作者：刘基柱，严寒静，高晓霞
【摘要】 目的 研究紫玉盘(uvaria microcarpa champ ex benth)茎和叶的显微结构及其内生真菌的分布。方法 采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法。结果与结论 紫玉盘的茎次生构造由周皮、皮层及维管组织组成;次生木质部由轴向系统和径向系统构成，轴向系统由导管和木薄壁细胞组成，径向系统由木射线构成;韧皮部由筛管、韧皮薄壁细胞和韧皮纤维组成，韧皮薄壁组织与韧皮纤维切向相间排列，韧皮射线明显。叶为异面叶，由表皮、叶肉和叶脉3部分组成。内生真菌只侵染皮层薄壁细胞、韧皮部细胞，不侵染木质部;在叶中未发现内生真菌的分布。
【关键词】 紫玉盘;内生真菌;显微结构;石蜡切片;光学显微摄像
abstract:objective the microstructure and distribution of endophytic fungi of the stem and leaves of uvaria microcarpa were studied. methods permanent paraffin sections and light micrography were used. results and conclusion the secondary structure of the stem of uvaria microcarpa consisted of the periderm,cortex and vascular cylinder. axial and radial systems formed the secondary xylem of the stems. vessels and xylary parenchyma cells constituted the axial system,and xylary radial formed the radial systems. the secondary phloem consisted of sieve tubes,phloem parenchymas and phloem fibers. sieve tubes and phloem fibers,scattering in bundles,arranged alternatively in tangential direction. the leaves of uvaria microcarpa were typically bifacial,consisted of epidermis,mesophyll and veins. endophytic fungi existed in the local cells of cortex and secondary phloem in the stems.
key words:uvaria microcarpa; microstructure; endophytic fungi; permanent paraffin sections; light micrography
紫玉盘uvaria microcarpa champ ex benth是番荔枝科(annonaceae)紫玉盘属(uvaria)直立灌木[1]，主产于广东、广西和 台湾 ，常见于低海拔灌木丛中或丘陵山地疏林中。wwW.11665.cOm以根和叶入药，具祛风除湿、行气健胃、止痛、止咳化痰之功效。1982年jolad[2]等以生物活性测试为跟踪手段在番荔枝科紫玉盘属植物uvaria accuminata根部提取物中分离出一种抗癌活性很强的内酯类化合物(uvaricin)，从而引起了 科学 界对番荔枝科植物的关注。但由于该类化合物复杂的化学结构和独特的空间结构，合成的生产成本高、产率低，故仅限于学术研究而无实际生产价值。
近年来，国内外已陆续报道从多种植物中分离获得了产药理活性物质的内生真菌。美国科学家strobel等[3]首次从短叶红豆杉taxus brevifolia nutt.的韧皮部中分离到了菌株taxomyces andreanae，其可在半合成培养液中产生紫杉醇和紫杉烷类化合物，这引发了人们对研究植物内生真菌代谢产物的极大兴趣。目前国内对番荔枝内酯的提取分离和抗肿瘤活性的研究相对较多，但关于番荔枝科植物显微结构方面的报道较少[4]，对番荔枝科植物中内生真菌分布的研究尚未见报道。本文研究了 自然 生长状态下紫玉盘的显微结构及其内生真菌的分布，为今后研究番荔枝科植物的生长发育、内生真菌分布 规律 及次生代谢产物与内生真菌的关系提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
