【摘要】 目的 检测孕妇血清中乙型肝炎病毒(hbv)dna的含量,研究母婴传播与hbv-dna含量的关系。找出可致胎儿宫内感染的孕妇血清hbv-dna临界值,以指导临床。方法 选择来我院产检的孕妇,应用elisa法检测hbvm 5项指标,选择hbsag阳性病例再用fq-pcr技术进行hbv-dna定量检测。选出了137例研究对象。同样对137例新生儿的脐血、静脉血分别进行上述两项检测。结果 (1)hbeag阳性组血清hbv-dna含量明显高于hbeag阴性组,差异有显著性(p<0.05),说明hbv-dna含量与hbeag的存在有明显的关系;(2)孕妇血清hbv-dna含量与新生儿静脉血hbv-dna含量呈正相关;(3)当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时,其宫内感染率明显高于含量<105 copies/ml组,hbv母婴传播率差异有显著性(p<0.05)。结论 (1)孕妇血清hbv-dna含量的高低反映hbv垂直感染的强弱,新生儿脐血、外周血中hbv-dna含量与母血含量呈正相关;(2)孕妇血清hbv-dna含量存在影响hbv母婴传播的浓度界面;(3)孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时,其宫内感染率明显增高,可以作为hbv母婴传播的预测指标指导临床。
【关键词】 肝炎病毒 乙型 疾病传播 宫内感染 定量测定
relationship between intrauterine infection and serum hbv-dna concentration in pregnant women
lin jian-chun,wang xue-li,huang qiu-qun.boai hospital of shilong in dongguan,guangdong 523325,china
[abstract] objective to investigate the relationship between serum hbv-dna content in pregnant women and intrauterine infection of their fetuses.methods hbvm was detected by elisa when pregnant women was examined in my hospital,hbv-dna was detected by fq-pcr in hbsag(+) pregnant women,newborn’s cord blood and serum hbv-dna was detected by fq-pcr in 137 hbv-dna(+) pregnant women too.results (1)the contents of hbv-dna in hbeag positive groups were obviously higher than in the hbeag negative groups(p<0.05).(2)the hbv-dna contents of cord blood and serum were positively correlated to those of maternal blood.(3)the intrauterine infection rate in the pregnant women whose hbv-dna contents were more than 105 copies/ml was significantly higher than that whose were less than 105 copies/ml (p<0.05).conclusion (1)the hbv-dna contents of cord blood and serum are positively correlated to those of maternal blood.(2)it seems that the maternal serum critical hbv-dna levels may influence the mother-infant hbv transmission rate.(3)the intrauterine infection rate in the pregnant women whose hbv-dna contents are more than 105 copies/ml is significantly higher than that whose are less than 105 copies/ml.
[key words] hepatitis b virus;disease transmission;intrauterine infection;quantitative determination
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病,流行病学已证实围生期感染的婴儿,85%~90%转为慢性病毒携带者[1]。国内外诸多研究已经证明,孕妇血hbv-dna阳性可以导致胎儿宫内感染,感染的风险随母体血清hbv-dna含量的升高而增高[2~5]。因此,通过监测孕妇血清hbv-dna浓度、降低其含量以减少hbv母婴传播,成为一个引人关注的问题[6]。本研究以hbv-dna阳性孕妇为研究对象,应用荧光定量聚合酶链反应(fq-pcr)技术检测孕妇血清及配对新生儿血清、脐血的hbv-dna含量,探讨孕妇血清hbv-dna含量对hbv母婴传播的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料 对2003年7月~2006年7月在来我院门诊产前检查孕妇,进行hbvm 5项指标检测,对hbsag阳性者进行hbv-dna测定,以hbv-dna阳性者为研究对象。产后留脐血5 ml及婴儿股静脉血3 ml,分离血清后放-70 ℃冰箱保存。先对新生儿脐血hbv-dna进行定量检测。阳性再定量检测外周血hbv-dna,若仍为阳性,则判为宫内感染。
1.2 试验方法
1.2.1 血清免疫学标志物检测 应用elisa检测hbsag、hbsab、hbeag、hbeab、hbcab,乙肝elisa试剂盒由中山生物工程公司生产,按说明书操作。
1.2.2 hbv-dna定量检测 荧光定量pcr检测法,采用ag-9600 amplisensor荧光定量系统(美国biotrom icstechnologies corp提供)测定。试剂由深圳匹基生物工程公司生产,按说明书操作。
1.2.3 结果 表达hbv-dna定量结果以指数形式表示,测定范围为103~1010 copies/ml。
1.3 统计分析方法 全部数据用spss 10.0统计软件处理。采用χ2检验,p<0.05为差异有显著性。
2 结果
见表1、表2。表1 孕妇不同水平hbv-dna与新生儿脐血、外周血hbv-dna阳性例数的关系表2 137例孕妇血清hbv-dna水平与hbeag的关系注:χ2=28.06,p<0.05
2.1 宫内感染的发生情况 137例hbv-dna阳性孕妇所分娩的新生儿,有70例血清hbv-dna检测阳性,宫内感染率为51.1%(表1)。这与文献[7]的记载基本一致。
