【摘要】 目的 建立广藿香挥发油的gc指纹图谱，鉴别不同品种、产地的广藿香。方法 采用气相色谱法建立石牌广藿香、海南广藿香挥发油的gc指纹图谱，并用质谱对其成分进行确认。结果 经过对二者指纹图谱特征的对比以及相似度评价，确立了石牌广藿香与海南广藿香的7个共有峰。结论 该指纹图谱具有较强的专属性，可作为广藿香内在质量评价和鉴定依据。
【关键词】 石牌广藿香 海南广藿香 gcms 指纹图谱 挥发油
广藿香为唇形科刺蕊草属植物广藿香［pogostemon cablin（blanco）benth.］的干燥地上部分，按产地不同分为石牌广藿香及海南广藿香。广藿香原产于菲律宾，现分布于广东、海南、广西、台湾、云南等省区，均为栽培［1］。广藿香含挥发油2%～2.8%，干叶含4.5%，主要成分为广藿香醇（占52%～57%）、广藿香酮，及少量苯甲醛、丁香酚、α与β广藿香萜烯、丁香烯，等。石牌广藿香叶含挥发油0.3%～0.4%，茎含0.1%～0.5%，广藿香酮为石牌产藿香油中的主要成分，也是主要的抗菌成分［2］。广藿香有芳香化湿、和中止呕、发表解暑之功效。石牌广藿香为文献记载的道地药材，其疗效效果明显优于海南广藿香［2］。对于广藿香的质量控制，《中国药典》（2005年版）采用显微、薄层鉴别方法，并作挥发油含量测定。本文运用gc色谱法对二者的挥发油成分进行指纹图谱分析，并运用指纹图谱相似度评价软件对指纹图谱的检测方法进行验证。www.11665.Com
1 仪器与试药
1.1 药材
分别从广东湛江，肇庆，广州广藿香gap产业化基地和海南采收到16批次广藿香药材，药材粉碎成10目粗粉，经我公司检验室工作人员根据其产地和2005版药典鉴别方法鉴定，有9批次为海南广藿香，7批次是香雪制药gap基地石牌广藿香，见表1。正己烷等试剂均为分析纯。
表1 样品来源（略）
tab.1 source of sample
1．2 仪器
agilent 6890n气相色谱仪，手动进样器，检测器：fid；中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004年版（中国药典委员会推荐，湖南中南大学中药现代化研究中心开发）。
2 指纹图谱的建立
2．1 色谱条件
gc色谱条件：弹性石英毛细管柱（agilent hp5，30.0 m×320 μm×0.25 μm）；进样口温度为230 ℃；检测器温度为250 ℃；分流进样（50∶1）；程序升温：初始70 ℃，3 ℃/min升至150 ℃，2 ℃/min升至170 ℃，5 ℃/min升至230 ℃，保持11 min；流速1 ml/min。
质谱条件：电离方式ei,倍增器电压1748 mv，离子室温度180 ℃。
2．2 挥发油提取方法
称取广藿香100.0 g，加10倍量的水，浸泡1 h，加沸石数粒，水蒸气蒸馏法提取5 h，收集挥发油。
2．3 供试品的制备
精密称取广藿香挥发油0.1 g，用正己烷适量溶解，定容至10 ml，即得。
2.4 指纹图谱的建立
精密吸取供试品溶液1 μl, 注入气相色谱仪，记录47 min的色谱图。并将所得质谱数据由质谱数据库检索鉴定，结果见表2。
表2 石牌广藿香挥发油gcms成分鉴定及测定结果（略）
tab.2 the result of identification with pogostemon oil,s components in shipai
2.5 广藿香gc指纹图谱
