作者：江涛 ，唐春萍 ,曾昭智1,张锦红 ,陈艳芬
【摘要】 目的 探讨蒿甲虚热清颗粒的解热作用及机制。方法 采用家兔阴虚热盛证模型和酵母混悬液复制大鼠发热模型，观察蒿甲虚热清颗粒的解热作用，并采用放射免疫法测定下丘脑中camp含量的变化。结果 蒿甲虚热清颗粒对家兔阴虚热盛证模型和酵母混悬液复制大鼠发热模型的动物体温升高有明显的抑制作用，并能抑制下丘脑中camp含量的增高。结论 蒿甲虚热清颗粒有明显的解热作用，其机制可能与其减少下丘脑camp生成与释放有关。
【关键词】 蒿甲虚热清; 解热 ; camp
(1.laboratory animal center; 2.school of traditional chinese medicine,guangdong pharmaceutical college,guangzhou,guangdong 510006,china)abstract:objective to explore the antipyretic effects of haojia xureqing granules and the mechanism of the antipyretic effects. methods rabbit model of extreme heat due to deficiency of yin and rat fever model induced by subcutaneous injection of beer yeast suspension were used,the antipyretic of haojia xureqing granules was observed,and variations of camp level in hypothalamus was determined with radioimmunoassay.results intragastric administration with haojia xureqing granules showed obvious inhibitive effects on temperature elevation in the rabbit model of extreme heat due to deficiency of yin and rat fever model induced by subcutaneous injection of beer yeast suspension,and inhibited the increasing of camp level in hypothalamus.conclusion haojia xureqing granules had significant antipyretic effects,and the mechanism might be related to the generation and release of camp in hypothalamus.
key words:haojia xureqing granules; antipyretic effects; camp
蒿甲虚热清颗粒是根据《温病条辨·卷三下焦篇》中青蒿鳖甲汤的改良剂型。WWw.11665.COm该药由青蒿、醋鳖甲、石斛、生地、知母、葛根、丹皮、甘草等8味药材组成，具有清热、养阴、透邪等功效，主治瘟病后期，阴液损伤、阴虚邪伏之证，是 治疗 瘟病后期阴虚发热的代表方剂[1]。前期的研究表明，该药对阴虚小鼠模型有明显的影响(另文发表)，本文选用家兔阴虚热盛模型和啤酒酵母致热大鼠模型，研究蒿甲虚热清颗粒的解热作用及机制，以期为临床应用蒿甲虚热清颗粒治疗阴虚热盛证发热提供依据。
1 试验材料
1.1 药物及试剂
蒿甲虚热清颗粒( 4 g/袋，每袋含丹皮酚6 mg、葛根素12 mg，批号：20080401，由广东药学院药物研究所提供);阳性对照药：小柴胡颗粒(广州光华药业股份有限公司，批号：k24802);速尿注射液(20 mg/支，江苏武进制药厂生产);大肠杆菌内毒素工作标准品(8 eu/ml，批号：20080518，湛江海洋生物制品厂生厂);啤酒酵母(500 g/包，安琪酵母股份公司生产，批号：20080912);camp放免试剂盒(上海中医药大学同位素室)。
1.2 动物
spf级sd大鼠、普通级新西兰兔，由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号: syxk(粤)20030002,正常饲养3 d后供试。
1.3 仪器
tsn695b型放免γ测量仪(上海原子核所日环仪器厂)。
2 方法
2.1 对家兔阴虚热盛证模型的影响[2]
新西兰兔48只，体质量2.0～2.5 kg，雌雄各半。实验室温度23～25 ℃，实验前2 d先测兔肛温，每隔15 min测1次，连续3次，以每天体温波动不超过0.2 ℃、基础体温均值为38.7～39.3 ℃的动物供试验用。实验前18 h开始禁食禁水，实验当日先测动物体温2次(波动不超过0.2 ℃)，作为基础体温，自家兔耳缘静脉注射速尿，剂量为2.5 ml/kg，1 h后再注射等量的速尿，2 h后耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素4 eu/kg(0.5 ml/kg)。选取注射大肠杆菌内毒素0.5 h后体温上升超过0.5 ℃家兔40只，随机分为5组:(a)大肠杆菌内毒素+生理盐水对照组;(b) 大肠杆菌内毒素+柴胡冲剂组;(c) 大肠杆菌内毒素+蒿甲虚热清颗粒低、中、高剂量组，各组家兔灌胃给予相应药物，正常对照组给予等容量生理盐水，给药后于0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 h各测定兔体温，以给药前家兔体温平均值为基础体温， 计算 各测定时间点家兔体温的变化。