2.2 妇孕血清hbv-dna的水平与宫内感染的关系 本文所检测的情况表明脐血、血清中的hbv-dna量与产妇中的hbv-dna也存在一个正相关性[8],孕妇血中hbv-dna值越高,新生儿脐血、外周血中的hbv-dna拷贝数越多。随着孕妇血清hbv-dna含量的增高,胎儿发生宫内传染的危险性也增高。由表1可见105~106与106~107和108~109与>109两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著(p>0.05),另三个相邻浓度界面间宫内感染差异具有显著性(p<0.05),当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时,其宫内感染率明显高于含量<105 copies/ml组(p<0.05)[9]。根据孕妇hbv-dna测定值,分别向下累计和向上累计婴儿hbv感染率,以分析孕妇不同hbv-dna浓度界面对hbv母婴传播的影响(表1)。本组资料向下累计和向上累计划分出5个孕妇血hbv-dna测定值界面,hbv-dna测定值在5个界面中hbv母婴传播率的差值差异均有显著性(p<0.05)。平均差值达50%以上。
2.3 新生儿脐血与血清hbv-dna的阳性率关系 新生儿脐血与血清之间hbv-dna的阳性率差异无显著性(p>0.05)。但脐血中hbv-dna的阳性率比血清高,这是由于脐血样本易受母血污染,出现假阳性的几率大,所以不受母血污染的婴儿外周血才是确诊胎儿宫内感染hbv的依据[10,11]。
2.4 孕妇血清hbv-dna的水平与hbeag的关系 137例hbv-dna阳性血清中hbeag阳性率高达76.4%且hbv-dna的含量有宫内感染率均比hbeag阴性者高,两者含量差异具有显著性(p<0.05)。说明这两种血清学标志模式组具有很强的传染性[9]。
3 讨论
孕妇血清中hbv-dna是反映hbv宿主传染性直接指标[12],本研究采用荧光定量pcr技术,配对检测137对孕妇与婴儿hbv-dna含量,不仅显示胎儿脐血、外周血hbv-dna测定值与孕妇hbv-dna测定值呈正相关,亦证明了hbv宫内感染的风险随孕妇hbv-dna测定值增高而上升的观点[2~5],那么,随着孕妇hbv-dna含量的变化,是否存在一个影响hbv母婴传播的浓度界面呢?即孕妇在某一血清hbv-dna水平上下,hbv母婴传播率存在明显差异。由表1可见在105~106与106~107之间,和108~109与>109之间,两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著(p>0.05)。由本组资料向下累计和向上累计可以看出,当孕妇血清中hbv-dna浓度,在<105与>105之间,到<109与>109之间的每一个浓度界面时,宫内感染率差异有显著性,其差值均数为50%以上。说明孕妇hbv-dna含量存在影响hbv母婴传播浓度界面[6]。
hbv易母婴传播,而且多数发生在无症状hbv携带者,由本组资料可见:(1)当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时,其宫内感染率明显高于<105 copies/ml组,而含量<105 copies/ml时,宫内感染率仅为5%以下。因此可将105 copies/ml作为hbv传播浓度临界值,用于预测hbv母婴传播概率。在孕妇妊娠期做血清学及hbv-dna定量监测,当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时,积极进行免疫防护,可极大地降低宫内感染的发生率[9]。(2)当母血hbv-dna>108 copies/ml时,宫内感染率高达97.4%,据报道即使及时注射高效免疫球蛋白(hbig)仍可能有高达43%的宫内感染率[13],据此应加强宣传,提高婚检率,孕前力争使hbv-dna至少降至这一水平以下,最好能降至105这一水平以下,hbv母婴传播的机会将会大大减少,目前迅速降低血清hbv-dna含量已有所突破[14]。随着抗病毒药物的研究进展,拉米呋啶(lamivudine)已显示能有效地抑制hbv在体内的复制[15],这使孕前迅速降低血清hbv-dna含量、减少hbv母婴传播成为可能。
【参考文献】
1 乐杰.妇产科学.北京:人民卫生出版社,2001,171-175.
2 burk rd,huang ly,ho gy,et al.outcome of perinatal b virus exposure is dependent on maternal virus load.j infect dis,1994,170(6):1418-1423.
3 叶庆华.乙肝病毒宫内感染的研究.国外医学·妇产科学分册,2002,29(1):18-20.
4 刘志华,徐德忠,闫永平,等.孕妇血清中乙型肝炎病毒dna含量与胎儿宫内感染的关系.中华妇产科杂志,1999,34 :133-134.
5 lin j,liao s,han jl,et al.correlation between neonatal hepatitis b and maternal serum hepatitis b virus dna copies.pediatr res,2000,47 :342.
6 林坚,廖莳,郭广洲,等.乙型肝炎病毒dna定量在母婴传播中的意义.中华儿科杂志,2002,40(2):84-87.
7 叶维法,钟振义.肝炎学大典.天津: 天津科学技术出版社,1996,298-314.
8 武四云,郭婧婧,陈远林,等.孕妇血清中乙型肝炎病毒复制水平与胎儿宫内感染的关系.中国现代医学杂志,2007,17(3):360-364.
9 高艳杰.母婴血清hbv-dna定量分析及其相关意义.中国医药导报,2007,4(6):16-17.
10 chen yl,tao gs,jiang cj,et al.laboratory study on intrauterine infection of hepatitis b virus.china journal of modem medicine,2004,14(6): 37-40.chinese
11 刘颖琳,邝健全,张睿,等.胎儿感染乙型肝炎病毒的临床研究.中华妇产科杂志,2002,37:465-468.
12 samazaki ar,mitz m,wolf h,et al.detection of hepatitis b virus using amplification of viral dna by means of polymerase chain reaction.j med virol,1989,27 :304-308.
13 李小毛,施敏凤,杨越波,等.孕妇注射乙肝免疫球蛋白阻断宫内传播的研究.中国优生与遗传杂志,2002,10(1) :63-66.
14 de2man ra,heiftink ra,niesters hg,et al.new developments in antiviral therapy for chronic hepatitis b infection.scand j gastroenterol sappl,1995,212 : 100-104.
15 lai cl,chien rn,leung nw,et al.a one2year trial of lamivudine for chronic hepatitis b.asia hepatitis lamivudine study group.n engl j med,1998,339:61-68.