自然生长的紫玉盘取材于广东肇庆市鼎湖山自然保护区,经广东药学院中药学院严寒静副教授鉴定为番荔枝科植物紫玉盘uvaria microcarpa champ ex benth。
1.2 石蜡切片的制作
将紫玉盘的茎和叶于流水下洗净，选取正常、完整的切成2～3 mm长的小段，迅速固定于甲醛溶液乙醇醋酸混合(faa)固定液中，常规石蜡法制片，切片厚度为16～20μm，苯胺蓝染色，中性树胶封片，用carl zesis axio imager.a1显微镜观察并摄影(axiovision release4.6)。
2 结果与分析
2.1 紫玉盘茎的显微特征
紫玉盘茎的次生构造由周皮、皮层和维管柱组成，中央具髓。周皮外侧具残存表皮层细胞,外被星状毛和多细胞单列非腺毛，外壁有疣状突起。随着次生生长的开始，外面的表皮细胞逐渐消失，表皮细胞下面的成熟细胞的细胞壁栓质化加厚。皮层细胞宽，排列疏松;维管束外韧型，韧皮部韧皮薄壁组织与韧皮纤维切向相间排列，在韧皮部外方有许多纤维束，类似帽状，韧皮射线明显;次生木质部比较发达，木化，主要由导管和木射线组成，导管单个或数个径向排列，壁厚，木质化程度高，可见傍管纤维;木射线由1～2列薄壁细胞构成，有的细胞内含草酸钙方晶。髓部大，薄壁细胞发达，有的细胞内含草酸钙结晶，有石细胞分布，孔沟、层纹明显(见图1a-c)。
2.2 紫玉盘叶的显微特征
紫玉盘叶由表皮、叶肉和叶脉3部分组成，典型的异面叶。上表皮细胞1～2列，细胞长方形、类方形、类圆形，外被角质层。下表皮细胞1列，细胞较小，多呈类圆形、扁长圆形，可见较多气孔。栅栏组织由1列排列整齐的短柱状细胞构成，不通过中脉。海绵组织排列疏松，可见纤维单个或2、3个相聚。主脉维管束外韧型类三角形，外围具纤维束环列，主脉具髓部，髓部中央有石细胞群。薄壁细胞有的含草酸钙簇晶及少量砂晶(见图1 d)。
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a.紫玉盘茎显微特征图(×5);b.紫玉盘茎外部横切面的一部分，示表皮和皮层(×40);c.紫玉盘茎横切面的一部分，示韧皮部和木质部(×40);d.紫玉盘茎叶横切面(×10)
2.3 紫玉盘中内生真菌的分布
依据苯胺蓝可将真菌原生质体染成蓝色的特性[5，6]，对苯胺蓝染色的紫玉盘茎连续横切片进行观察。结果从紫玉盘茎的石蜡切片图可看到切片表面有少量真菌菌丝分布，木栓层外部一般都附有一些碎屑，碎屑附近的细胞壁不完整，菌丝可以通过此处侵入到木栓层以内的薄壁细胞内。皮层与韧皮部是真菌侵染紫玉盘的主要场所，形成层也可被真菌菌丝侵染，但木质部细胞未见真菌的侵入。在叶中未发现内生真菌的分布。
3 讨 论
紫玉盘茎由周皮、皮层和维管组织3部分组成，这与双子叶植物茎的次生结构特征相一致。叶由表皮、叶肉和叶脉3部分组成，为典型的异面叶。
内生真菌在紫玉盘茎中的侵染区域主要分布在皮层和次生韧皮部，这与韧皮部细胞中的营养物质比较丰富，有利于菌丝的生长有关。从另一角度来看，菌丝体与植物体是内生关系，皮层在紫玉盘茎中占有较大的比例，细胞壁薄，可消化侵入的菌丝，为紫玉盘的生长提供营养。真菌菌丝不是在整个横切面均匀分布，只是集中在某个区域的细胞中，这与以往的研究报道相一致[7,8]。这种菌丝局域性侵染是否存在一定的选择性，还有待进一步研究。
本研究未在叶中发现内生真菌的分布。 文献 表明，茶树内生真菌的分布在不同的组织间具有明显的组织专化性，在内生真菌的数量和种类上，表现为叶、枝条>花托、种托>种皮、根>芽、种胚、花的明显趋势[9]。内生真菌在叶和枝条中分布较多的原因可能是：叶和枝条由于生长期较长，与飘浮于空气中的真菌孢子接触的机会比较大。而紫玉盘与茶树同为多年生木本植物，在叶中却没有观察到真菌分布，这可能与紫玉盘叶中所含的化学成分有关，其确切原因有待于进一步研究。究竟是哪些因素决定了微生物能否在植物中共生，在何种组织中共生，这是值得深入探讨的问题。
【 参考 文献】
[1] 中科院
