析。结果见表3。表3 影响头花蓼总黄酮提取因素方差分析表（略）
3 讨论
由正交实验结果的极差分析可以直观的看出，头花蓼总黄酮的最佳提取工艺为a1b3c1d3，即用15倍量55%乙醇提取3次，1 h/次。另从表3方差分析结果可知，对提取工艺影响因素的大小顺序为a>d>b，除溶媒因素外，其它因素对提取率影响都不显著，为次要因素。从节约成本考虑，我们优选a1b2c1d3，即12倍量55%乙醇提取3次，1 h/次为最佳实际操作工艺。
【参考文献】
［1］李勇军，骆宏丰，王永林，等. 头花蓼黄酮类成分研究［j］. 中国药学杂志，2000，35（5）：300.
［2］gao liming, wei xiaomei, zheng shanzheng. a novel flavone from polygonum capitatum ham ex d. don［j］. indian journal of chemistry, 2001, 40 (6):531.
［3］吴西居，王德仁. 石莽草化学成分的研究［j］. 中草药，1985，4:5.
［4］任光友，常凤岗，卢素琳，等. 石莽草的药理研究［j］. 中国中药杂志，1995，20（2）：107.
［5］徐英春，张小江，谢秀丽，等. 热淋清颗粒对淋病奈瑟球菌体外抑菌活性的研究［j］. 临床泌尿外科杂志，2001，16（6）：287.
［6］张 杰，屈遂林，杨双惠. 热淋清对泌尿系统结石的疗效［j］. 临床泌尿外科杂志，2000，15（11）：528.
［7］徐文欣. 热淋清颗粒治疗尿路感染疗效观察［j］. 时珍国医国药，2001，12（7）：645.
［8］俞建军，马小琴. 热淋清颗粒治疗尿路感染的疗效评价［j］. 浙江中医杂志，2002，37（3）：135.
［9］杨立明，白明君，张 玥，等. 热淋清颗粒治疗尿路感染的临床观察［j］.长春中医学院学报，2002，18（3）：18.
2.2 正交实验设计以总黄酮得率为考察指标，选择溶媒（乙醇）浓度、溶媒用量、提取时间和提取次数为考察因素，每个因素取3个水平，进行l9(34)正交实验，因素水平见表1。结果见表2。表1 头花蓼总黄酮提取因素水平（略）表2 l9(34)正交实验结果分析（略）
根据以上正交分析结果可知，各考察因素的极差关系为：ra＞rd＞rb＞rc，理论最佳提取工艺为：a1b3c1d3，对于提取效率影响最小者为c项，即提取时间因素影响最小，把c作为空列，作为误差项处理，进行方差分析。结果见表3。表3 影响头花蓼总黄酮提取因素方差分析表（略）
3 讨论
由正交实验结果的极差分析可以直观的看出，头花蓼总黄酮的最佳提取工艺为a1b3c1d3，即用15倍量55%乙醇提取3次，1 h/次。另从表3方差分析结果可知，对提取工艺影响因素的大小顺序为a>d>b，除溶媒因素外，其它因素对提取率影响都不显著，为次要因素。从节约成本考虑，我们优选a1b2c1d3，即12倍量55%乙醇提取3次，1 h/次为最佳实际操作工艺。
【参考文献】
［1］李勇军，骆宏丰，王永林，等. 头花蓼黄酮类成分研究［j］. 中国药学杂志，2000，35（5）：300.
［2］gao liming, wei xiaomei, zheng shanzheng. a novel flavone from polygonum capitatum ham ex d. don［j］. indian journal of chemistry, 2001, 40 (6):531.
［3］吴西居，王德仁. 石莽草化学成分的研究［j］. 中草药，1985，4:5.
［4］任光友，常凤岗，卢素琳，等. 石莽草的药理研究［j］. 中国中药杂志，1995，20（2）：107.
［5］徐英春，张小江，谢秀丽，等. 热淋清颗粒对淋病奈瑟球菌体外抑菌活性的研究［j］. 临床泌尿外科杂志，2001，16（6）：287.
［6］张 杰，屈遂林，杨双惠. 热淋清对泌尿系统结石的疗效［j］. 临床泌尿外科杂志，2000，15（11）：528.
［7］徐文欣. 热淋清颗粒治疗尿路感染疗效观察［j］. 时珍国医国药，2001，12（7）：645.
［8］俞建军，马小琴. 热淋清颗粒治疗尿路感染的疗效评价［j］. 浙江中医杂志，2002，37（3）：135.
［9］杨立明，白明君，张 玥，等. 热淋清颗粒治疗尿路感染的临床观察［j］.长春中医学院学报，2002，18（3）：18.
