【摘要】 目的初步测定野生少花龙葵的化学成分类型及其对亚硝化反应的抑制作用。方法用石油醚、95%乙醇和水依次对野生少花龙葵进行提取，根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分的类型，研究各提取物对亚硝胺合成的阻断及对亚硝酸盐的清除作用。结果石油醚提取液中含有甾体或三萜类及油脂，95%乙醇提取液中含有酚类、鞣质、生物碱以及香豆素和萜类内酯，水提取液中含有糖及其苷类、氨基酸、蛋白质、皂苷和生物碱；3种提取物对亚硝化反应均有抑制作用，其中醇提取液作用较强。结论野生少花龙葵对亚硝化反应有抑制作用，有望成为防癌新资源。
【关键词】 少花龙葵 提取物 成分预试 亚硝化 抑制
research on the chemical components and their inhibition on nitrosation of the extracts from solanum photeinocarpum nakamura et odashima
duan zhifang，huang lihua
(biopharmaceutical research and development center of zhaoqing university, zhaoqing 526061, china)
abstract：objectiveto study the chemical components and their inhibition on nitrosation.methodssolanum photeinocarpum nakamura et odashima was extracted by petroleum ether，95% ethanol and water respectively. the preliminary tests of the chemical components were experimentized by color reaction and precipitation reaction, while their inhibition on nitrosation such as nitrosodimethylamine synthesis and sodium nitrite were studied. resultsthe experiments showed that there were steroids or tri-terpenoid and oil in the petroleum ether extract and phenols, tanning, alkaloids, coumarin and terpenoids in the 95% ethanol extract，while there were saccharides and glycoside, amino-acid, protein, saponins and alkaloids in the water extract. these extracts had some inhibition on nitrosation and the inhibition of the 95% ethanol extract was stronger than the others.conclusionsolanum photeinocarpum nakamura et odashima has inhibitory effect on nitrosation and it may become a new resource to prevent cancer.
key words：solanum photeinocarpum nakamura et odashima； extracts； preliminary tests； nitrosation； inhibition
少花龙葵solanum photeinocarpum nakamura et odashima别名白花菜，为茄科一年生草本植物，多生长在果园、田边、路旁等地，主要分布在广东、广西、海南、贵州、福建、台湾等省及地区［1］。WWW.11665.COM少花龙葵嫩叶可作蔬菜食用，全草可入药,是华南地区重要的药用植物，具清热利湿、凉血解毒功效，常用作治疗痢疾、高血压病、扁桃体炎、肺热咳嗽、牙龈出血、眼疾及呼吸道疾病等［2］。
