paxillin和survivin在结肠癌中的表达及其意义
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【摘要】 目的：研究paxillin和survivin基因蛋白在结直肠癌中的表达，了解其临床意义。方法：用免疫组织化学sp法检90例结直肠癌组织及30例正常肠黏膜、30例肠腺瘤的paxillin和survivin基因蛋白的表达水平。结果：结直肠癌组织paxillin的阳性表达率为77.8%，高于腺瘤的50.0%和正常肠黏膜的23.3%(p<0.05，p<0.01);有淋巴结转移的paxillin阳性表达率为88.0%，高于无淋巴结转移的65.0%(p<0.01);生存期<5 a paxillin 阳性表达率为90.9%，高于生存期≥5 a的60.5%(p<0.01)。结直肠癌survivin蛋白阳性表达率为75.6%，高于腺瘤的16.7%和正常肠黏膜的10.0%(均有p<0.01);有淋巴结转移的survivin蛋白阳性表达率为90.0%，高于无淋巴结转移的为57.5%(p<0.01);生存期<5 a survivin蛋白阳性表达率为100%，高于生存期≥5 a的67.4%(p<0.01)。www.11665.cOM结论：paxillin和survivin在结直肠癌中高表达，阳性率越高，越易转移，预后越差。
【关键词】 结直肠肿瘤;paxillin;survivin; 转移;预后;免疫组织化学
结直肠癌是发病率最高的消化道肿瘤之一，其复发和转移是一个复杂的生物学过程，涉及多个基因和多种分子变化。随着现代分子生物学技术的发展，人们进一步认识到从肠黏膜正常上皮经过腺瘤到肠癌，上皮细胞涉及了多重基因的遗传及表遗传学改变。其中细胞内蛋白质组成的复杂网络细胞骨架蛋白在肠黏膜各级病变中起着重要的作用。近年的研究表明，恶性肿瘤的侵袭和转移除了细胞外基质的破坏和细胞的移行，还有细胞骨架蛋白的重建和重组。paxillin(桩蛋白)是个黏着斑相关蛋白，具有接头蛋白的活性，在细胞骨架与细胞外基质的黏附及细胞信号传导中起重要作用，是很多不同癌蛋白的共同靶点。survivin是凋亡抑制蛋白家族iaps中最小、作用最强的一个新成员，它既能抑制细胞的凋亡[1]，又能调控细胞周期[2]，在正常胚胎发育过程中有所表达，但在成人终末分化中很少见到(除了睾丸、胎盘和胸腺外)，却在大量恶性肿瘤组织如胃癌、肺癌、子宫内膜癌等表达。为了解paxillin和survivin在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌预后的影响，我们采用免疫组化sp法对结直肠癌组织中paxillin和survivin蛋白表达水平进行检测，并探讨它们与结直肠癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集广东廉江市人民医院和广东湛江中心人民医院2001年1月至2002年12月手术后的结直肠癌组织90例，腺瘤组织30例，并取30例远离癌灶5 cm以上没有癌浸润的正常大肠黏膜作对照。90例结直肠癌中，男52例，女38例，年龄26岁～70岁，平均年龄为(46±11)岁。所有患者术前均未行放疗及化疗。其中有淋巴结转移组50例，无淋巴结转移组40例。所有标本经10%中性甲醛固定液固定，常规脱水，石蜡包埋，切片厚度4 μm，行he染色和免疫组化sp法染色。
1.2 方法 免疫组化染色采用sp法，第一抗体paxillin、survivin以及sp试剂盒均购自福州迈新公司。切片均进行微波抗原修复。染色步骤按试剂盒说明书进行。用已知阳性片作阳性对照，用pbs代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定 paxillin的阳性表达位于细胞质或细胞膜，呈棕黄色。survivin阳性表达位于细胞质内，呈棕黄色细颗粒状。以阳性细胞数占全部肿瘤细胞数的百分比分级：阳性细胞数<10%为(-)，10%～25%为(+)，26%～50%为(++)，>50%为(+++)。
1.4 统计学处理 阳性率比较采用χ2检验。
2 结果
2.1 paxillin在结直肠黏膜病变中的表达情况 见表1。从表1可以看到，结直肠癌组织中paxillin的阳性表达率为77.8%(70/90)，正常肠黏膜中paxillin的阳性表达率为23.3%(7/30)，两者比较，差异有高度显著性(p<0.01);而腺瘤组织中paxillin的阳性表达率介于癌和正常肠黏膜之间，为50.0%(15/30)，分别与此两者比较，差异均有显著性(p<0.05)。
表1 paxillin在结直肠肠黏膜病变中的表达(略)
2.2 结直肠癌组织中paxillin的阳性表达与淋巴结转移的关系 见表1。90例结直肠癌中，有淋巴结转移的50例，paxillin的阳性表达率为88.0%(44/50)，无淋巴结转移的40例，paxillin的阳性表达率为65.0%(26/40),两者比较，差异有高度显著性(p<0.01)。
2.3 结直肠癌组织中paxillin的阳性表达与预后的关系 见表2。本组90例结直肠癌患者中，有65例有随访资料，生存期≥5 a的paxillin阳性表达率为60.5%(26/43)，而生存期<5 a paxillin 阳性表达率为90.9%(20/22)，两者比较，差异有高度显著性(p<0.01)。
