【关键词】  蛋白酶激活受体 组织因子 肿瘤

    肿瘤的形成和转移不仅与蛋白酶激活受体2（proteaseactivated receptor2,par2)有关，还与组织因子（tissue factor,tf)密切相关。par2与tf在肿瘤形成和转移时的作用越来越被重视，成为肿瘤治疗研究方面的新靶点，现就par2与tf和肿瘤的关系综述如下。

    1  蛋白酶激活受体2（par2）

    1.1  par2的结构与分布

    蛋白酶激活受体属于g蛋白耦联受体超家族成员之一，具有七个跨膜单位[1]，目前已先后发现有par1、par2、par3、par4四种亚型，其中par1、par3和par4都是凝血酶受体，par2是胰酶受体。1994年首次在鼠dna序列中发现了一种g蛋白耦联受体的基因序列，命名为蛋白酶激活受体2 (protease activated receptor2,par2)。par2由细胞外区(n末端和细胞外袢)、跨膜区(7个跨膜螺旋)及细胞内区(细胞内袢和c末端)组成。人par2基因位于染色体5q13，小鼠par2基因位于染色体13d2，均包含2个外显子和1个内含子，其中内含子为14kb，将2个外显子隔开。人par2是一个由397个氨基酸残基组成的蛋白酶，分子量约50～55kda，与小鼠par2的同源性为83%，与大鼠par2的同源性为85%。WWW.11665.COm

    par2广泛分布于哺乳动物体内，在消化系统、呼吸系统、循环系统、神经系统、前列腺、卵巢等多种器官组织的上皮细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、免疫细胞、中性粒细胞、成纤维细胞、神经元等细胞中均有表达[24]，但不存在于血小板中。

    1.2  par2的激活及功能

    par2可被体内多种内源性激活剂激活，如胰蛋白酶、类胰蛋白酶、膜型丝氨酸蛋白酶1、凝血因子tf/ⅶa复合物、xa等[911]，其中胰蛋白酶是目前发现的最有效的par2生理激动剂。par2裂解产生的新n端充当“栓系配体”并激活par2本身[12]。人工合成的par2选择性激动剂，序列为sligrl(小鼠)和sligkv(人)的小分子多肽，可直接结合到受体第二个环，模拟内源性激动剂的作用而使其激活[13,14]。

    par2被激活后可产生多种生物学效应，包括炎症反应、黏膜保护、扩血管效应、激发唾液分泌和胰腺分泌、调节各种平滑肌张力、特异性调节血管增生以及导致细胞的增殖和迁移等[58]。有关par2激活后介导的信号转导机制尚有待进一步研究，且在不同组织细胞中可能不同。

    2  tf的生物学特性

    2.1  tf的结构和功能

    组织因子又称为凝血因子ⅲ或组织凝血活酶，是分子量为47kda的单链跨膜糖蛋白[15]。tf是因子ⅶ的辅因子和细胞膜受体，它通过与因子ⅶ结合促使其转化为有活性的ⅶa因子，并形成具有蛋白酶活性的tf/ⅶa复合物。tf由263个氨基酸残基组成，包括胞外区、跨膜区和胞质区三个结构域。目前认为，tf胞外区是与凝血因子ⅶ/ⅶa 结合并激发凝血的关键部位[19]，而胞内区则通过末端3个丝氨酸残基磷酸化参与胞内信号转导。人tf基因位于染色体1p211p22，长度为12.4kb。tf的结构基因包括6个外显子和5个内含子，其中外显子为2.3kb。

    tf/ⅶa复合物通过活化凝血因子ⅹ（fⅹ）和因子ⅺ（fⅺ）启动凝血过程，在生理性止血过程中发挥重要作用。近年来研究发现，tf与ⅶa结合后可引起细胞内钙储备的动员、胞内蛋白磷酸化及相关信号途径的转导激活，从而影响动脉粥样斑块形成、炎症反应、肿瘤血管生成、肿瘤细胞转移和胚胎的正常发育等多种病理、生理过程[1618]。

