龙眼参黄酮对急性心肌梗死犬心肌超微结构的影响
【关键词】 龙眼参黄酮;心肌缺血;超微结构;心肌;实验
【摘要】 目的 观察龙眼参黄酮对急性心肌梗死犬心肌超微结构的影响。方法 取杂种犬24只，随机分为4组(每组6只)，分别为模型组、阳性药(地奥心血康胶囊)组，龙眼参黄酮30.0 mg/kg和60.0 mg/kg剂量组;结扎麻醉开胸犬左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型，采用jem1200ex型透射电子显微镜观察龙眼参黄酮对心肌细胞超微结构的影响。he染色，olympus bx50显微镜观察龙眼参黄酮对心肌纤维结构的影响。结果 与模型组比较，龙眼参黄酮能够明显改善急性心肌缺血所致的心肌光镜及电镜下细胞结构的损伤程度。结论 龙眼参黄酮对犬急性心肌缺血损伤时的心肌细胞具有明显的保护作用。
【关键词】 龙眼参黄酮;心肌缺血;超微结构;心肌;实验
龙眼参(longyanshen，lys)原植物经考证为蝶形花科植物蔬叶崖豆〔millettia pulchra kura var.laxior(dunn)z.wei〕的块跟〔1〕，是广西民间广泛应用的壮药。现代药理学研究表明，lys黄酮能够降低大鼠心肌缺血再灌注后丙二醛(mda)含量、升高超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gshpx)活性，降低心肌梗死范围〔2〕。WwW.11665.coM对大鼠脑缺血再灌注所致损伤有保护作用〔3〕。本实验通过麻醉犬冠状动脉结扎造成心肌缺血模型来考察lys黄酮对缺血心肌的保护作用，为开发具有临床应用价值的抗心肌缺血新药提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品
lys黄酮由吉林大学白求恩医学院提供。地奥心血康(dk)由成都地奥制药集团有限公司生产，批号：0806080。肝素钠由中国惠民生化试剂有限公司生产，批号：100308.戊巴比妥钠由scrc医药集团化学有限公司生产，批号：68020183.
1.1.2 动物
健康成年杂种犬，雌雄兼用，体重12～16 kg，由吉林大学实验动物部提供。
1.1.3 仪器
sc3型电动呼吸机，上海医疗器械厂生产;jem1200ex型透射电子显微镜(日本电子公司);日产olympus bx50显微镜。
1.2 方法
杂种犬24只，随机分为模型组、阳性药组(dk胶囊，50 mg/kg)、lys黄酮小剂量组(30 mg/kg)、lys黄酮大剂量组(60 mg/kg)，每组6只。均采用十二指肠给药方式。各实验组杂种犬经戊巴比妥钠(30 mg/kg)静脉注射麻醉后。仰卧位固定于手术台上，切开颈部皮肤，气管插管，连接人工呼吸机。于左侧第四肋间施开胸术，暴露心脏，剪开心包，行心包术。分离冠状动脉左前降支主干中下1/3交界处，穿线以备结扎制备急性心肌梗死模型。剪去腹部正中毛发，沿腹白线切开上腹部皮肤肌肉，暴露十二指肠，穿线以备给予受试药物。术毕，稳定20 min，结扎冠状动脉，建立实验性急性心肌梗死模型，十二指肠给予受试药物。观察6 h后，处死动物，取1×1×2 mm3大小梗死区心肌组织，经4%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，乙醇系列脱水，epon812包埋，lkbⅲ型超薄切片机半薄切片定位后，超薄切片(70 nm)，双重电子染色。jem1200ex型透射电镜观察心肌细胞超微结构并摄片。取心肌组织，置10%甲醛溶液中固定，常规石蜡切片，苏木素伊红(he)染色，光镜观察〔4〕。
1.3 统计学分析
采用spss13.0统计软件进行分析，资料数据以x±s表示，t检验判断组间差异的显著性。
2 结 果
2.1 lys黄酮对急性心肌缺血犬心肌细胞超微结构的影响
