论文网首页|会计论文|管理论文|计算机论文|医药学|经济学论文|法学论文|社会学论文|文学论文|教育论文|理学论文|工学论文|艺术论文|哲学论文|文化论文|外语论文|论文格式
中国论文网

用户注册

设为首页

您现在的位置: 中国论文网 >> 外语论文 >> 其他相关论文 >> 正文 会员中心
 外语翻译论文   语言文化论文   英美文学论文   其他相关论文   学术英语   商务英语   英语教学
阳和汤加减调节强直性脊柱炎T细胞功能及骨代谢指标的探讨
【摘 要】目的:观察阳和汤加减的调节免疫、抑制关节炎症及骨质破坏的作用,初步从细胞、分子水平分析其部分作用机制。方法:采用蛋白聚糖+弗氏佐剂+寒湿因素病证结合的方法制造as肾虚寒湿型动物模型。采用免疫组织化学技术sp法检测肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-9以及rankl、转化生长因子-β在骨组织中的表达情况。结果:①复方组、桂枝组、麻黄组、鹿角片组与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05),中药组均发挥疗效。②复方组、桂枝组与模型组比较,差异有统计学意义
  (p < 0.05),复方组与桂枝组药效突出。③复方组与桂枝组、麻黄组、鹿角片组比较,差异有统计学意义
  (p < 0.05),复方组疗效优于其他中药组。结论:阳和汤能够从多环节、多方面发挥调节免疫、抑制关节炎症及骨质破坏作用,达到良好的治疗效果。
  【关键词】 脊柱炎,强直性;肾虚寒湿证;阳和汤;肿瘤坏死因子-α;转化生长因子-β;基质金属蛋白酶-9;rankl;免疫组化
  强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,as)属于慢性炎症性血清阴性脊柱关节病,以骶骼关节炎、肌腱端炎和脊柱炎为特点,病变可累及骶髂关节、髋关节、椎间关节等。as的骨质改变一方面表现为特征性慢性炎症部位的新骨形成,另一方面又表现与炎症相关的骨吸收[1],早期就会出现骨丢失、骨破坏,致使大多年轻的as患者也会发生非创伤性的骨质疏松(ostcoporosis,op)及骨折风险增加[2],晚期会导致关节功能障碍,关节畸形。www.11665.com我国发病率约为0.3%,延误治疗将会导致残疾,增加社会负担[3]。因此尽早阻止as炎性骨质破坏,保护关节功能非常重要。
  as的治疗目前仍为一大难题。西医经典治疗方法不良反应较多,远期效果差,生物制剂价格昂贵,又有增加感染、肿瘤的风险机率;中医从提高免疫系统和滋补肝肾方面着手全面调理,配合调和脾胃、袪风通络、活血散寒、消肿止痛,在调节免疫功能、抗炎、镇痛等方面有独特功效,对as有较好的疗效,是目前治疗as行之有效的方法之一。
  阳和汤加减是汪悦教授结合多年治疗as的临床经验总结出来的经验方。药用鹿角胶、熟地黄、麻黄、桂枝、桑寄生、狗脊、蜈蚣、桃仁等,具有温肾散寒、化湿通络之功效,有明显改善症状、减轻关节炎症、抑制及延缓骨质破坏的作用,已运用于临床多年,效果良好,副作用少。
  本研究通过蛋白聚糖免疫balb/c小鼠造模及研究中药对as主要细胞因子及骨代谢指标的影响,进一步探索中医药治疗as安全有效的方法。
  1 实验材料
  1.1 实验动物 balb/c小鼠49只(北京)。
  1.2 试 剂 tgfβ抗体(rabbit polyclonal to tgf
  beta 0.500 mg·ml-1)abcam;tnfa(52b83):
  sc-52746 100?g(santa cruz biotechno-logy,inc.);mmp-9(c-20):sc-6840 200ug(santa cruz biotechnology,inc.);rankl(m)-pr:sc-37270-pr 10 ?m 20 ?l(santa cruz biotechnology,inc.)。原装弗氏佐剂:freund's adjuvant complete弗氏完全佐剂sigmaf 5881 10 ml195 158。
  1.3 药 品 阳和汤加减由南京中医药大学实验室提取,配制成质量浓度216%药液(主要成分:鹿角胶、桂枝、炙麻黄、白芥子、徐长卿、狗脊等)。
  1.4 仪 器 低温冰箱,sanyo公司;溶浆机fsh-i型高速电动匀浆器(中国),c 5 000转·min-1;台式高速冷冻离心机,型号neofuge15r,机身号1107w50104b,标准号q/teuc42-2005,力康发展有限公司;离心机,0052 f-45-12-11,ppendorf公司;全自动组织处理仪tp1020,德国leica公司;石蜡切片机,型号rm2145,德国leica公司;片漂烘温控仪qp-b1;超低温冰箱,anyo(日本);铜槽,hg-9070a型,上海精宏实验设备有限公司;载玻片磨砂边尺寸25.4 mm×76.2 mm,厚度1~
  1.2 mm,thick中国制造;高速冷冻离心机,型号sorvall sho3014,湖南湘依离心机仪器有限公司;超净工作台,型号单人单面sw-cf-1fd,苏州净化设备工程有限公司;匀浆器,型号genemate,杭州晶格科学仪器有限公司;移液枪,型号eppendorf,eppendorf公司;水浴锅,型号hhs-21-4(双列四孔),杭州汇尔仪器设备有限公司;紫外光度仪,型号uv-visible spectrophotometer,shimadzu corporation公司。
  2 方 法
  2.1 软骨蛋白聚糖提取地点 在南京454医院取髋关节置换患