    2.2  tf的分布

    tf广泛分布于各种不同的组织中，在血浆中的含量很低，约80ng/l。正常情况下，血管内皮细胞及血细胞不表达tf，而当某些炎症因子如白细胞介素1、肿瘤坏死因子α等刺激时，血液中的单核细胞及血管内皮细胞可大量表达tf[20]。此外，tf在结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞及肿瘤新生血管内皮细胞异常表达[21,22]。

    3  par2与tf的相互作用

    3.1  tffⅶa激活par2

    细胞表面tf/ⅶa复合物的形成不仅启动凝血级联反应，而且通过激活pars尤其是par2介导细胞信号转导。tf与ⅶa形成复合物直接激活par2，或间接地生成ⅹa单体或tfⅶaⅹa复合物，进而激活par2和par1[23]。daubie等[24]研究发现，骨肉瘤细胞saos2中tffⅶa复合物通过激活par2诱导细胞内ca2＋增多。riewald m等[25]通过western blotting技术发现fⅶa能诱导转染tf和par2 cdna的cho细胞中p44/42 mapk的激活，证明tffⅶa激活par2。在此研究中亦证明tfⅶaxa复合物能激活par2。此外，hjortoe gm等研究表明[26]，在乳腺癌细胞中，par2的特异性抗体能阻断fⅶa诱导的il8基因表达和细胞迁移，而par1的特异性抗体却不能。同样，par2抗体被认为能阻断tffⅶa介导的平滑肌细胞迁移[27]。总之，这些资料表明，tffⅶa可通过激活par2进行细胞信号传递。

    3.2  par2反作用于tf

    par2被特异性激动剂或蛋白酶激活后，可以增强fⅶa诱导的tf内吞作用以及高尔基体内tf的动员，增加细胞表面tf的表达。samir k mandal等[28]通过免疫荧光共聚焦显微镜和生物化学方法发现，大多数tf位于细胞内的高尔基体，fⅶa与成纤维细胞表面的tf结合不仅诱导tf的内吞作用，而且动员高尔基体内的tf池，使tf运输到细胞表面。进一步的研究显示[29,30]，用par1和par2激动剂处理成纤维细胞可增加tf在细胞表面的活性和抗原水平，而par3 激动剂和par4 激动剂对细胞表面tf的活性没有影响。而且，细胞表面tf的活性和抗原表达水平也在暴露于凝血酶和胰蛋白酶的成纤维细胞中轻微地增加。同时，用par2特异性抗体预处理成纤维细胞可以减弱fⅶa介导的高尔基体内tf的动员。此外，用sirna技术使par2受体沉默，可以完全阻断fⅶa介导的高尔基体内tf的动员。这些结果表明，在fⅶa存在的情况下，par2的激活对tf的内吞和在从高尔基体运输到细胞表面过程中起重要作用。

    4  tffⅶa和par2在肿瘤中的作用

    tf除了在凝血过程中发挥作用外，还可能参与多种病理生理过程，其中包括调节血管生成、肿瘤生长和转移。tf参与的信号转导事件也被g蛋白耦联受体家族pars调节，尤其是par1和par2。par2介导的信号转导和凝血事件可能参与肿瘤生物学进展。

    4.1  tffⅶa和par2与肿瘤血管生成

    tf诱导的凝血过程能间接地参与血管生成，例如从活化的血小板中释放正或负调节物，暂时生成纤维蛋白丰富的基质等。altomare df等[31]用酶联免疫实验发现，在肿瘤组织中tf和vegf抗原具有显著的相关性，而在正常粘膜中二者无相关性。knorana aa等[32]用免疫组化检测发现，在胰腺癌组织中tf的表达水平与微血管密度和vegf的表达水平呈正相关，提示其与肿瘤血管生成和肿瘤细胞浸润密切相关。

