目的 探讨戊己丸及其各单味药对胃肠道内6种常见（条件）致病菌的抑制作用，并比较超微药物与常规药物的抑菌效果。方法 采用药敏纸片法及二倍稀释法研究各药物的抑菌能力及最低抑菌浓度（mic）。结果 黄连水煎液能够抑制除沙门氏菌以外的所有供试菌种；吴茱萸的抑菌谱和抑菌作用相对较小，对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用；白芍仅对金黄色葡萄球菌具有抑制作用。对于药物敏感菌，通过mic比较发现，戊己丸及其单味药超微药剂的抑制效果明显优于常规药剂。结论 戊己丸能够抑制胃肠道内常见（条件）致病菌的生长，且超微粉体能够提高药物的利用度。
　　关键词：戊己丸；超微中药；最低抑菌浓度；抑菌作用
　　基金项目：国家自然科学基金（81173214）；湖南省中医药管理局课题（201250）；湖南中医药大学校级青年教师科研基金（48010101-8）
　　通讯作者：谭周进，e-mail：[email protected]
　　戊己丸系《太平惠民和剂局方》收载名方，由黄连、吴茱萸和白芍3味药组成，戊己丸主治胃痛吞酸、腹痛泄泻。现代研究表明，超微戊己丸对胃肠道内微生物菌群具有明显的调控作用[1-2]，其单味药黄连、吴茱萸和白芍也均具有一定的抗菌作用[3-5]。中药超微粉碎技术[6]是使中药材细胞破碎的粉碎，可将
　　药材粉碎至15 ?m左右，在此种粒径下，不会引起药效物质基础的改变，且可增强药效[7]。本研究选用胃肠道内常见的几种（条件）致病菌为对象，探讨戊己丸及其单味药在体外对供试菌的抑制作用，并比较超微中药和常规中药的抑菌能力，为戊己丸治疗胃肠道疾病机理及超微粉体在中药生产中的应用提供一定的借鉴。www.11665.COm
　　1 材料与方法
　　1.1 药物制备
　　将黄连300 g、炒吴茱萸50 g、炒白芍300 g制成各单味药常规粉和超微粉（0.01～500 ?m粉末），由湖南省中医药研究院中药超微工程技术研究中心鉴定并提供。根据戊己丸组方配比称取戊己丸常规粉和戊己丸超微粉各6.5 g（黄连3 g、白芍3 g、吴茱萸0.5 g），分别添加8倍体积水，均煎煮20 min。1500 r/min离心5 min，去上清液后均浓缩至6.5 ml，即戊己丸水煎液，浓度为1 g原药材/ml。
　　称取黄连、吴茱萸、白芍3味药的常规粉和超微粉各6 g，每味药物均加8倍体积水煎煮20 min。1500 r/min离心5 min，去上清液后均浓缩至6.0 ml，即黄连超微粉、黄连常规粉、吴茱萸超微粉、吴茱萸常规粉、白芍超微粉和白芍常规粉水煎液，浓度均为1 g/ml。
　　1.2 培养基
　　细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；真菌：马铃薯培养基[8]。
　　1.3 供试菌种
　　分别取活化好的白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、产气杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌菌种，接种到对应的液体培养基，摇床50 r/min振荡培养24 h，制成一定浓度（约108～109 cfu/ml）的活菌悬液，备用。
　　1.4 药物对供试菌抑菌效果检测
　　抑菌实验所使用的圆形滤纸片直径均为6 mm，高压湿热灭菌后烘干，备用。取已制备好的浓度为1 g/ml的各药物水煎液，0.7×105 pa灭菌20 min，用于药敏纸片抑菌试验。将滤纸片在药液中浸泡1 h后置于无菌环境晾干备用。将牛肉膏蛋白胨培养基和马铃薯培养基灭菌后倒入无菌培养皿中，待凝固后，分别在对应的培养基中加入0.1 ml已制备好的菌悬液，用涂布棒涂布均匀，将晾干的滤纸片放在培养皿中相应位置。以无菌水代替药液作为对照。每个药物浓度设置3个重复。置于适宜温度下培养24～36 h，量取抑菌圈直径（mm），并求其平均值[9]。