者软骨行软骨蛋白聚糖提取。
  2.2 肾虚寒湿模型造模过程 取7只小鼠作为阴性组,其余造模。加弗氏佐剂完全乳化后注射入小鼠腹腔:佐剂+pg 1.4 ml(pg 0.09 ml),并每天用250 g生物冰放置小鼠笼4.5 h,温度最低达15 ℃,湿度最高达95%,每日用温湿度计检测。造模成功后,分为模型组、复方组、麻黄组、桂枝组、鹿角片组、熟地组,每组7只小鼠。
  2.3 灌胃方法 麻黄组、桂枝组、鹿角片组、熟地组实验小鼠分别按小鼠成人系数9.019折算剂量,对应予中药生麻黄、桂枝、鹿角片、熟地黄中药浓煎灌胃,每日1次,每次0.2 ml·(10 g)-1;
  阴性组予生理盐水灌胃,每日1次,每次0.2 ml· (10 g)-1;模型组予0.2 ml·(10 g)-1生理盐水灌胃;复方组予中药阳和汤加减,按小鼠成人系数9.019折算剂量(约0.5 mg·kg-1),每日0.2 ml·
  (10 g)-1。各组用药均28 d,于第29天取材。
  2.4 观察及取材 观察实验小鼠一般状况、饮食、体质量、精神状况、毛色。均于灌胃43 d后,眼眶后静脉丛取血并分离血清后,置-70 ℃冰箱保存,行软骨组织脱钙。脱钙后、常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。取脊柱、关节行病理组织学切片,行免疫组化法。鼠抗单克隆抗体、基质金属蛋白酶-9(mmp-9)、转化生长因子-β(tgf-β)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、rankl免疫组化试剂(武汉博士得生物有限公司),取脊柱、关节10%甲醛固定,包埋。
  2.5 ihc法检测蛋白表达结果判断 光学显微镜一侧目镜安装细胞计数网格,观察免疫组化阳性细胞的蛋白表达情况及分布情况。细胞呈浅棕色为阳性表达。
  2.6 统计学方法 采用spss 16.0软件进行统计分析。组间光密度及计数的比较采用单因素方差分析,以p < 0.05为差异有统计学意义。
  3 结 果
  熟地组大鼠在灌药时因操作失误均死亡,故无统计数据。
  3.1 tnf-α的表达情况 见表1。
  表1 tnf-α的表达情况
  组别 阳性细胞数 阳性面积 总光密度
  复方组 9.25±1.26 4.88±2.83 40 860.40±2.92
  桂枝组 9.25±4.03 4.25±2.36 36 360.80±3.05
  鹿角片组 10.25±4.03 4.22±2.69 38 029.00±2.91
  麻黄组 12.25±2.99 4.31±8.26 33 050.40±2.69
  阴性组 3.75±1.70 1.40±5.53 533.80±219.84
  模型组 14.75±5.12 6.35±5.61 36 785.20±1.30
  阳性细胞数统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。鹿角片组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,麻黄组、复方组、桂枝组与阴性组比较,复方组、桂枝组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。
  见图1。
  阳性面积统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、模型组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组、鹿角片组、桂枝组、复方组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图2。
  总光密度统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、模型组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组、鹿角片组、桂枝组、复方组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图3。
  结果表明,复方组、桂枝组与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05),复方组与桂枝组药效优于其他组。
  3.2 mmp-9的表达情况 见表2。
  表2 mmp-9表达情况
  组别 阳性细胞数 阳性面积
  (×104) 总光密度
  (×102)
  复方组 40.50±11.47 1.71±0.67 7 2.84±28.29
  桂枝组 38.00± 9.93 4.32±1.94 63.92±28.73
  鹿角片组 23.25± 5.73 5.23±1.47 67.63± 5.30
  麻黄组 21.25± 7.54 5.05±2.37 83.01±15.03
  阴性组 5.00± 0.82 2.49±1.29 32.18± 8.08
  模型组 54.00± 7.07 5.46±3.03 127.07±22.40
  阳性细胞数统计分析显示,复方