    tffⅶa诱导的细胞信号转导在调节血管形成中起重要作用。hjortoe gm等[33]的研究表明，tffⅶa复合物通过激活par2诱导il8的生成。先前li a等[34]的研究表明，肿瘤细胞分泌的il8直接通过增强内皮细胞存活率、细胞增殖和基质金属蛋白酶的生成调节血管生成。值得注意的是，尽管许多肿瘤细胞系表达par1、par2和tf，这些细胞与凝血酶或fⅶa反应，但并不都能增加il8的分泌。这个结果表明，细胞表面或细胞内部的其他成分可能使蛋白酶诱导的信号转导表现出更进一步的特异性。在肿瘤细胞和成纤维细胞，tffⅶa介导的信号转导上调ccn1的表达[35]，ccn1是整合蛋白αγβ3在内皮组织的配体。已知整合蛋白αγβ3作为粘附受体参与信号转导，调节多个细胞进程，包括血管生成和肿瘤转移。ccn1与多种整合蛋白相互作用，通过在细胞增殖、迁移和存活中发挥刺激效应，参与血管生成和肿瘤形成[36]。除了ccn1和il8外，tffⅶa诱导的细胞信号转导可能也上调许多包括尿激酶型纤溶酶原激活物受体（upar）在内的其它基因产物，在血管生成中起调节作用。

    tf胞浆区的磷酸化对血管生成具有负调控作用。ahamed 等［37］研究表明，tffⅶafⅹa激活par2诱导tf胞浆区磷酸化，且这种tf胞浆区的磷酸化负调控par2介导的血管生成[38]。belting 等[38]研究表明tf胞浆区的遗传缺失可增强par2介导的血管生成。对于tf胞浆区去除的新生期小鼠，其表面血管丛的直径是野生型小鼠的两倍，表明在产后发育过程中，活体内的tf胞质尾区负调节血管生成。此外，在糖尿病患者的眼组织，尤其是新生血管中，可发现par2和磷酸化的tf的共区域化。

    4.2  tffⅶa和par2与肿瘤转移

    tffⅶa具有促进肿瘤浸润转移的作用。小鼠模型实验证明，肿瘤细胞中的tf促进血源性转移，而且tf胞质区和tffⅶa的蛋白酶活性参与这种转移[39]。tffⅶa的蛋白酶活性在肿瘤转移中的主要作用可能是生成凝血酶和纤维蛋白，直接作用于肿瘤转移。但是，tffⅶa介导的信号转导也参与肿瘤转移，因为它改变了许多与肿瘤转移有关的细胞进程。hjortoe gm等[33]研究表明，在mdamb231细胞中，tffⅶa通过激活par2上调il8的表达，il8能以自分泌的方式刺激肿瘤细胞迁移和侵袭，且par2特异性抗体完全减弱tffⅶa诱导的il8的表达。jiang x等[40]研究显示，在人乳腺癌细胞株adrmcf7中，tffⅶafⅹ a复合物强烈地诱导mapk磷酸化，然后用改良boyden小室法检测发现，tffⅶa介导的人乳腺癌细胞信号转导通过tffⅶafⅹa复合物的形成有效地促进肿瘤细胞转移，且可能通过激活par2强烈地诱导肿瘤细胞转移。morris等[41]用sirna技术使高浸润性乳腺癌细胞的par2受体沉默，结果表明，par2在mdamb231和bt549乳腺癌细胞迁移和侵袭中起重要作用，且作为凝血蛋白酶fⅶa和fⅹa的内源性受体发挥作用。总之，tffⅶa与par2和肿瘤细胞转移密切相关。

    5  结语

    综上所述，par2与tf和肿瘤关系密切。tf在肿瘤血管生成和肿瘤细胞转移中发挥作用，其机制与tffⅶa激活par2诱导细胞信号转导有关。通过深入研究tf与par2和肿瘤的关系，能更全面地认识tf与par2在肿瘤发病机制中的作用，为肿瘤治疗提供新思路。

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