　　1.5 二倍稀释法测定药物最低抑菌浓度
　　采用二倍稀释法，将已制备好的浓度为1 g/ml的各药液稀释为1000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.82 mg/ml。0.7×105 pa灭菌20 min，用于测定药物最低抑菌浓度（mic）。将滤纸片在药液中浸泡1 h后置于无菌环境晾干备用。待培养基在培养皿中冷却后，分别在培养基中加入0.1 ml已配好的菌悬液，用涂布棒涂布均匀，将晾干的滤纸片放在相应位置[8]。每个药物浓度设置3个重复。置于适宜温度下培养24～36 h，量取抑菌圈直径（mm），并求其平均值[9]。
　　1.6 统计学方法
　　采用dps v7.05统计软件进行分析。计量数据用—x±s表示，两组间均数比较用t检验。p<0.05表示差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 抑菌效果
　　采用药敏纸片法对所选样品（1 g/ml）进

抑菌能力测定。抑菌谱最广的为黄连，戊己丸、吴茱萸和白芍。对于大肠杆菌，仅黄连表现出一定的抑制效果，说明戊己丸中抑制大肠杆菌的有效成分主要存在于黄连中，1 g/ml戊己丸水煎液中该有效成分未到达抑制该菌的最低浓度而未表现出抑制效果。对于沙门氏菌，所有样品均未表现出抑菌效果，这与高氏[10]吴茱萸的抑菌效果研究结果不同，可能是由于吴茱萸柠檬苦素等一些具有抑菌作用的内酯化合物不易溶于水，若用醇提样品，抑菌效果可能会更佳。比较超微药物与常规药物抑菌能力可知，对于抑菌能力较强的戊己丸与黄连，超微药物的抑菌能力明显优于常规药物（p<0.05）；而对于相对较弱的吴茱萸和白芍，超微药物与常规药物的抑菌能力差异不大（p>0.05），虽然超微药物的抑菌圈大于常规药物，但两两比较差异无统计学意义（p>0.05）。结果见表1。
　　2.2 最低抑菌浓度
　　2.2.1 戊己丸对供试菌种的最低抑菌浓度 选取1 g/ml戊己丸水煎液对其具有抑制作用的菌种，采用二倍稀释法进行测定，超微戊己丸对白色念珠菌、金黄色葡萄菌和产气杆菌都比较敏感，mic分别为62.5、250、250 mg/ml，均明显低于常规戊己丸对该3种菌的mic（125、500、500 mg/ml）。超微戊己丸与常规戊己丸对绿脓杆菌的mic均为1000 mg/ml（最大药物浓度）。结果见表2。由实验结果还可以看出，由于二倍稀释法稀释梯度比较大，难以准确定位超微戊己丸及常规戊己丸对低敏感菌的mic，若改用稀释梯度较小的药物稀释法，可能能够更好地定位超微戊己丸与常规戊己丸对低敏感菌的mic戊己丸单味药对供试菌种的最低抑菌浓度 对戊己丸3味药中抑菌能力最强且抑菌谱最广的黄连进行mic测定，超微黄连粉对产气杆菌（125 mg/ml）、金黄色葡萄球菌（250 mg/ml）、绿脓杆菌（500 mg/ml）和白色念珠菌（62.5 mg/ml）的mic均小于常规黄连粉，表明超微黄连粉对产气杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑制效果强于常规黄连粉。而同样对于低敏感菌（大肠杆菌），超微黄连粉的mic与常规黄连粉相当。结果见表3。
　　与黄连相比，吴茱萸的抑菌能力次之，仅对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌具有抑制作用。超微吴茱萸粉对金黄色葡萄球菌的抑菌效果（250 mg/ml）明显优于常规吴茱萸粉（500 mg/ml）。对于低敏感菌（绿脓杆菌），超微吴茱萸粉对绿脓杆菌的mic（500 mg/ml）与常规戊己丸（500 mg/ml）相当。结果见表4。白芍抑菌效果最弱，仅对金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制效果，超微白芍粉对金黄色葡萄球菌（250 mg/ml）的mic低于常规白芍粉（500 mg/ml）。结果见表5。