表2 结直肠癌组织中paxillin的表达与预后的关系(略)
结直肠癌组织中survivin蛋白的表达：90例结直肠癌组织中有68例survivin蛋白阳性表达，阳性表达率为75.6%。而30例正常肠黏膜仅有3例survivin蛋白阳性表达，阳性表达率为10.0%;两者比较，有高度显著性差异(p<0.01)。腺瘤的survivin蛋白阳性表达率为16.7%(5/30)，与正常肠黏膜的差异不大，与癌的比较差异有高度显著性(p<0.01)。
2.4 结直肠癌组织中survivin蛋白的表达与淋巴结转移的关系 见表3。有淋巴结转移的结直肠癌组织中survivin蛋白阳性表达率为90.0%，无淋巴结转移的为57.5%，两者差异有高度显著性(p<0.01)。
表3 结直肠癌中survivin蛋白的表达与淋巴结转移关系(略)
2.5 结直肠癌组织中survivin蛋白的表达与预后的关系 见表4。90例结直肠癌患者中，有65例有随访资料，生存期≥5 a的survivin蛋白阳性表达率为67.4%(29/43)，而生存期<5 a survivin蛋白阳性表达率为100.0%(22/22)，两者比较，差异有高度显著性(p<0.01)。
表4 结直肠癌组织中survivin蛋白的表达与预后的关系(略)
3 讨论
3.1 paxillin是近年来发现的含有多个结构域的结合蛋白，是整合素家族下游重要的衔接分子，使一些结构和信号分子结合至黏着斑，构成黏着斑的重要组成部分 paxillin既参与整合蛋白介导的信号转导，也参与黏着斑的组装，在细胞黏附和转移中起重要作用。paxillin有参与动态调节焦点黏附、调节细胞的移动和播散等功能;而癌的浸润和转移与细胞的黏附力、移动力的改变直接相关，所以paxillin与癌细胞的浸润和转移必有联系。国内学者潘胜利等[3]研究paxillin在肝癌中的表达时发现，在肝癌中paxillin的表达降低。田素芳等[4]在研究paxillin在胃腺癌中的表达时发现，胃癌组织分化越低，paxillin的表达越高;胃癌分期越晚，paxillin的表达越高。但张春宏等[5]的报道却相反，他们认为，胃癌中paxillin的表达比正常胃黏膜的低，随着分化降低、浸润广泛和淋巴结转移，paxillin的表达越来越低。本文研究发现，在正常肠黏膜，paxillin的表达水平最低(23.3%)，肠腺瘤的较高(50.0%)，而结直肠癌的最高(77.8%);而且淋巴结转移组的paxillin的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组的，生存期<5 a的paxillin阳性表达率显著高于生存期≥5 a的。这些提示paxillin的高表达率与结直肠癌的发生、浸润、转移和预后有关，paxillin的高表达率是结直肠癌预后不良的因素之一。这结论与杨红军等[6]结果相同。
3.2 恶性肿瘤的发生发展与细胞的凋亡失去抑制有关 凋亡抑制基因家族庞大，survivin作为凋亡抑制基因家族的一个新成员，是至今发现的最强的凋亡抑制因子，它可抑制细胞的凋亡，与细胞的增殖、分裂和细胞周期调控密切相关。国外有学者研究表明，survivin广泛表达于人类胚胎发育组织和大多数恶性肿瘤组织，与肿瘤的发生、发展密切相关[7]。survivin通过抑制凋亡通路下游的caspase3和caspase7发挥抗凋亡作用[8]。本组研究结果显示，结直肠癌组织中survivin基因呈高表达，阳性表达率达75.6%，而正常肠黏膜组织中阳性率仅为10.0%;有淋巴结转移患者survivin阳性率明显高于无淋巴结转移患者，提示survivin基因的表达与淋巴结转移呈正相关。随访结果显示，<5 a生存期的survivin阳性率比>5 a生存期的高，提示患者的生存期随survivin阳性率的增高而缩短。本文结果与李春生等[9]报道相似。
【参考文献】
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[2] li f，ambrosini g，chu ey，et al.control of apotosis andmitotic spindle checkpoint by survivin[j].nature,1998,396(6711):580584.
[3] 潘胜利，陈孝平，张万广，等.paxillin和p130cas蛋白在肝癌中的表达及其意义[j].中华外科杂志，2006，44(23)：16481649.
[4] 田素芳，熊永炎，余少平，等.paxillin在胃腺癌中的表达及其临床意义[j].世界华人消化杂志，2003，11(10)：16321634.
[5] 张春宏，耿敬妹.paxillin，vinculin在胃癌及癌前病变中的表达及对胃癌预后的影响[j].诊断病理学杂志，2007，14(5)：377380.
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[9] 李春生，倪灿荣.大肠癌中survivin基因的表达及其相关性研究[j].临床与实验病理学杂志，2003，19(2)：168173.
作者：赖坤兰，邹继彬 作者单位：廉江市卫生职业技术学校，广东 廉江 524400