石牌广藿香与海南广藿香指纹图谱见图1。从图1可见，石牌广藿香与海南广藿香指纹图谱既有较大的相似性，又有其各自的特征性。为了表示图谱特征吸收峰，按占总石牌广藿香gc指纹图谱峰面积2%以上的吸收峰的丰度确定7个吸收峰为广藿香指纹图谱的特征峰（见图1），同一样品量下石牌广藿香图谱峰整体吸收强度明显低于海南广藿香；如果把图谱从约31 min处前后分成两部分：前部分由一组密集的1、2、3、4号弱吸收峰组成，而后部分的5、6、7号强吸收峰充分说明了石牌广藿香与海南广藿香的特征性和专属性，其吸收丰度（以色谱峰面积计）分别占其总峰面积的46.5%、32.3%和5.9%，石牌广藿香图谱后部分由两个强吸收峰组成，且强度大致相等；海南广藿香图谱的后部分却只有广藿香醇一个强吸收峰（5号峰），且峰强度极强，其吸收丰度占其总峰面积的69.7%。对7个共有特征峰的gcms分析结果见表3。
a. 石牌广藿香 b.海南广藿香
图1 gc指纹图谱（略）
fig.1 pogostemon cablin in shipai
表3 广藿香挥发油指纹图谱特征峰gcms定性结果（略）
tab.3 the result of identification with pogostemon oil,s peaks of fingerprint
3 方法学验证
按照指纹图谱相关技术要求，对广藿香指纹gc图谱检测方法进行重复性、精密度和稳定性考察，并采用相似性评价系统软件计算相关系数。
3.1 精密度试验
精密吸取同一样品溶液，连续进样6次，计算相似度rsd为1.05%。
3.2 稳定性试验
精密吸取同一样品溶液，分别在0、1、2、4、6、24、48 h进样，计算相似度rsd为1.21%。
3.3 重复性试验
取同一批号的药材，按供试液制备方法及检测方法操作5次，计算相似度rsd为1.58%。
4 相似度评价
对同一品种广藿香的指纹图谱进行相似度比较，其中9批海南广藿香指纹图谱相似度分别为0.9735、0.8776、0.9472、0.9311、0.6012、0.9065、0.8823、0.8018、0.9501，7批石牌广藿香的指纹图谱相似度分别为0.9892、0.9680、0.9936、0.9812、0.9586、0.94633、0.9115。以上结果可以看出：9批海南广藿香相似度数据中有8批在0.87以上，说明同品种不同产地的海南广藿香药材也具有一定的特征性；7批石牌广藿香均在0.91以上，说明同品种广藿香有较好的相似度；不同品种的广藿香指纹图谱相差较大，而且具有各自的特征性。
5 讨论
5.1 本研究共选择了7个化学成分作为指纹图谱特征峰，以保留时间为主要鉴别参数，但保留时间可能因仪器厂家、色谱柱等条件不同而产生较大的差异，导致指纹图谱的峰形会有所不同，本文采用同一系统做出来的图谱则有较好的重现性。
5.2 采用gcms分析广藿香挥发油中的化学成分［3,4］，不同品种的广藿香挥发油共有约7个共有成分：α愈创木烯、α广藿香烯、δ愈创木烯、7,8二羟基4,5二甲基3二氢萘、广藿香醇、广藿香酮、aciphyllene等，其中以广藿香醇和广藿香酮的含量最高。本研究的指纹图谱所选择的7个峰(包括主要成分或特征性成分)，作为图谱辨认的主要特征峰，能基本达到品种鉴定的效果，但并不能完全揭示不同产地、采集时间、部位、生长期等多种因素的影响的广藿香挥发油的特征，其共同特征还有待进一步深入研究。
（致谢：计算机辅助相似性评价系统软件由中南大学中药现代化研究中心梁逸曾教授提供）
【参考文献】
［1］ 黄泰康.常用中药成分与药理手册［m］.北京：中国医药科技出版社，1994：427-429.
［2］ 罗集鹏，冯毅凡，郭晓玲.石牌藿香的挥发油成分分析［j］．中草药，2001,32(4)：300.
［3］ 罗集鹏,冯毅凡,郭晓玲,等.高要产广藿香挥发油成分分析［j］．中药材，1999，22(1)：25.
［4］ 冯毅凡,郭晓玲,罗集鹏.雷州产广藿香挥发油成分的气相色谱一质谱分析［j］．中药材，1999，22(5)：241.