与桂枝组、鹿角片组、麻黄组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组比较,差异无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组与阴性组、模型组比较,复方组与阴性组、模型组比较,鹿角片组与阴性组、模型组比较,桂枝组与阴性组、模型组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图1。
  阳性面积统计分析显示,复方组与阴性组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,桂枝组与阴性组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。
  复方组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组、麻黄组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图2。
  总光密度统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。鹿角片组与阴性组、模型组比较,麻黄组与阴性组、模型组比较,桂枝组与阴性组、模型组比较,复方组与阴性组、模型组,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图3。
  结果表明,①阳性细胞数统计分析及总光密度统计分析提示,复方组、桂枝组、麻黄组、鹿角片组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05),中药组均发挥疗效。②阳性面积分析提示:复方组与桂枝组、麻黄组、鹿角片组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05),复方组疗效优于其他组。 3.3 tgf-β的表达情况 见表3。
  表3 tgf-β的表达情况
  组别 阳性细胞数 阳性面积
  (×104) 总光密度
  (×102)
  复方组 8.25±2.87 4.67±1.29 54.41±14.87
  桂枝组 6.25±1.26 3.66±1.32 46.74±13.62
  鹿角片组 7.50±3.87 4.34±1.77 43.94±21.15
  麻黄组 8.00±4.24 4.84±2.05 45.63±16.65
  阴性组 3.25±0.96 1.56±0.83 23.59±15.87
  模型组 11.50±3.10 4.99±1.46 74.84±15.18
  阳性细胞数统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、模型组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、阴性组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组、鹿角片组、复方组与阴性组比较,桂枝组与模型组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图1。
  阳性面积统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、阴性组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组、鹿角片组、桂枝组与阴性组比较,复方组、阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图2。
  总光密度统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。鹿角片组与阴性组、模型组比较,桂枝组与阴性组、模型组比较,复方组与阴性组、模型组比较,麻黄组与模型组、阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义
  (p < 0.05)。见图3。
  结果表明,①阳性细胞数统计分析提示,桂枝组与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05),桂枝组疗效优于其他组。②阳性面积分析提示,复方组与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05),
  复方组疗效优于其他组。③总光密度统计分析提示,复方组、桂枝组、麻黄组、鹿角片组与模型组比较,差异有统计学意义(p < 0.05),中药组均发挥疗效。
  3.4 rankl的表达情况 见表4。
  表4 rankl的表达情况
  组别 阳性细胞数 阳性面积
  (×104) 总光密度
  (×102)
  复方组 13.00±4.24 4.95±1.01 92.39± 8.02
  桂枝组 13.00±3.36 5.30±2.97 76.26±10.97
  鹿角片组 11.50±3.87 5.03±3.29 86.23±54.55
  麻黄组 13.75±4.79 6.09±1.21 73.32±18.47
  阴性组 4.25±0.96 2.00±1.36 23.99±15.85
  模型组 22.50±8.23 4.60±2.53 94.43±61.45
  阳性细胞数统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组