李芸瑛等［3］对野生少花龙葵嫩叶的主要营养成分、维生素、矿质元素等进行了分析测定，证明了它是一种营养保健的野生植物资源。目前对其药用成分的研究尚未见报道。文献表明茄科茄属植物龙葵solanum nigrum l.为抗癌中草药之一［4］。为了寻找新的药用植物资源，本文对其同科植物少花龙葵进行此方面的研究。实验用石油醚、95%乙醇和水依次对野生少花龙葵全草进行提取，根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分的类型，研究不同浓度的提取物对二甲基亚硝胺（ndma）合成的阻断和对亚硝酸钠的清除作用，初步研究少花龙葵提取物的防癌生物活性，以期为少花龙葵的开发利用寻找新的途径。
目前亚硝胺是最令人关注的一类化学致癌物，它能引发肝脏等多种器官的恶性肿瘤。阻断亚硝胺合成或清除亚硝胺的前体是预防癌症的一个有效途径。本文旨在为加速对少花龙葵这一野生植物资源的综合开发利用提供科学依据。
1 器材
1.1 材料
野生少花龙葵全草于4月上旬采自肇庆学院校外田边，先以自来水冲洗，再用蒸馏水清洗，自然晾晒后80℃干燥，粉碎备用。
1.2 试剂
醋酐、浓硫酸、磷钼酸、氯仿、三氯化铁、铁氰化钾、对硝基苯胺、浓盐酸、亚硝酸钠、明胶、氯化钠、硫酸铁铵、醋酸铅、溴酚蓝、溴甲酚绿、碘、碘化钾、硅钨酸、苦味酸、鞣酸、三氯化铝、镁粉、醋酸镁、氢氧化钾、硼酸、氢氧化钠、碳酸钠、盐酸羟胺、三氯乙酸、硫酸铜、a-萘酚、酒石酸钾、茚三酮、柠檬酸钠、二甲胺、对氨基苯磺酸、α-萘胺、n-1-萘乙二胺盐酸盐、冰乙酸、正丁醇、醋酸乙酯、甲醇、丙酮、石油醚、乙醇等均为国产分析纯。
1.3 仪器
fa2004n、fa1604 电子分析天平（上海），hh-4型数显恒温水浴锅（常州），zkj-1型循环水真空泵、re-52aaa 旋转式蒸发器（上海），dj-10倾倒式粉碎机（上海），101-2as电热鼓风恒温干燥箱（上海），uv-2550型紫外可见分光光度计（日本）。
2 方法
2.1 少花龙葵化学成分预试验［5］
2.1.1 石油醚提取液
取粉碎的少花龙葵1 g，加10 ml石油醚（沸程60～90℃），放置3 h，过滤，滤液置表面皿上任其挥发，残留物进行甾体或三萜类、挥发油和油脂的试验。
2.1.2 乙醇提取液
取粉碎的少花龙葵10 g，加入100 ml石油醚（沸程60～90℃）浸泡3 h，抽滤。滤渣挥干溶剂，加95%乙醇100 ml，在水浴上加热回流1 h，过
滤，滤液留2 ml进行酚类、糅质、有机酸的预试验。其余浓缩成浸膏，浸膏分为两部分，一部分置于研钵中，用2%hcl溶解，过滤，取盐酸水溶液进行生物碱试验，附滤纸上的残渣再以少量乙醇溶解，作黄酮、蒽醌试验；另一部分浸膏再以少量的醋酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加适量5%naoh振摇，使酚性物质及有机酸等转入下层氢氧化钠水溶液中，醋酸乙酯部分用蒸馏水洗至中性，将醋酸乙酯液2～3 ml在水浴上蒸干，以1～2 ml乙醇溶解作香豆素与萜类内酯和强心苷的试验。
2.1.3 水提取液
取粉碎的少花龙葵5 g，加入50 ml石油醚（沸程60～90℃）浸泡3 h，抽滤。滤渣挥干溶剂，加95%乙醇50 ml，在水浴上加热回流1 h，抽滤。滤渣挥干溶剂后，加水50 ml，在50～60℃的水浴上加热1 h后过滤，此滤液在试管及滤纸片上做多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、糅质、氨基酸、蛋白质、生物碱预试验。
2.2 少花龙葵提取物抑制亚硝化反应研究［6］
2.2.1 提取物的制备
取粉碎的少花龙葵20 g，加入200 ml石油醚（沸程60～90℃）浸泡3 h，抽滤，滤液减压浓缩成浸膏，干燥备用。滤渣挥干溶剂，加95%乙醇200 ml，在水浴上加热回流1 h, 抽滤，滤液减压浓缩成浸膏，干燥备用。滤渣挥干溶剂后，加水200 ml，在50～60℃的水浴上加热1 h， 抽滤，滤液减压浓缩成浸膏，干燥备用。取上述各提取物用相应提取剂配制1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 mg/ml待测液。
2.2.2 提取物阻断亚硝胺合成的试验
取ph为3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液5 ml，加入1 mmol/l nano2溶液0.5 ml，再加入1 mmol/l二甲胺溶液0.5 ml，分别加入不同浓度的待测液1 ml，用蒸馏水定容至10 ml，在37℃下恒温1 h。吸取2.0 ml该反应液至7 cm2培养皿中，加入0.5% na2co3溶液1ml，紫外灯照射15 min，取出后加1%对氨基苯磺酸溶液3.0 ml，再加0.1% 的α-萘胺3.0 ml，加蒸馏水精确为10.0 ml，然后摇匀放置15 min，在525 nm处测吸光度值(ax)。同时用浸提剂做空白试验测吸光度值(a0)，计算阻断率。
