统计学分析方法确定微波法提取佛手多糖的最佳工艺

佛手（bergamot）又名佛手柑，学名citrus medica l. var.sarcodactylis （noot） swingle，为芸香科柑桔属香橼的变种，长论文联盟绿小乔木或灌木[1]，是传统的名贵中药，其花、叶和果实均可入药，在临床应用上具有悠久的历史。中医认为佛手具有舒肝理气、止咳化痰、和胃止痛等功效，常用于缓解胃腹胀痛和咳嗽气喘等症状。近年来研究发现，佛手多糖能提高机体免疫功能，在抗肿瘤和抗病毒方面具有广阔的应用前景[2]。因此，越来越引起人们的重视。
　　试验设计是考虑如何安排多因素多水平的试验，能合理而高效地获得所需要的试验数据，并用相应的方法分析这些数据，以确定哪些因素的影响是主要的，各因素用什么水平搭配起来对试验的指标是最佳的。试验设计在改进产品配方、降低原料和能源的消耗、提高产品的产量和质量等方面具有广泛的应用。本文以佛手多糖含量为指标，以提取次数、浸提时间、提取功率、料液比为因素，利用正交试验和方差分析方法，通过微波提取，对佛手多糖的提取工艺进行系统研究，确定最佳提取工艺，为合理利用和开发佛手药物资源提供科学依据。
　　1 仪器与药品
　　仪器：u1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），xh-200a型微波萃取仪（北京鸿鹄科技发展有限公司），电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。
　　药品：佛手（长春药材公司），苯酚（开原化学试剂厂）、葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号：1108332200302，供含量测定用）、浓硫酸（胶州市富田化工有限公司）、乙醇（北京化工厂）等，均为分析纯试剂。Www.11665.Com
　　2 方法与结果
　　2.1 方法[3-5]
　　2.1.1 佛手多糖的测定方法 以葡萄糖为标准品，采用硫酸-苯酚比色法。
　　2.1.2 佛手多糖样品液的制备 精密称取1.0 g干燥至恒重的佛手，分别用95%的乙醇和80%的乙醇回流脱脂除糖，置于微波萃取仪内加水提取，将提取液合并，定容于500 ml容量瓶中，即得佛手多糖样品液。
　　2.1.3 标准样品液的制备 精密称取14.71 mg恒重干燥的无水葡萄糖，放入100 ml容量瓶中用水溶解，即得147.1 μg/ml标准样品液。
　　2.1.4 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准样品液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml至10 ml容量瓶中，依次加入1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 ml蒸馏水，再各加1.0 ml 6%苯酚试剂，混匀，精密加入5 ml浓硫酸，振摇后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，立即转入冷水浴中冷却至室温，以蒸馏水为空白，在490 nm波长处测定吸光度，以浓度c为自变量，吸光度a为因变量，进行一元线性回归，得到标准曲线a = 0.040 8c + 0.211，算得相关系数r = 0.998 5，可见两者有高度相关性。
　　2.1.5 佛手多糖样品液的测定 精密吸取佛手样品液1.0 ml，按“2.1.4”项下标准曲线的绘制方法操作。
　　2.2 单因素试验的结果
　　2.2.1 提取次数对多糖得率的影响 选择提取时间8 min，提取功率550 w，料液比1∶20，提取次数分别为1、2、3、4、5次，多糖得率结果见图1。