比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。鹿角片组与阴性组、模型组比较,麻黄组与阴性组、与模型组比较,桂枝组与阴性组、模型组比较,复方组与阴性组、模型组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图1。
  阳性面积统计分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、模型组比较,桂枝组与鹿角片组、麻黄组、模型组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。麻黄组、桂枝组、鹿角片组、复方组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05)。见图2。
  总光密度分析显示,复方组与桂枝组、鹿角片组、麻黄组、模型组比较,桂枝组与鹿角片组、模型组、麻黄组比较,鹿角片组与麻黄组、模型组比较,麻黄组与模型组比较,差异均无统计学意义(p > 0.05)。
  麻黄组、复方组、鹿角片组、桂枝组与阴性组比较,阴性组与模型组比较,差异均有统计学意义
  (p < 0.05)。见图3。
  结果表明,复方组、桂枝组、麻黄组、鹿角片组与模型组比较,差异均有统计学意义(p < 0.05),中药组均发挥疗效。
  4 讨 论
  as是一种病因复杂、病程较长、致残性较高的风湿病,近年来现代医学对其治疗方法上的研究进展较快,但新型的生物制剂价格昂贵,而中医药在调节免疫功能、抗炎、镇痛方面有独特作用,在该病的治疗方面也取得了较大的进展。
  as属中医学“痹病”范畴,历代医家多认为肾虚督寒,寒湿痹阻,痰瘀互结是其基本病机。先天禀赋不足是as发病的根本内在因素,《医学衷中参西录·论腰痛治法》中说:“凡人之腰痛,皆脊梁处作痛,以实督脉主之。肾虚者,其督脉必虚,是以腰痛,治斯证者,当用补肾之剂,而引以入督之品,益督丸。”可见肾在as的发展中起了很突出的作用。汪悦教授从医20余年,经过大量临床观察发现,多数as患者均表现为腰脊疼痛,脊柱僵硬,俯仰受限,遇寒加重,喜暖畏寒肢冷,舌暗淡苔薄白或白厚,脉多沉滑或沉弦。故认为临床上as患者多以肾虚寒湿证为主,因寒性收引,其性凝滞,气血受寒,则凝而留滞,经脉不通,不通则痛。强调肾气亏虚,风、寒、湿等外邪入侵,导致肌肉、筋骨、关节等气血运行不畅是本病的病机。因此,汪悦教授提出以温肾散寒、化湿通络为大法,治疗虚寒湿证的as患者。 阳和汤首载于清代王洪绪的《外科全生集》,本意用于治疗阴疽之阴寒证及鹤膝风,其病机是由于营血本虚,寒凝痰滞,痹阻于肌肉、筋骨、血脉、关节而成疽。此与as肾虚寒湿证的病因病机十分相似。脊柱位置处在半表半里,as病在脊柱,故病邪也盘踞在半表半里,治疗如仅用清除里邪之法则可引邪深入,独透表又里邪难除。故宜内清外透结合,在清里基础上外透,让邪有出路,从而达到清除盘踞在半表半里之邪实。汪悦教授根据多年经验,结合临床实际情况,对阳和汤进行加减,去白芥子,加用细辛、独活、桑寄生、蜈蚣、桃仁等,以加强温肾散寒、通络止痛之功效,与临床所遇患者证型更为贴合。现代实验研究表明[4],阳和汤能显著地抑制醋酸引起的小鼠的扭体反应,延长痛觉反应时间,并对二甲苯所致鼠耳肿胀有明显抑制作用,说明该方有良好的抗炎、镇痛作用。现代药理研究显示[5],麻黄的化学成分有化学碱(主要为麻黄碱)、挥发油、黄酮类、多糖类、鞣质及有机酸、氨基酸和矿质元素类等,对细胞免疫有抑制作用。陈荣明等[6]从草麻黄中的不同分离成分中筛选出具有免疫抑制作用的有效部位发现,将草麻黄用70%乙醇提取后的滤过物用水提浓缩得到的沉淀物,能减轻二硝基氯苯所致的小鼠耳廓肿胀,使胸腺萎缩,调整二硝基氯苯所致的血液中t淋巴细胞亚群cd4/cd8的失调,证明其对小鼠的细胞免疫具有抑制作用。saito sy等[7]发现麻黄附子细辛汤中麻黄可以抑制ige的间接组胺释放和增加大鼠嗜碱细胞性白血病细胞的环磷酸腺苷(camp)的含量,而该方中附子、细辛无此作用,并认为麻黄的该抑制作用主要是由有别于麻黄碱、甲基麻黄碱和右旋麻黄碱的其他物质所引起的。kobayashi k等[8]筛选了可以抑制小鼠血浆中淀粉酶活性的天然药物,发现麻黄等9种药物热水提物、醇提物可以抑制小鼠离体血浆淀粉酶的活性,但有强烈剂量依赖性,且腹腔注射和口服均有效。
  本研究通过

