作者：崔姣,潘苏华,刘成鼎,许惠琴
【摘要】 【目的】 观察银杏内酯b衍生物(xq)对实验性血栓形成的影响。【方法】选用sd雄性大鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1),银杏内酯b(gb)组(剂量为78 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。分别采用颈动—静脉旁路法复制血栓模型及电刺激法复制混合血栓模型,观察xq对血栓形成的影响。选用icr雄性小鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为156 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。采用5腺苷二磷酸二钠盐(adp)致小鼠急性肺血栓模型,观察xq对血栓形成的影响。【结果】xq中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量(与模型对照组比较,p＜005或p＜001),显著延长大鼠混合血栓形成时间(与模型对照组比较，p＜005)。xq高剂量组对小鼠急性肺血栓形成有抑制作用,并可显著缩短小鼠的喘促持续时间(与模型对照组比较，p＜005)。wWW.11665.cOm【结论】 xq具有一定的抗血栓形成作用。
【关键词】 银杏内酯b衍生物/药理学 血栓形成/中药疗法 疾病模型,动物 大鼠 小鼠
abstract: objectiveto observe the effect of ginkolide b derivative (xq) on animal thrombosis. methodssd male rats were randomized into the model group, troxerutin (48 mg·kg-1·d-1) group, ginkolide b(78 mg·kg-1·d-1) group, and low, middle and highdose xq (in the dose of 39, 78 and 156 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. the antithrombotic effect of xq was observed on rats mixed thrombosis model induced by arteriovenous shunt method and electrical stimulation. meanwhile, icr male mice were randomized into the model group, troxerutin (96 mg·kg-1·d-1) group, ginkolide b(156 mg·kg-1·d-1) group, and low, middleand highdose xq (in the dose of 78, 156 and 312 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. the antithrombotic effect of xq was also observed on mice acute pulmonary embolism model induced by adenosine diphosphate (adp).resultsxq at the dose of 78 and 156 mg·kg-1·d-1 decreased the dry and wet weight of the thrombosis, and obviously prolonged the formation time of rats carotid artery thrombosis as compared to the model group (p<005 or p<001). xq in the dose of 312 mg·kg-1·d-1 shortened dyspnea duration in mice with acute pulmonary embolism (p<005 compared to the model group). conclusionxq has certain antithrombotic effect．
key words: ginkolide b derivative/pharmacology;thrombogenesis/tcd therapy;disease models,animal;rats;mice
银杏内酯b是银杏科银杏属植物银杏(ginkgo biloba l.)的提取物,其在心脑血管方面的药用价值已经被全世界所公认［1］。银杏内酯b衍生物(xq)是在母体的基础上增加了水溶性的基团,前期实验研究［2］表明xq体内外给药能抑制血小板活化因子(paf)、5腺苷二磷酸二钠盐(adp)、酸溶性胶原(col)、花生四烯酸(aa)等诱导血小板的聚集。为进一步研究xq的药理作用机制,本实验观察了其对体内外血栓形成的影响,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 受试药物及药品
银杏内酯b衍生物(xq)由南京柯菲平医药科技有限公司提供,批号：060301；银杏内酯b(gb),为白色结晶体,分子量为4244 g/mol,由合肥标品生物技术有限公司提供,批号：051001；曲克芦丁注射液由天津药业焦作有限公司提供,批号：05072721。
1.2 试剂
adp为sigma公司产品,批号：yy1124b056w，氯化钠注射液为南京小营制药有限公司产品,批号：2005090101，戊巴比妥钠由中国医药(集团)上海化学试剂公司(进口分装)提供,批号：f20020405，肝素钠注射液为江苏万邦生化医药股份有限公司产品,批号： 0601101，葡甲胺为成都科东化工有限公司产品,批号：20060320。
1.3 实验动物
雄性清洁级sd大鼠,体质量250～280 g,由中国人民解放军医学动物实验中心(南京军区南京总医院)提供,生产许可证号：scxk(苏)20030004。spf级icr小鼠,体质量20～22 g,乾元浩生物股份有限公司南京生物药厂提供,生产许可证号：scxk(苏)20020030。
1.4 实验仪器
fa2104上皿电子天平为上海精科公司产品，bt873型实验性体内血栓形成测定仪由包头医学院心血管研究室提供，dhg9123a型电热恒温鼓风干燥箱由上海精宏实验设备有限公司提供。
1.5 方法
1.5.1 xq 对颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响 ［3-4］取雄性sd大鼠48只,按体质量随机分为6组,即模型对照组,曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为78 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药,容积为5 ml/kg,连续5 d,模型对照组给予等容积的生理盐水。给药第5天,大鼠以10 mg/l戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉,分离右颈总动脉及左颈外静脉。在3段聚乙烯管中放入1根长约6 cm的4号手术丝线。以50 u/ml肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管腔,当管的一端插入左颈外静脉后,从聚乙烯管注入肝素(50 u/kg),夹住管壁,将管的另一端插入右颈总动脉,然后尾静脉给药。给药5 min后开放血流并计时,15 min后中断血流。迅速取出丝线称质量,用总质量减去丝线质量即为血栓湿质量。将丝线70 ℃烘干,取出称质量,总质量减去丝线质量即为血栓干质量。按下列公式计算抑制率：p抑制,湿质量(%)=(m湿,对照组 – m湿,给药组)/m湿,给药组×100%；p抑制,干质量(%)=(m干,对照组 – m干,给药组)/m干,给药组×100%。