阻断率(%) = (a0-ax)/a0×100%
2.2.3 提取物清除nano2的试验
分别取不同浓度待测液1.0 ml，加入5 ml ph为3.0的柠檬酸钠-盐酸缓冲液，再加入1.45 mmol/l的nano2溶液2 ml，用蒸馏水定容至10 ml，37℃恒温1 h，然后各吸取2 ml反应液于7 cm2培养皿中，加入0.4%的对氨基苯磺酸溶液4 ml，0.2%的n-1-萘乙二胺盐酸盐溶液4 ml，摇匀放置15 min后，用分光光度计在540 nm处测吸光度值（ax)，同时用浸提剂做空白试验测吸光度值（a0)，计算清除率。
清除率(%)=(a0-ax)/a0×100%
3 结果
3.1 各溶剂对少花龙葵的提取效果依次用石油醚、95%乙醇和水提取少花龙葵，将各提取液减压浓缩，干燥后称重，计算提取率。结果见表1。表1 不同溶剂对少花龙葵的提取率（略）
3.2 少花龙葵化学成分预试结果少花龙葵石油醚提取液、乙醇提取液和水提取液部分化学成分预试结果见表2。表2 少花龙葵化学成分预试结果（略）
上述实验结果表明，石油醚提取液中含有甾体或三萜类以及油脂；95%乙醇提取液中含有酚类、鞣质、生物碱以及香豆素和萜类内酯，未检测到有机酸、黄酮、蒽醌类和强心苷；水提取液中含有糖及苷类、氨基酸、蛋白质、皂苷和生物碱，未检测到有机酸，无法确定是否存在酚类和鞣质。
3.3 少花龙葵提取物对二甲基亚硝胺合成的阻断作用在模拟人体胃液的条件下，二甲胺与亚硝酸钠在37 ℃条件下可适宜地生成二甲基亚硝胺，在紫外光照射下二甲基亚硝胺可分解成二甲基仲胺和亚硝酸根，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与α-萘胺偶合生成红色化合物，用分光光度计测出该化合物的吸光度值可计算上述反应液中亚硝胺含量的多少。当往少花龙葵提取物中依次加入二甲胺与亚硝酸钠时，提取物优先先亚硝酸钠作用，使得二甲胺不能与亚硝酸钠反应，达到阻止亚硝胺生成的目的。据此可以比较相同条件下生成亚硝胺量的多少来反映少花龙葵提取物阻断能力的强弱，生成亚硝胺量少，少花龙葵提取物的阻断能力就强，反之则弱。
不同浓度提取物对二甲基亚硝胺合成阻断作用（见图1）为3次测定平均值。
由图1可知少花龙葵石油醚提取物、乙醇提取物和水提取物均对阻断亚硝胺合成有一定的作用。随着各提取物浓度的增大，阻断率均呈现出明显的变化，先增大后减小。其中乙醇提取物的阻断率较大，水提取物次之，石油醚提取物最弱，这可能是石油醚提取物在反应体系中溶解度小所致。
3.4 少花龙葵提取物对nano2的清除作用亚硝酸盐在弱酸性的条件下，能与对氨基苯磺酸重氮化后，再与n-1-萘乙二胺盐酸盐偶合生成红色的化合物，用分光光度计测出该化合物的吸光度值可以反映出少花龙葵提取物清除nano2的能力的强弱，生成红色化合物的量少，说明提取物清除能力强，反之则弱。
不同浓度提取物对nano2清除作用见图2（为3次测定平均值）。
由图2可知少花龙葵石油醚提取物、乙醇提取物和水提取物均能清除亚硝酸钠。随着各提取物浓度的增大，清除率均呈现出明显的变化，先增大后减小。其中乙醇提取物的清除率较大，水提取物次之，石油醚提取物最弱。
4 结论
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本文用石油醚、95%乙醇和水依次对野生少花龙葵全草进行提取，根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分的类型，研究不同浓度的提取物对二甲基亚硝胺合成的阻断和对亚硝酸钠的清除作用。实验表明石油醚提取液中主要含有甾体或三萜类以及油脂，95%乙醇提取液中主要含有酚类、鞣质、生物碱以及香豆素和萜类内酯，水提取液中主要含有糖及其苷类、氨基酸、蛋白质、皂苷和生物碱。3种提取物均对阻断亚硝胺合成和清除亚硝酸盐有一定作用，其中乙醇提取物对亚硝化反应的抑制作用强于石油醚提取物和水提取物，在体外模拟胃液的条件下，少花龙葵乙醇提取物对ndma合成的最大阻断率为67.3%，对nano2的最大清除率为70.2%，作为防癌剂具有一定的开发利用价值。
少花龙葵资源丰富，营养价值高，口味独特，医食两用，未受农药和化肥污染，是人们要求回归自然的“野味”佳品，极具开发利用价值。本实验发现其乙醇提取物对亚硝化反应具有较好的抑制作用，下一步工作计划对该部分进行纯化以找到抑制作用更强的物质，使少花龙葵有望成为经济、高效的防癌新资源。
【参考文献】
［1］全国草药汇编编写组．全国中草药汇编，第2版［m］.北京：人民卫生出版社，1996：265.
［2］邓汝铭，黄 松，苏 青，等．少花龙葵的生药研究［j］.广西中医药，1999，22(5)：44.
［3］李芸瑛，黄丽华，陈雄伟．野生少花龙葵营养成分的分析］.