蛋白聚糖免疫balb/c小鼠造模和研究证明,阳和汤加减具有调节免疫、抑制关节炎症及骨质破坏作用,阐明阳和汤加减对细胞、分子水平的部分抑制作用。
  as目前尚无肯定的动物模型,本文旨在从发病机理上探讨了方药的作用机理。as属于系统性自身免疫病,免疫系统的紊乱是其发病的主要机制,进而造成多关节炎及脊柱的僵硬和破坏。其体液免疫功能亢进目前已趋于认同,细胞免疫的探讨不多且报道不一。本课题的临床部分提示,as存在细胞免疫功能低下的情况。从本实验结果得出,阳和汤可抑制抗体形成细胞产生和分泌抗体的功能,降低血清抗体水平,抑制亢进的体液免疫;可改善免疫亢进及抑制实验模型的t细胞亚群,说明其可针对不同的免疫状态发挥免疫调节作用,这可能是其良好疗效的主要内在基础。镇痛作用明显、持久, 呈量效相关;对急性、慢性炎症,渗出性、结缔组织增生性炎症均有较强的抑制作用。阳和汤能够从多环节、多方面发挥调节免疫、抑制关节炎症及骨质破坏作用,达到良好的治疗效果。
  5 参考文献
  [1] ei maghraoui a.osteoporosis and ankylosing spondylitis[j].joint bone spine,2004,71:291-295.
  [2] lange u,kluge a,strunk j, et al.ankylosing spondylitis and bone mineral density-what is the ideal tool for measurement?[j].rheumatol in, 2005,26:115-120.
  [3] 吴文,黄国志,陈银海.强直性脊柱炎误诊分析及康复措施[j].中国康复医学杂志,2002,17(5):299-300.
  [4] 黄立中,徐琳本,张晓明,等.阳和汤镇痛及抗炎作用的试验研究[j].湖南中医杂志,2002,18(5):49-50.
  [5] 丁丽丽,施松善,崔健,等.麻黄化学成分与药理作用研究进展[j].中国中药杂志,2006,31(20):
  1661-1664.
  [6] 陈荣明,朱耕新,芝许银.麻黄中不同提取物对细胞免疫的影响[j].南京中医药大学学报:自然科学版,2001,17(4):234-236.
  [7] saito sy,maruyama y,kamiyama s,et al.ephedrae herba in mao-bushi-saishin -to inhibits ige mediated histamine release and increases camp content in rbl-2h3 cells[j].j pharmacol sci,2004,95(1):41-46.
  [8] kobayashi k,saito y,nakazawa i,et al. screening of crude drugs for influence on amylase activity and postprandial blood glucose in mouse plasma[j].biol pharm bull,2000,23(10):1250-1253.
  • 上一篇外语论文:
  • 下一篇外语论文:
  •  作者:佚名 [标签: 阳和汤 调节 强直性脊柱炎 ]
    姓 名: *
    E-mail:
    评 分: 1分 2分 3分 4分 5分
    评论内容:
    发表评论请遵守中国各项有关法律法规,评论内容只代表网友个人观点,与本网站立场无关。
    加味阳和汤治疗阳虚血瘀型系统性红斑狼疮26…
    | 设为首页 | 加入收藏 | 联系我们 | 网站地图 | 手机版 | 论文发表

    Copyright 2006-2013 © 毕业论文网 All rights reserved 

     [中国免费论文网]  版权所有