　　3 讨论
　　中药传统丸剂与超微粉碎技术有相通之处，都是粉碎原药材，超微粉碎技术可使药材破壁率大大提高，加快药物的溶解、释放，从而提高其生物利用度[11]。对比研究超微药和常规药的抑菌效果可知，对于药物敏感菌，超微药物的抑制效果明显优于常规药物，而对于相对低敏感菌，超微药物的抑制效果也与常规药物相当。由此可见，超微粉碎技术能够提高药物的利用度。
　　2010年版《中华人民共和国药典》收载戊己丸，其药物组成为：黄连300 g，制吴茱萸50 g，炒白芍300 g。李氏等[2]的戊己丸体内实验结果表明，超微戊己丸能够明显抑制胃内条件致病菌的生长，而对胃内有益菌无影响。本实验结果可作为戊己丸治疗胃肠道疾病的一个辅证。戊己丸及黄连对产气杆菌和白色念珠菌具有很好的抑制作用，而吴茱萸和白芍对其无抑制作用。对于产气杆菌，超微戊己丸（250 mg/ml）和常规戊己丸（500 mg/ml）的mic均高于超微黄连（125 mg/ml）和常规黄连（250 mg/ml），由于药物配伍而使戊己丸中黄连组分含量下降，故单纯黄连的抑制作用强于戊己丸；而仅对黄连表现出抑制作用的白色念珠菌，超微戊己丸（62.5 mg/ml）和常规戊己丸（125 mg/ml）的mic却与超微黄连（62.5 mg/ml）和常规黄连（125 mg/ml）相等，可能是由于药物经配伍后各单味药的有效成分间具有协同作用，从而使戊己丸对肠道真菌（白色念珠菌）的抑制作用增强，具体是哪些有效成分，有待今后进一步研究。
　　参考文献：
　　[1] 江星明，蒋芙蓉，李荣东，等.戊己丸与超微戊己丸药动学血样处理方法比较研究[j].中国现代药物应用，2011，5（1）：20-21.
　　[2] 李荣东，李菁，曾奥，等.超微戊己丸对小鼠胃内微生物的动态影响研究[j].中国微生态学杂志，2012，24（8）：711-714.

>　　[3] 赵淑艳，呼世斌，吴焕利，等.山茱萸提取物抑菌活性成分稳定性的研究[j].食品科学，2008，29（1）：98-100.
　　[4] 杜锐，韩文瑜，雷连成.金黄色葡萄球菌中草药抑制剂的筛选研究[j].中国兽药杂志，2006，40（9）：10-13.
　　[5] hamasaki n， ishii tk. highly selective antibacterial activity of novelalkyl quinolone alkaloids from a chinese herbal medicine， gosyuyu （wu-chu-yu）， against helicobacter pylori in vitro[j]. microbiology and immunology，2000，44（1）：9-15.
　　[6] 孙文格，郑倩，刘凤琴，等.中药超微粉碎技术及粉体特征的研究进展[j].中国药业，2009，18（22）：75-76.
　　[7] 蔡光先，赵迪加，张水寒，等.中药微粉粒度的评价初探[j].中成药，2007， 29（5）：719-722.
　　[8] 赵斌，何绍江.微生物学实验[m].北京：科学出版社，2002：190-220.
　　[9] 文礼章，谭周进，沈佐锐.几种民间药用虫茶浸提液对微生物的影响研究[j].微生物学通报，2002，29（6）：38-40.
　　[10] 高一勇.吴茱萸柠檬苦素提取物的抑菌效果研究[j].广州化工，2011，
　　39（21）：93-95.
　　[11] 蔡光先，李跃辉，杨永华.生脉超微颗粒与其散剂的体外溶出度研究[j].中国医药学报，2004，19（10）：603-606.