模型组心肌细胞核形状不规则，核内异染色质趋边凝聚;肌丝溶解、断裂、紊乱;线粒体排列紊乱，一些线粒体肿胀，嵴断裂，体积缩小呈凝聚状。阳性药组肌丝排列比较整齐，肌节明暗带结构清晰，肌丝束间可见较多糖原颗粒;线粒体结构基本正常。lys黄酮小剂量组肌丝排列较整齐，局部肌丝呈疏松状改变，明带结构不清楚;线粒体嵴致密，可见脂褐色颗粒。lys黄酮大剂量组肌膜完整;肌丝排列整齐，肌节各带清晰可见;线粒体结构基本正常，可见较多糖原颗粒。表明lys黄酮对急性心肌梗死心肌结构具有减轻作用。见图1。
2.2 lys黄酮对急性心肌缺血犬心肌纤维结构的影响
模型组可见大灶状心肌间质水肿，在间质水肿灶内可见较大范围的心肌纤维胞浆嗜伊红浓染，胞核浓缩，少数肌纤维出现溶解、破坏及少量炎细胞浸润;少数肌纤维呈波浪状排列，心肌病变与其周围正常心肌有一定界限，主要位于心室壁的内、中层，而外层少见。阳性药组心肌间质水肿灶仍存在，但其面积较模型组明显缩小;在这些间质水肿灶内可见肌纤维呈小灶状嗜伊红浓染，胞核浓缩，但未见明显肌纤维溶解破坏;心肌间质水肿区主要分布在心室壁的内层和中层，多呈灶状，少数肌束可见波浪状纤维;心肌间质水肿灶与其周边的正常心肌分界明显。lys黄酮小剂量组心室壁内可见数个较大心肌间质水肿区，其面积较阳性药组稍小，与周围正常心肌纤维分界清楚，这种心肌间质水肿区多呈灶状，并可见较大灶的心肌纤维嗜伊红浓染区，但肌纤维溶解、破坏不明显，病变主要位于室壁的内层和中层。lys黄酮大剂量组心室壁内心肌间质水肿灶的数量和面积较低剂量组及阳性药组明显减少，间质水肿程度亦明显减轻，可见少数心肌纤维呈嗜伊红浓染，但程度明显低于模型组，病灶周围未见炎细胞浸润。表明lys黄酮对心肌缺血有明显的保护作用。见图2。图1 lys黄酮对急性心肌缺血犬心肌细胞超微结构的影响(×10 000)图2 lys黄酮对急性心肌缺血犬心肌纤维结构的影响(×200)
3 讨 论
心肌线粒体是细胞清除氧自由基、进行呼吸作用和能量转换的重要场所，是对心肌缺血异常敏感的细胞器，其提供的能量是细胞生命活动的保证，其结构和功能的完整性是反映心肌损伤的敏感指标〔5〕。当心肌细胞的结构遭到破坏时，线粒体内的自由基大量增加,从而使线粒体合成障碍,导致线粒体功能下降,出现肌膜破损，细胞核消失;肌丝排列紊乱，肌丝溶解、断裂、紊乱;线粒体肿胀，嵴断裂现象〔6〕。电镜实验证实，lys黄酮能够减轻自由基的损害，促进能量代谢恢复，减轻心肌梗死时的心肌损害;抑制线粒体内自由基的增加，减轻心肌细胞超微结构的损伤。同时病理形态学观察到lys黄酮各剂量组心室壁内心肌间质水肿灶的数量和面积较模型组及阳性药组明显减少，间质水肿程度亦明显减轻，可见少数心肌纤维呈嗜伊红浓染，但程度明显低于模型组，病灶周围未见炎细胞浸润，表明lys黄酮能够保护缺血引起的细胞损伤。
【参考文献】
1 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准〔s〕.南宁：广西科学技术出版社，1990.
2 张绪东，蒋伟哲，焦 阳，等. 龙眼参黄酮抗心肌缺血再灌注引起的脂质过氧化损伤的研究〔j〕.时珍国医国药，2008;19(3)：6079.
3 孔晓龙，蒋伟哲.龙眼参提取物对脑缺血再灌注所致损伤的保护作用〔j〕.广西医科大学学报，2004;21(3)：3567.
4 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学〔m〕.第2版.北京：人民卫生出版社，1994：921.
5 王小燕，景桂霞.黄芪预处理对家兔心肌缺血再灌注后心肌线粒体结构及功能的影响〔j〕.西安交通大学学报(医学版)，2008;29(3)：32932.
6 金 辉,吕文伟,崔新明,等.蒲黄总黄酮对急性心肌梗死犬血清中微量元素及心肌细胞超微结构的影响〔j〕.中草药,2008;39(1):978.
