【关键词】 哮喘;类胰蛋白酶;支气管高反应性
1 材料和 方法
1.1 材料 健康雄性豚鼠30只,体质量(250±50) g(第四军医大学实验动物中心);卵白蛋白(ovum albumin,ova)(美国sigma公司);401ai超声雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司);unicap100全自动体外变应原检测仪,unicap tryptase试剂盒(瑞典pharmacia公司);磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司);戊巴比妥钠 (国药集团化学试剂有限公司,批号:f20041117);401ai超声雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司);动物呼吸机 (浙江医科大学医学仪器实验厂);ptm9医用微机实控仪(二道生理仪),rm6280多道智能生理信号记录系统(第四军医大学病理生 理学 教研室提供).
1.2 方法
1.2.1 实验分组及处理 将豚鼠随机分为哮喘模型组和生理盐水组,每组15只. 参照 文献 [1]的方法,给予豚鼠腹腔注射含有100 g/l ova及100 g/l氢氧化铝凝胶的生理盐水1 ml致敏,第15日用10 g/l ova溶液超声雾化激发,每日1次,连续7 d. 每次激发直到豚鼠出现咳嗽、呼吸急促,腹肌紧张等哮喘症状为止. 生理盐水组用等量生理盐水注射和雾化吸入.
1.2.2 类胰蛋白酶测定 各组豚鼠末次激发后,从心脏直接抽血5 ml,立刻置入含edta的抗凝管中混匀,静置30 min后1500 r/min离心10 min,留取血浆-80℃冻存. 采用unicap100全自动体外变应原检测仪及unicap tryptase试剂盒测定血浆中类胰蛋白酶的含量.
1.2.3 气道反应性的测定 参照文献[4]的方法,以气道内压力(ip)上升至基线值的20%时所对应的磷酸组胺浓度(pc20)作为体现气道反应性高低的指标.
统计学处理: 所有数据均以x±s表示. 将原始数据输入spss 11.0统计软件包,组间比较运用采用t检验.
2 结果
哮喘模型组豚鼠在诱喘过程中出现哮喘发作症状,表现为不同程度咳嗽、呼吸急促、腹肌紧张、四肢软瘫、行动迟缓或抽搐跌倒,约30 min后症状逐渐缓解. 生理盐水组豚鼠在整个试验过程中未出现上述症状,其血浆类胰蛋白酶含量(88.78±4.74)较哮喘模型组(119.78±12.50)显著降低(p<0.01). 哮喘组豚鼠pc20值(0.013±0.014)g/l显著低于生理盐水组(0.168±0.186)g/l,差异具有统计学意义(p<0.01).
哮喘的发病机制 目前 被认为与ⅰ型变态反应密切相关,而肥大细胞是介导ⅰ型变态反应的重要成分之一[2-3]. 类胰蛋白酶是肥大细胞含量最多的炎性介质,具有多种生物活性,因此推测类胰蛋白酶在哮喘炎症的发生、 发展 和气道重建中起促进作用[4-5]. 本实验发现哮喘豚鼠血浆中类胰蛋白酶值显著高于对照组,表明哮喘气道中存在肥大细胞脱颗粒过程.
ahr是哮喘的重要特征,是临床诊断哮喘的主要依据. 气道炎症、气道平滑肌细胞反应性及气道重建是哮喘发病机制的三种主要因素. 其中气道炎症为首发因素. 本实验中发现,哮喘模型组豚鼠血浆类胰蛋白酶含量较生理盐水组明显升高;哮喘模型组气道反应性与生理盐水组比较显著升高,提示血浆类胰蛋白酶含量与气道反应性之间存在正相关,这可为哮喘防治策略的制定提供依据.