2.2 对大鼠背部皮下注射啤酒酵母混悬液致热实验的影响[3]
取sd大鼠，雌雄各半，实验室温度23～24 ℃，实验前 2 d将温度计插入肛门内2 cm，每日测定体温1次，连续3 d，使大鼠适应测体温操作。选取体温36.6～38.3 ℃之间，体温波动在0.2 ℃以内者，测定给药前体温，随后皮下注射10%(φ) 啤酒酵母混悬液(用质量分数0.5%cmcna配制)，给药容积为10 ml/kg，5 h后测定体温1次，选择体温升高1 ℃以上者作为实验对象，然后随机分成5组:(a) 啤酒酵母混悬液+生理盐水对照组;(b) 啤酒酵母混悬液+柴胡冲剂组;(c) 啤酒酵母混悬液+蒿甲虚热清颗粒低、中、高剂量组，立即灌胃给予相应的药物，给药容积为5 ml/kg，生理盐水对照组给予等量的生理盐水，测定给药后1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 h大鼠体温，以给药前大鼠体温平均值为基础体温，计算各测定时间点大鼠体温的变化。
2.3 对酵母致发热大鼠下丘脑camp含量的影响[4]
取sd大鼠，雌雄各半，实验室温度、啤酒酵母混悬液的使用及体温测量方法同“2.2”。选择体温升高1 ℃以上大鼠40只，随机分成4组，即模型组、模型组+蒿甲虚热清颗粒高、中、低剂量组，并另取体温正常大鼠10只作为正常对照组。每组灌胃给予相应的药物，给药容积为5 ml/kg，正常对照组给予等量的生理盐水，给药2 h后测体温，记录并比较各组间体温变化值(δt=药后2 h体温-基础体温)。然后快速断头取全脑，在冰浴下于灰结节和视交叉之间的中心点取出下丘脑，按camp放免药盒说明书操作步骤处理下丘脑组织并测定camp的含量。
2.4 统计学处理
采用spss12.0软件,计量资料以(±s) 表示，采用单因素方差分析，相关分析用直线相关分析法,以p<0.05为差异有显著性。
3 结果
3.1 对家兔阴虚热盛证模型的影响
家兔注射速尿后排尿次数及尿量明显增多，注射大肠杆菌内毒素后，随着体温的不断升高，动物出现呼吸急促、烦燥不安、耳廓发热发红，给药组上述症状有不同程度的减轻。表1显示，模型组在1.5 h出现发热高峰值，蒿甲虚热清颗粒低、中、高剂量组给药后1～2 h体温开始下降，降温作用持续4 h，作用呈剂量依赖性。
3.2 对大鼠背部皮下注射啤酒酵母混悬液致热实验的影响
大鼠皮下注射啤酒酵母混悬液5 h后体温升高，蒿甲虚热清颗粒低、中、高剂量组给药后1～2 h体温开始下降，降温作用持续4～5 h，作用呈剂量依赖性，结果见表2。表1 蒿甲虚热清颗粒对家兔阴虚热盛证模型的解热作用
3.3 对酵母致发热大鼠下丘脑camp含量的影响[3]
注射酵母5 h后，与生理盐水组相比，模型组及给药组大鼠的体温均明显上升(p<0.01)，说明造模成功。灌服蒿甲虚热清颗粒后2 h时，高、中、低剂量组δt与模型组比较差异有显著性(p<0.05～0.01)。模型组下丘脑camp的含量明显高于正常组(p<0.01)。给药组在抑制体温升高的同时，也有效地抑制camp含量的升高，与模型组比较差异有显著性(p<0.05或0.01)。将生理盐水组、模型组、给药组的δt与camp含量变化进行相关分析，结果表明二者之间存在明显的正相关，相关系数为rδtcamp=0.98(p<0.01，见图1)。表3 蒿甲虚热清颗粒对酵母致发热大鼠下丘脑camp含量的影响
4 讨论
阴虚热盛证以阴虚、热盛并存为特征。本实验采用速尿和大肠杆菌内毒素复制动物阴虚热盛模型,实验前先予禁水禁食;先后2 次给予利尿作用强大的速尿静脉注射,达到利尿脱水后体质量减轻的目的,最后静注大肠杆菌内毒素使家兔发热,呈现热象,从而形成阴虚热盛之证。实验结果表明家兔在速尿静注后到尿量明显增多、体重减轻,大便干燥,攻毒后又出现发热,1.5 h 左右达高峰,同时伴见呼吸急促,烦躁不安,耳廓发红发热,舌面千燥而红等症状。因此,从模型组病症及相关实验室检测结果可见,该模型是成功的。
蒿甲虚热清颗粒组方中鳖甲滋阴退热，入络搜邪;青蒿芳香质轻,清热透络，引邪外出;又配伍生地滋阴凉血;丹皮、知母清泻阴分伏火,共成滋阴清热、透邪外出之功。本实验结果表明蒿甲虚热清颗粒对阴虚热盛模型和酵母作为致热原的发热模型均具有解热作用,且解热作用存在剂量依赖性。
camp作为一种重要的中枢发热介质已受到国内外学者的一致认同。camp是接近体温调节终末环节的发热介质,大多数学者认为，na+/ca2+上升诱导下丘脑内camp含量上升是多种致热原引起发热的共同中介环节[5]。研究表明,发热动物模型脑脊液及下丘脑组织中camp含量增多与体温升高呈显著正相关[6，7]。实验结果显示,皮下注射酵母混悬液在引起明显发热的同时,下丘脑中camp含量也明显增加;而蒿甲虚热清颗粒不仅抑制了发热反应,也抑制了下丘脑中camp含量的升高。相关分析显示,下丘脑中camp的含量变化与体温变化之间存在明显的正相关。这表明下丘脑中camp含量的降低与蒿甲虚热清颗粒的解热作用相平行。至于蒿甲虚热清颗粒如何抑制下丘脑中camp含量的升高，有待进一步研究。
【 参考 文献 】
[1] 杜美君. 青蒿鳖甲汤证探析[j].