1.5.2 xq对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后混合血栓形成的影响［4-5］分组及给药方法同151项下。给药第5天,大鼠以10 mg/l戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉，分离右侧颈总动脉(长约15 mm)，用塑料薄膜与附近组织隔开,在动脉近心端放刺激电极,远心端下放连接仪器的温度测头，然后尾静脉给药。给药5 min后,打开仪器开关,以16 ma直流电刺激动脉7 min,使刺激部位的血管内皮受损,激活血小板和凝血系统,管腔混合血栓逐渐形成,血流逐渐阻断,当血流完全阻断时,远端温度突降,仪器报警,显示堵塞时间(t堵塞),即血栓形成时间。
1.5.3 xq对adp致小鼠肺血栓形成的影响［6-7］取健康雄性icr小鼠60只,随机分为6组,即模型对照组,曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为156 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药,容积为10 ml/kg,连续5 d,模型对照组给予等容积的生理盐水。末次给药后15 min,按200 mg/kg尾静脉注射adp溶液,形成急性肺血栓(小鼠呼吸喘促、不能自主活动),记录注射adp后至小鼠恢复自主活动的时间。
1.6 统计学方法采用excel软件处理数据。
2 结果
2.1 各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响
表1 结果显示：xq中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量,与模型对照组比较差异有非常显著性意义(p<005或p<001)；曲克芦丁组及gb组也能减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表1各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响（略）
2.2 各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后血栓形成的影响
表2 结果显示：xq 中、高剂量组，曲克芦丁组和gb组均能显著延长血栓形成时间,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表2各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后
血栓形成的影响（略）
2.3 各组对adp致小鼠急性肺血栓形成的影响
表3 结果显示：xq 高剂量组及曲克芦丁组对adp诱发的小鼠急性肺血栓形成有抑制作用,均可缩短小鼠的喘促持续时间,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表3各组对adp致小鼠急性肺血栓形成的影响（略）
3 讨论
大多数心脑血管疾病发生的前提是动脉粥样硬化血栓的形成,血小板的活化在血栓形成过程中发挥重要的作用［8］。血栓形成主要取决于血管内膜受损、血液成分改变及血流异常3个基本要素。血小板活化、黏附、聚集易造成微循环淤滞,还可损伤血管内皮,释放生长因子,促进平滑肌增殖,从而导致动脉粥样硬化［9］。血栓按照发生的部位分为静脉血栓和动脉血栓。静脉血栓主要由于血流缓慢或淤滞,凝血因子聚集而导致血液凝固所引起,富含纤维蛋白和红细胞(红血栓)。颈动—静脉旁路丝线上形成的血栓主要是动脉血栓,主要由于血小板相互聚集所引起,血小板的黏附聚集功能对形成的血栓质量有直接影响,稳定的纤维蛋白和血小板组成白血栓。颈动脉电流损伤法形成的血栓主要是混合血栓,红白血栓两者兼而有之［10-11］。
本研究结果显示：xq能显著抑制实验性动—静脉旁路血栓形成,显著降低血栓干、湿质量,延长电击后混合血栓引起的血管堵塞时间,缩短adp诱发急性肺血栓后小鼠恢复自主活动的时间,表明其抗血栓作用可能与抑制血小板聚集有关。复合血栓诱导剂adp能使纤维蛋白原与相应位点结合,并使血小板内贮存的钙释放,进而促进内源性aa释放而致血小板聚集［12］。xq能使血小板的聚集性减弱,降低血浆黏度,增强纤溶系统,使血小板处于解聚集状态,从而抑制血栓的形成。
由前期实验研究可知,xq抑制血小板聚集的作用是通过拮抗paf受体而实现的,而且其对adp、aa、col诱导的血小板聚集的半数抑制浓度(ic50)高于银杏内酯b［2］。本实验结果也显示了xq在一定程度上抗血栓形成作用较gb强。xq作为银杏内酯b的衍生物,增加了水溶性,并仍然保持相似的生物活性,作为防治心脑血管疾病的新药具有一定的开发前景。
【参考文献】
［1］王璇,张慧灵,顾振纶,等.银杏内酯药理作用的研究进展［j］.中草药,2005,36(11):1741．
［2］ 韦敏,潘苏华,沈建,等. 银杏内酯b衍生物(xq)对paf、adp等诱导血小板聚集的抑制作用［j］.南京中医药大学学报,2007,23(3):179．
［3］ 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学［m］.3版.北京：人民卫生出版社,2002：1281．
［4］ 陈奇. 中药药理研究方法学［m］.北京：人民卫生出版社,1993: 571．
［5］ 姜开余,顾振纶,阮长耿,等. wh505对实验性血栓形成的影响及其作用机制［j］.中成药,2000,22(11):782．
［6］ 李圣青,张艰,戚好文,等. 小鼠肺栓塞模型的诱导及比较［j］. 第四军医大学学报, 2004,25(15):1379．
［7］ 马世平,刘保林,周素娣,等.西红花总苷的药理学研究ⅱ对血凝、血小板聚集及血栓形成的影响［j］.中草药,1999,30(3):196．
［8］ steinhubl s r, moliterno d j. the role of the platelet in the pathogenesis of atherothrombosis［j］. am j cardiovasc drugs,2005,5(6):399．
［9］ 李巍,刘媛,黄艳,等. 维拉帕米对血栓形成及血清一氧化氮水平的影响［j］. 南京医科大学学报,2007,27(10):1080．
［10］吴明海,孙晓明,管靖华,等. 体外血栓形成的机理研究［j］. 北京生物医学工程,2003, 22(2): 143．
［11］ 朱灵,杨春旭,黎渊弘,等. 蝎龙液浸膏体内外对动物凝血功能及血栓形成的影响［j］. 现代中药研究与实践,2008, 22(4): 22．
［12］ leon c, hechler b, freund m, et al. defective platelet aggregation and increased resistance to thrombosis in purinergic p2y(1) receptornull mice［j］. j clin invest, 1999,104(12):1731．
